声门上型喉癌CT表现与c-Met、MMP-2表达的关系

王乐秋 蔡胜艳 张建波 郝艳坤 隋萍萍

声门上型喉癌CT表现与c-Met、MMP-2表达的关系

王乐秋 蔡胜艳 张建波 郝艳坤 隋萍萍

目的探讨c-Met和MMP-2在人声门上型喉癌组织中的表达与其CT的关系。方法收集48例声门上型喉癌患者的CT图像及癌组织标本，分别采用原位杂交方法检测其c-Met基因及用免疫组化法检测MMP-2基因，分析检测结果与CT图像的关系。结果声门上型喉癌原发灶不同范围的c-Met、MMP-2基因表达差异无显著意义（P＞0.05）。而CT显示有无侵袭会厌前间隙、会厌谷、梨状窝、喉咽侧壁、声带以及有无颈淋巴结转移各组中c-Met、MMP-2基因的表达差异有显著性（P＜0.05）。结论c-Met、MMP-2基因表达的异常在喉癌细胞的增殖、发展及转移中起重要作用，其阳性表达与声门上型喉癌的侵袭与转移密切相关，可成为声门上型喉癌预后不良的标志。

声门上型喉癌；基质金属蛋白酶-2；肝细胞生长因子受体；侵袭与转移；CT

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，其发病率约占全身恶性肿瘤的 5%[1]。目前喉癌的物理诊断方法之一为喉部CT扫描，是确定肿瘤侵犯喉范围的有效手段。早期声门型喉癌的预后较好，五年生存率可达 70%以上，但仍有很多声门上型喉癌直至晚期才被发现，五年生存率降至 50%左右。肿瘤的局部复发、淋巴结转移及远处转移是影响喉癌患者预后的主要因素[2]。c-Met、MMP-2的高表达与多种肿瘤的发生、发展相关性的研究较多，但其与喉癌CT表现在国内尚无报道。因此，结合临床资料进行回顾性分析，做此项研究以探讨 c-Met和MMP-2在人喉癌组织中的表达与喉癌CT的关系及其对喉癌患者预后的影响。现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料收集本院红旗医院2009～2011年接受64排螺旋CT检查的声门上型喉癌患者手术切除的喉癌组织标本48例。其中男31例，女17例，年龄48～78岁，平均58岁。所有患者术前均未接受过任何系统的放疗和化疗。

1.2 64排螺旋CT扫描方法采用Aquilion64排螺旋CT扫描机。扫描条件：120kv，200mAs，层厚0.5mm。48例患者均行横断扫描，以舌骨上0.5cm开始向下至环状软骨连续切层，层厚及层间距均为3mm。根据某一CT表现的有无进行对应分组：会厌喉面根部单侧肿块组26例和多侧肿块组22例；会厌前间隙有侵袭组34例和无侵袭组14例；会厌谷有侵袭组33例和无侵袭组15例；梨状窝有侵袭组32例和无侵袭组16例；喉咽侧壁梨状窝有侵袭组30例和无侵袭组18例；声带有侵袭组37例和无侵袭组11例；颈淋巴结转移组28例和无颈淋巴结转移组20例。

1.3一般组织学处理组织标本均经 4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，PH7.3）固定（其中含0.1%DEPC），常规石蜡包埋，厚4um连续切片。

1.4主要试剂与方法

1.4.1 c-Met基因原位杂交检查采用武汉博士德公司的地高辛标记及检测原位杂交试剂盒，设阳性对照和阴性对照。

1.4.2 MMP-2的免疫组化检测兔抗人MMP-2单克隆抗体为武汉博士德公司的产品，采用SABC法，经高温高压抗原修复，严格按照操作规范进行。设置阳性和阴性对照以保证染色结果的可靠性。阳性对照为阳性对照片，阴性对照用PBS代替一抗。

1.5结果判断

1.5.1原位杂交结果判定以细胞膜和/或细胞浆中出现清晰棕黄色颗粒着色为c-Met基因表达阳性显色。

1.5.2免疫组化染色结果判定MMP-2阳性为细胞浆着色且呈棕黄色或黄褐色，视野中肿瘤细胞的20%以上被染色判定为阳性。

1.5.3特异性免疫反应强度分级标准阳性细胞＜5%为阴性(-)；阳性细胞5%～25%为弱阳性(+)；阳性细胞25%～50%为中度阳性(++)；阳性细胞＞50%为强阳性(+++)。

1.6统计学分析对c-Met、MMP-2基因表达与喉癌的关系进行χ2检验，P＜0.05为差异有显著意义。

2 结果

喉癌与c-Met、MMP-2基因表达的关系，见表1。声门上型喉癌原发灶不同范围的c-Met、MMP-2基因表达差异无显著意义（P＞0.05）。而 CT显示有无侵袭会厌前间隙、会厌谷、梨状窝、喉咽侧壁、声带以及有无颈淋巴结转移各组中 c-Met、MMP-2基因的表达差异有显著性（P＜0.05），并且有侵袭组两基因均呈高度表达（均在80%以上）。

表1 喉癌与c-Met、MMP-2基因表达的关系

3 讨论

头颈部恶性肿瘤的发生率约为14/10万，占全身恶性肿瘤的16%～40%，5年生存率大约35%～60%[3]。以往的研究表明c-Met编码的酪氨酸激酶活性受体蛋白，与多种癌基因产物和调节蛋白相关，参与细胞信息传导、细胞骨架重排的调控，是调节细胞增殖、分化和运动的重要因素。目前认为，c-Met的激活与多种肿瘤的发生发展有密切关系。MMP-2亦称IV型胶原酶或称明胶酶A，其主要功能为降解IV型胶原，因而它在肿瘤细胞突破基底膜屏障和浸润转移中起着重要作用[4-7]。另有多项研究表明，在肝癌、喉鳞癌、胃癌、大肠癌、乳腺癌、肺癌、泌尿系统等多种肿瘤中MMP-2有较高表达[6,8,9]。本研究表明，声门上型喉癌的CT征象与c-Met、MMP-2基因表达密切相关，虽然其原发灶范围大小与c-Met、MMP-2基因表达无关，但其癌组织中两基因的阳性表达率为61.54%～68.18%；同时可见随着声门上型喉癌CT表现的其浸润和转移越显著。c-Met、MMP-2基因表达越强，提示此两基因的表达与喉癌呈正相关，因此c-Met、MMP-2基因表达的异常在喉癌细胞的增殖、发展及转移中起重要作用，可成为喉癌预后不良的标志。

[1]Sanderson RJ ronside JA.Squamous cell carcinomas of the head and neck[J].BMJ,2002,325 (7368):822-827.

[2]Cosetti M,Yu GP,Schantz SP.Five-year survival rates and time trends of laryngeal cancer in the US population Arch[J].Otolaryngol Head Neck Surg,2008,134(4):370-379.

[3]屠规益,韩德民.当前头颈肿瘤科研应着重临床实用[J].中华耳鼻咽喉科杂志,1997,32(2):131-132.

[4]陈念生,史景泉.肿瘤分子细胞生物学[M].北京:人民军医出版社,2002-1(l).

[5]纪小龙,施作霖.诊断免疫组织化学[M].北京:军事医学科学出版社,1997:43-70.

[6]林炳煌,王进胜,陈甘章,等.基质金属蛋白酶MMP-2表达与乳腺癌转移及顽后的关系[J].中国肿瘤临床,2002(5):322-324.

[7]李玉林,寇伯君,吴珊,等.层粘连蛋白受体和nm23蛋白在乳腺癌组织中的表达及莽其间质微血管免疫和肿瘤转移的关系[J].中华病理学杂志,2000:168-171.

[8]Mccawley LJ,Matrisian LM.Matrix metallo Proteinases: Multifunctional Contributors to tumor progression[J].Mol´Med,2000,6(4):149-156.

[9]肖宽林,王薇,王纾宜,等.MMP-2与TIMP-2的比值与喉癌转移的关系[J].临床耳鼻咽喉科杂志,2000(9):422-423.

Supraglottic carcinoma CT and c-Met、the relationship of the expression of MMP-2

Wang Leqiu Cai Shengyan Zhang Jianbo Hao Yankun Sui Pingping

ObjectiveStudy of c-Met and MMP-2 on vocals door type laryngeal carcinoma and its relation to CT.MethodsCollected 48 cases of supraglottic laryngeal carcinoma CT image and cancer tissue specimens,respectively,using in situ hybridization methods for the detection of the c-Met gene and by immunohis tochemistry Assay for detection of MMP-2gene,analysis of test results and the relationship between CT image.ResultsSupraglottic carcinoma primary different ranges of c-Met,MMP-2 gene expression had no significant difference (P＞0.05).But CT showed no invasion preepiglottic space,epiglottic vallecula,piriform fossa,hypopharyngeal side wall,vocal and without cervical lymph node metastasis in groups c-Met,MMP-2gene expression differences are significant (P＜0.05).Conlusion C-Met,MMP-2 abnormal gene expression in laryngeal cancer cell proliferation,development and play an important role in metastasis,its expression and supraglottic carcinoma invasion and metastasis is closely related to carcinoma of the supraglottic larynx,can be a sign of a poor prognosis.

Supraglottic Cancer; MMP-2; c-Met; lnvasion and metastasis; CT

牡丹江医学院红旗医院耳鼻咽喉科，黑龙江牡丹江 157011

王乐秋（1978-）女，牡丹江医学院红旗医院，黑龙江省牡丹江市，邮箱：mdjwangleqiu@163.com。