14种β-内酰胺类抗生素对肠杆菌科细菌的体外抑菌活性比较

刘志华，魏 荣

（1.河北省承德县中医院检验科，河北承德 067000；2.河北省省直机关第一门诊部，河北石家庄 050000）

·论 著·

14种β-内酰胺类抗生素对肠杆菌科细菌的体外抑菌活性比较

刘志华1，魏 荣2

（1.河北省承德县中医院检验科，河北承德 067000；2.河北省省直机关第一门诊部，河北石家庄 050000）

目的评价β-内酰胺类抗生素对革兰阴性杆菌的体外抑菌活性。方法采用琼脂二倍稀释法测定哌拉西林/三唑巴坦等抗生素对临床分离革兰阴性杆菌的最小抑菌浓度（microbial sensitivity testcs，MIC）。结果头孢三代抗生素中以头孢他啶的抑菌作用最强，最差为头孢曲松和头孢噻肟；四代头孢菌素头孢吡肟的抑菌作用优于头孢他啶，酶抑制复方制剂中哌拉西林/三唑巴坦的抑菌作用最强。亚胺培南和美罗培南碳氢酶希类抗生素抑菌作用最强，未发现耐碳氢霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌。结论三代头孢菌素中头孢他啶的抑菌作用最强，与头孢吡肟的抑菌作用相似，酶抑制复方制剂中哌拉西林/三唑巴坦的抑菌作用最强，临床应根据药敏实验结果选择用药。

β-内酰胺类；微生物敏感性试验；肠杆菌科

革兰阴性杆菌是临床常见致病菌，耐多药革兰阴性杆菌所致感染是临床治疗的棘手问题，特别是超级细菌（耐碳氢霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌）报道以来，肠杆菌科细菌的耐药问题逐渐成为临床关注的特点［1］。本研究选择我院肠杆菌作为研究对象，检测临床常用β-内酰胺类抗生素对肠杆菌进行体外抑菌活性，掌握目前肠杆菌细菌的药敏状态，以便更好地指导临床选择抗生素。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株：临床菌株均是2005-2010年从患者的血液、尿液、脓汁和痰临床标本中分离而来，排除同一患者的重复菌株，经API鉴定实验条鉴定后，将各菌株制成108～109CFU/ml菌液，备用。其中大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（extend spectrum Beta-lactamases，ESBL）阳性菌（ESBL+）56株，大肠埃希菌ESBL阴性菌（ESBL-）112株，肺炎克雷伯菌ESBL阳性菌（ESBL+）56株，肺炎克雷伯菌ESBL阴性菌（ESBL-）112株，阴沟肠杆菌56株，质控菌株为大肠埃希菌25922。

1.1.2 药物：阿莫西林/棒酸（珠海联邦制药股份有限公司生产），氨苄西林/舒巴坦（浙江迪耳药业有限公司生产），哌拉西林（齐鲁制药厂生产），哌拉西林/三唑巴坦（珠海联邦制药股份有限公司生产），头孢哌酮（华北制药有限公司生产），头孢哌酮/舒巴坦（辉瑞制药有限公司生产），头孢噻肟（珠海联邦制药股份有限公司生产），头孢噻肟/舒巴坦（湘北威尔曼制药有限公司生产），头孢曲松（瑞士罗氏有限公司生产），头孢他啶（上海新先锋药业生产），头孢吡肟（中美上海施贵宝制药有限公司生产），亚胺培南（美国默沙东公司生产），美罗培南（深圳海滨制药生产）。

1.1.3 培养基：Mueller-Hinton琼脂，由法国Biomerieux公司生产。

1.1.4 多点接种仪：北京医科大学昆仑药物发展研究所生产。

1.2 方法

1.2.1 二倍琼脂稀释法：采用二倍琼脂稀释法测定最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration， MIC）。先将抗生素分别以无菌磷酸盐缓冲液倍比稀释成10个浓度，将各浓度的药液各10mL分别加入到已融化并冷却至50℃左右的90mL M-H琼脂中，混匀后立即倾注平皿，使培养基的抗生素最终浓度依次为0.5、1、2、4……256mg/L。用微量多点接种仪将108～109CFU/mL菌悬液接种到含不同浓度抗生素的上述琼脂平板表面，置35℃培养24h观察结果，以抑制细菌生长的最低抗生素浓度确定为MIC。并根据抗生素药物敏感的临界浓度，计算对细菌的敏感率。

1.2.2 ESBL的确证实验［2］：根据临床实验室标准委员会（clinical and laboratory standard institute，CLSI）2010推荐的方法及判断标准进行检测。

2 结 果

大肠杆菌ESBL的阳性率52.3%，肺炎克雷伯菌的ESBL阳性率44.5%。

14种β-内酰胺类抗生素及其复方制剂的抑菌效果比较：青霉素类抗生素中以哌拉西林/他唑巴坦的抑菌效果最好；三代头孢菌素中以头孢他啶的作用最强，其次为头孢哌酮/舒巴坦，最差为头孢曲松和头孢噻肟；四代头孢菌素头孢吡肟的抑菌作用优于头孢他啶；亚胺培南和美罗培南碳氢酶希类抗生素抑菌作用最强。见表1。

表1 14种β-内酰胺类抗生素对肠杆菌科细菌抑菌效果的比较Table 1 In vitro antibacterial activities of beta-lactam antibiotic against clinical Enterobacteriaceae（%）

3 讨 论

革兰阴性杆菌是临床常见致病菌，多重耐药革兰阴性杆菌所致感染是临床治疗的棘手问题，耐多药革兰阴性杆菌主要耐药机制是产生β-内酰胺酶［3］。β-内酰胺酶能够破坏渗透入菌体内的β-内酰胺类抗生素的活性［4］。目前，细菌所产的β-内酰胺酶Abmler依据分子生物学的序列分析可分为A、B、C、D四大类。大部分ESBL属于A类酶，ESBL是由质粒介导的超广谱β-内酰胺酶，主要基因型为TEM类、SHV类，此类基因型除可水解青霉素类和第一、二代头孢菌素，还可以水解第三代头孢菌素及单环内酰胺类抗生素如氨曲南，但对头霉素类和碳青霉烯类无影响，酶抑制剂克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦对其有抑制作用。常见于肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌和少数肠杆菌属细菌［2］。治疗上可用头霉素类和碳青霉烯类抗生素和含酶抑制剂抗生素［5］。

本研究中选择临床常用14种β-内酰胺类抗生素及其复方制剂作为研究对象，进行抑菌效果比较，结果表明青霉素类抗生素中以哌拉西林/他唑巴坦的抑菌效果最好；三代头孢菌素中以头孢他啶的作用最强，其次为头孢哌酮/舒巴坦，最差为头孢曲松和头孢噻肟；四代头孢菌素头孢吡肟的抑菌作用优于头孢他啶；所有检测的抗生素对产ESBL的细菌的敏感性都低于非产ESBL的细菌。因此，ESBL的检测对临床用药有重要的指导价值。自耐碳氢霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌报道以来，引起医学界的高度重视［6-7］。亚胺培南和美罗培南碳氢酶希类抗生素抑菌作用最强，未见耐碳氢霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌，这与相关报道类似［8-9］。

由于广谱抗生素的长期应用，革兰阴性杆菌产生酶的种类和耐药性也在不断变化，因此，临床医师一定要了解本院感染疾病常见的酶的分布及耐药情况的变迁，合理应用抗生素，减少细菌耐药性的产生，从而提高临床疗效。

［1］ YANG Q，WANG H，SUN H，et al.Phenotypic and genotypic characterization of Enterobacteriaceae with decreased susceptibility to carbapenems：results from large hospital-based surveillance studies in China［J］.Antimicrob Agents Chemother，2010，54（1）：573-577.

［2］ 汪夏，朱德妹，胡付品，等.2009年中国CHINET细菌耐药性监测［J］.中国感染与化疗杂志，2010，10（5）：325-334.

［3］ 肖永红，王进，赵彩云，等.2006-2007年Mohnarin细菌耐药监测［J］.中华医院感染学杂志，2008，18（8）：1051-1056.

［4］ KRAKER ME，WOLKEWITZ M，DAVERY PG，et al.Burden of antimicrobial resistance in European hospitals：excess mortality and length of hospital stay associated with bloodstream infections due to Escherichia coli resistant to third - generation cephalosporins［J］.J Antimecrob Chemother，2011，66（2）：398-407.

［5］ 朱德妹，汪复，胡付品，等.2010年中国CHINET细菌耐药性监测［J］.中国感染与化疗杂志，2011，11（5）：321-329.

［6］ KAHLMETER G. Breakpoints for intravenously used cephalospporinsin enterobacteraceae-EUCAST and CLSI breadpoints［J］.Cin Microbiol Infect，2008，14（Suppl 1）：169-174.

［7］ 刘文静，杨启文，徐迎春，等.2010年CLSI三代头孢菌素折点改变对我国大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌药物敏感性结果解释的评估［J］.中华检验医学杂志，2010，33（10）：942-947.

［8］ 时东彦，赵建宏.2008年河北医科大学第二医院临床分离菌分布及耐药谱型监测［J］.中国感染与化疗杂志，2011，11（1）：57-60.

［9］ 时东彦，赵建宏，杨敬芳，等.2004-2005非重症监护病房革兰阴性杆菌分布及耐药性监测［J］.临床荟萃，2007，22（12）：887-889.

（本文编辑：刘斯静）

IN VITRO ANTIBACTERIAL ACTIVITIES OF Beta-LACTAM ANTIBIOTICS AGAINST CLINICAL ENTEROBACTERIACEAE

LIU Zhihua1，WEI Rong2
（1.Deparment of Laboratory，Traditional Chinese Medicine Hospital of Chengde County，Hebei Province，Chengde 067000，China；2.The First Out-Patient Department of Hebei Provincial Institution，Shijiazhuang 050000，China）

ObjectiveTo evaluate in vitro antibacterial activities of Beta-lactam antibiotic against clinical Enterobacteriaceae.MethodsThe minimal inhibitory concentrations（MIC）of antibiotic against clinical isolates of bacteria was tested by standard agar dilution method.ResultsThe antimicrobial action of ceftazidine was the strongest against Enterobacteriaceae among the third generation cephalosporins；cefepimewas more activecompared with ceftazidine.Antibacterial activities of piperacillin/tazobactam was the strongest among β-Lactamaseinhibitors.Resistant strain to carbapenems was not found.ConclusionThe surveillance of antimicrobial resistance was very important for guiding rational antimicrobial therapy.

Beta-lactams；microbial sensitivity tests；enterobacteriaceae

R446.5

A

1007-3205（2012）09-1042-03

2012-02-23；

2012-05-07

刘志华（1975-），女，满族，河北承德人，河北省承德县中医院检验师，医学学士，从事临床检验学研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.09.020