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云南省个旧市女性宫颈HPV感染及基因分型的研究

2012-04-29倪兵朱顺挥史文娟赵芸谷庆节马继云张明段能

中国现代医生 2012年12期
关键词:宫颈病变人乳头瘤病毒

倪兵 朱顺挥 史文娟 赵芸 谷庆节 马继云 张明 段能

[摘要] 目的 分析云南省个旧市妇女HPV感染状况,探讨HPV感染与宫颈病变程度的关系。 方法 用导流杂交基因分型技术对2 058例有性生活妇女的宫颈脱落细胞标本进行21种HPV基因分型检测。 结果 2 058例标本中有20种HPV亚型被检测出,HPV总感染率为23.9%,高危型占76.0%,低危型占24.0%,检出前五位亚型依次为HPV52、16、58、18和CP8304。宫颈病变组HPV感染率、高危型HPV及HPV16亚型感染率显著高于病理检查正常组,且随宫颈病变程度的加重感染率显著增高(P < 0.05)。 结论 个旧市妇女HPV感染率为23.9%,高危型HPV尤其是HPV16可能是导致宫颈病变的主要型别。

[关键词] 人乳头瘤病毒(HPV);宫颈病变;基因分型

[中图分类号] R730.261[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701(2012)12-0001-03

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在全球妇女肿瘤中仅次于乳腺癌,位居第2位。HPV感染与宫颈肿瘤的发生、发展密切相关,高危型HPV的持续性感染是导致宫颈癌及癌前病变的主要致病因子,约20种以上的HPV亚型与宫颈癌的形成有关,且不同的地区、不同的种族HPV的感染率和亚型分布有所不同,导致宫颈病变的发生及病变程度有所差异。因此明确HPV在特定地区及不同病变宫颈组织的感染率及亚型分布差异,对HPV所致疾病的防治及HPV疫苗开发应用有着重要的指导意义。为了解云南省个旧市HPV感染状况及亚型分布规律,本研究采用导流杂交基因芯片技术对2 058例妇科首诊人群的宫颈脱落细胞标本进行21种HPV基因分型检测,探讨HPV亚型感染与宫颈病变发生发展的关系,为本地区宫颈癌的预防、高危人群筛查和特异性疫苗的研制提供一定的实验依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

2 058例标本取自2010年6月~2011年9月我院妇科首诊患者,年龄19~75岁,平均(40.5±9.1)岁。患者纳入标准:①未行子宫切除手术;②就诊时处于非妊娠状态;③就诊前48 h内无性生活;④就诊前24 h内无阴道处理。所有研究对象均知情同意并自愿参加。按病理确诊结果分为病理检查正常组(354例)、慢性宫颈炎组(77例),宫颈上皮内瘤变组(包括CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ)(44例)和宫颈癌组(16例)。

1.2 方法

1.2.1 标本采集及保存由医生以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈,用棉签擦去宫颈分泌物,然后使用专用的HPV采样刷置于宫颈口2~3 cm,顺时针旋转3~5圈,慢慢取出宫颈刷,将其放入有专用细胞保存液的样本管中,折断多余的刷柄,拧紧瓶盖,注明编号和日期。置于4℃存放,并在一周内完成检测。

1.2.2 HPV分型①DNA提取:取保存有宫颈细胞的细胞保存液0.5 mL,以14000 r/min离心5 min,弃上清液后,用DNA提取试剂盒提取标本DNA。②PCR扩增:PCR反应体系为25 μL,包含:23.25 mL PCR-Mix,0.75 μL DNATaq酶,1 μL DNA模板。凯普基因扩增仪扩增程序为:95℃预变性9 min;95℃20 s→55℃30 s→72℃30 s共40个循环,72℃延伸5 min。③杂交过程:导流杂交前,将PCR扩增产物热变性95℃ 5 min,然后冰水浴≥2 min,同时将固定有核酸探针的膜固定在杂交仪上,加入0.8 mL杂交液预杂交≥2 min后排干,加入0.5 mL杂交液,把PCR产物加到薄膜上与杂交液混匀,进行导流杂交≥10 min,清洗除去未结合的DNA,整个杂交过程保持在45℃。预封阻后用封阻液封闭膜,孵育5 min,排出封阻液后加入酶标液,25 ℃温育3.5 min。④显色过程:用A液彻底冲洗膜,除去未结合的酶标液后,加入NBT/BCIP底物显色3~5 min后B液洗膜3次,蒸馏水清洗后1 h内分析结果。通过导流杂交技术一次检测HPV共21个HPV亚型,包括高危组15个亚型:16、18、31、33、35、39、45、5l、52、53、56、58、59、66和68型;低危组6个亚型:CP8304、6、ll、42、43和44型。

1.2.3 统计学方法采用SPSS 11.0统计软件处理,组间比较采用χ2检验,P﹤0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV分型结果图

导流杂交膜上内对照点和Biotin对照点必需为阳性,阴性对照均不显色。HPV单一感染时,在导流杂交膜芯片上相应HPV亚型探针位点处可见一蓝紫色斑点,双重或多重感染时,在膜上可见2个或2个以上显色斑点。见图1、2、3。

2.2 HPV感染状况分析

2 058例标本经HPV基因分型诊断筛查出491例HPV感染阳性,HPV感染率为23.9%,各组HPV感染率见表1。不同宫颈疾病HPV检出率差异有统计学意义,宫颈有病变组HPV感染率显著高于病理检查正常组,且随宫颈病变程度的加重,HPV感染率逐渐增高。

2.3 HPV亚型检出频率分析

所检测的21种HPV亚型除43型外均有检出,491例HPV感染阳性患者中高危型感染占76.0%(373/491),其中以HPV52亚型检出率最高,其他主要亚型依次为HPV16、58、18型;低危型感染占24.0%(118/491),以HPVCP8304亚型检查率最高,见图4。

2.4 HPV亚型与宫颈病变相关性分析

高危型HPV感染率尤其是HPV16亚型在不同宫颈病变中的检出率有统计学意义,宫颈有病变组高危型HPV及HPV16亚型感染率显著高于病理检查正常组,且随宫颈病变程度的加重感染率显著增高。见表2、3。

2.5 HPV单一感染和多重感染与宫颈病变程度相关性分析

491例HPV感染阳性标本中检出多重感染111例,占22.6%。其中1例感染型别数高达9种。但各组间多重感染与宫颈病变差异无统计学意义,见表4。

3讨论

宫颈癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤,是全球范围内女性第二大常见恶性肿瘤,发病率仅次于乳腺癌。近年来,中国宫颈癌的发生有明显上升和年轻化趋势,发病以每年2~3%的速度增长,有报道指出,99.7%的宫颈癌患者可检测出HPV病毒[1]。HPV感染与宫颈肿瘤的发生、发展密切相关,高危型HPV的持续性感染是导致宫颈癌及癌前病变的主要致病因子,约20种以上的HPV亚型与宫颈癌的形成有关,低危亚型感染仅诱发生殖器疣样病变。女性一生中随着年龄的不同,生殖道HPV感染的概率及亚型不同,不同区域HPV感染亚型也不一。因此,筛查是现阶段预防和控制子宫颈癌的主要手段,只要定期进行高危型HPV的检查,做到早预防、早诊断、早治疗,就可以有效减少妇女死于宫颈癌的概率。中国地域辽阔,不同地区及民族宫颈癌的主要感染型别不尽相同。云南省个旧市是流动人口较多生活环境较复杂的老工业城市,因此明确一个地区HPV致癌的主要型别,可根据感染型别预测病变进展,指导临床医生制定合理诊治方案,为评估预后,避免过度诊断及治疗提供依据。这种地区间的差异提示,为获得最佳的预防效果,HPV疫苗最好能结合当地的HPV流行情况来设计。

HPV感染具有显著的地域和人群差异。在我们所研究的个旧市妇女人群中HPV感染率为23.9%,与徐州地区女性HPV感染率(26.02%)[2]接近,高于金华地区[4]女性HPV感染率(13.6%),但比武汉地区(64.5%)、绍兴地区(51.54%)、宁波地区(49.4%)、粤东地区(48.3%)都低[4-7]。同时研究发现HPV感染率随宫颈病变程度的加重逐渐增高,从病理检查正常组的19.3%增至宫颈癌组的88.9%,再次证实了HPV感染与宫颈病变及其宫颈癌的发生、发展密切相关。亚型分析本地区HPV感染以HPV52、16、58、18、CP8304为主要感染型别,其中HPV52(23.8%)在所有受检人群中感染的阳性率最高,与文献[8-9]报道一致,但与我国新疆地区[10]报道以HPV16为主不同。已发现的HPV亚型约100多种,其中近40种可以感染人类的生殖器官,约20种以上的HPV亚型与宫颈癌的形成有关,且不同亚型HPV对宫颈上皮的致病性不同,如低危亚型感染仅诱发生殖器疣样病变,而高危型HPV持续感染被认为是宫颈癌及其癌前病变发生的主要因素。我们的研究显示,宫颈有病变组高危型HPV尤其是HPV16亚型感染率显著高于病理检查正常组,且随宫颈病变程度的加重感染率有增加趋势,说明高危型HPV尤其是HPV16亚型感染在宫颈病变发展中的重要作用。多项研究认为多重HPV感染发生宫颈癌的危险性比单一感染高,但本研究中各宫颈病变组的多重HPV感染并无明显差异,可能与样本量较少有关,也可能与人群及地域有关,我们将在今后的研究中扩大样本规模进行进一步研究。

综上所述,个旧市妇女人群HPV感染率为23.9%,多为高危型感染,主要感染型别依次为HPV52、16、58、18、CP8304,高危型HPV尤其是HPV16可能是导致宫颈病变的主要致病型别,为本地区HPV所致疾病的防治及针对性HPV疫苗开发应用提供了重要的理论依据。

[参考文献]

[1]周毅. 人类乳头瘤病毒与宫颈癌的相关调查[J]. 中华医院感染学杂志,2004,2(3):129-130.

[2]王淑贞,王金锋,王静,等. 徐州地区女性宫颈感染人乳头瘤病毒基因亚型分析[J]. 放射免疫学杂志,2009,22(6):627-629.

[3]蒋旭峰,蒋群芳. 金华地区女性感染人乳头瘤病毒基因类型分析[J].放射免疫学杂志,2009,22(1):85-87.

[4]胡兴文. 武汉地区宫颈感染人乳头状瘤病毒基因分析[J]. 实用医技杂志,2007,14(14):1831-1832.

[5]吴满武. 妇科门诊518例就诊者宫颈拭子HPV检测结果分析[J]. 中国优生与遗传杂志,2009,17(4):77-79.

[6]喻明,毛燕君. 宁波地区1670例育龄妇女人乳头瘤病毒感染阳性率的凋查[J]. 中国优生与遗传杂志,2009,17(5):137-138.

[7]林广玲,翁建盛,林小荣,等. 粤东地区妇女下生殖道HPV亚型的基因芯片检测与分析[J]. 江西医学检验,2006,24(4):303-305.

[8]余南,辜为为,刘红娥,等. 广州东部HPV基因型分布及其势基因型E6/E7核酸序列分析[J]. 中国人兽共患病学报,2009,25(3):220-225.

[9]罗招云,杨立业. 潮州地区人乳头瘤病毒型别分布特征分析[J]. 分子诊断与治疗杂志,2011,3(3):177-180.

[10]阿依努尔·买买提,佐合拉古丽·木塔力甫,古扎丽努尔·阿不力孜,等. 新疆维、汉族宫颈腺癌与HPV各类型关系的研究[J]. 新疆医科大学学报,2009,32(5):518-521.

(收稿日期:2012-01-09)

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