薰衣草离体培养技术研究

2012-04-29苏琛

湖北农业科学 2012年3期

摘要：以薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）带芽茎段或顶芽为外植体，探讨不同激素种类与水平等对其愈伤诱导、不定芽增殖与不定根形成的影响，并筛选了薰衣草试管苗过渡移栽的适宜基质。结果表明薰衣草离体培养适宜的培养基分别为，不定芽启动培养基，ＭＳ＋ＢＡ１．０～２．０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ｇ／Ｌ；继代增殖培养基，ＭＳ＋ＢＡ１．０～２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．２５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ｇ／Ｌ；生根培养基，Ｗｈｉｔｅ＋ＩＢＡ０．４ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ｇ／Ｌ或Ｗｈｉｔｅ＋ＮＡＡ０．８ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ｇ／Ｌ。以等体积的泥炭与珍珠岩混合后作为基质驯苗，幼苗成活率可达９６．９％。

关键词：薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）；离体培养；培养基

中图分类号：Ｓ５７３＋．９；Ｑ９４５．５１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）03－0623-03

Ｓｔｕｄy ｏｎｉｎｖｉｔｒｏＣｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＬａｖａｎｄｕｌａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ

ＳＵＣｈｅｎ

（ＸｉａｎｇｆａｎＶｏｃａｔｉｏｎａｌａｎｄＴｅｃｈｎｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｘｉａｎｇｙａｎｇ４４１０２１，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＵｓｉｎｇｓｔｅｍｏｒｔｉｐｂｕｄｏｆＬａｖａｎｄｕｌａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａａｓｔｈｅｅｘｐｌａｎｔ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｘｔｅｒｎａｌｈｏｒｍｏｎｅｉｎｍｅｄｉｕｍｏｎｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔｏｆｃａｌｌｕｓ，ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｂｕｄｓ，ａｎｄｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｒｏｏｔｓｗere ｓｔｕｄｉｅｄ； AｎｄｓｕｉｔａｂｌｅｇｒｏｕｎｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｆｏｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｏｆＬ．ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａｓｅｅｄｌｉｎｇ was screened out．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｍｅｄｉｕｍｆｏｒｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔｓｈｏｕｌｄｂｅｔｔｅｒｂｅＭＳ＋ＢＡ１．０～２．０ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ３０ｇ／Ｌ＋ａｇａｒ６．５ｇ／Ｌ．ＭＳ＋ＢＡ１．０～２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．２５ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ３０ｇ／Ｌ＋ａｇａｒ６．５ｇ／Ｌｗａｓｇｏｏｄｆｏｒｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｂｕｄｓ．ＡｎｄＷｈｉｔｅ＋ＩＢＡ０．４ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ２０ｇ／Ｌ＋ａｇａｒ６．５ｇ／ＬｏｒＷｈｉｔｅ＋ＮＡＡ０．８ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ２０ｇ／Ｌ＋ａｇａｒ６．５ｇ／Ｌｗａｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｒｏｏｔｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｕｓｉｎｇｍｉｘｅｄｐｅａｔａｎｄｖｅｒｍｉｃｕｌｉｔｅｗｉｔｈｅｑｕａｌｖｏｌｕｍｅａｓｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｇｒｏｕｎｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｗａｓｃｏｎｔｒｉｂｕｔｏｒｙｔｏｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｓｅｅｄｌｉｎｇａｓｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｃｏｕｌｄｒｅａｃｈ９６．９％

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｌａｖａｎｄｕｌａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ；ｉｎｖｉｔｒｏｃｕｌｔｕｔｉｖａｔｉｏｎ；ｍｅｄｉｕｍ

薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）为唇形科薰衣草属多年生植物，用途广泛，其干燥花在医药上可作为镇静、驱风、利尿、兴奋、强壮药，提取的精油可作为高级香水、香皂、洗涤用品的香料，近年来作为园林观赏植物受到广泛关注，极具开发利用前景［１－３］。但我国栽培薰衣草品种主要依靠从国外引种，且种子萌芽率低，给薰衣草生产快速发展带来困难。目前薰衣草离体培养与植株再生技术的研究已有少量报道［４－８］，本试验以法国选育的薰衣草品种为材料，在已有的薰衣草离体培养技术的基础上，进一步探讨建立薰衣草植株再生体系进行无性快繁的技术，为实现薰衣草优良品种种苗规模化育苗奠定技术基础。

１材料与方法

１．１材料

薰衣草种子为法国进口，种植于襄樊职业技术学院试验基地，于２００９年４月从薰衣草母株上采取生长健壮的带芽茎段作为外植体。

１．２方法

１．２．１外植体表面灭菌将采取的带芽茎段带回实验室，去叶并剪切成３～４ｃｍ长的茎段，用饱和洗涤液浸泡５～１０ｍｉｎ，流水冲洗２０～３０ｍｉｎ，在超净工作台上用７５％的乙醇浸泡３０ｓ，再用０．１％的ＨｇＣｌ２浸泡６～７ｍｉｎ，最后用无菌水冲洗３～４次，每次１～２ｍｉｎ，用无菌纸吸干水分，以备接种。

１．２．２启动培养取已表面灭菌的材料，切割成１～２ｃｍ长的带１芽茎段，接种于启动培养基上，以获得无菌材料，３５ｄ后统计萌芽率。启动培养基以ＭＳ为基本培养基，添加不同水平的ＢＡ（０．１、０．５、１．０、２．０ｍｇ／Ｌ）。

１．２．３继代增殖培养启动培养中获得的无菌材料切成长约２ｃｍ的带１芽茎段，接种于增殖培养基中，增殖培养基以ＭＳ为基本培养基，添加不同水平的ＢＡ（０．１、０．５、１．０、２．０、３．０ｍｇ／Ｌ）和不同水平的ＩＢＡ（０．１０、０．２５、０．５０ｍｇ／Ｌ）组合，共１５个处理。３０ｄ后统计增殖率，以筛选适宜的增殖培养基。

１．２．４生根培养将丛芽分割成２～３ｃｍ高带３～４叶的单芽，接种于诱导生根培养基中，生根培养基以Ｗｈｉｔｅ为基本培养基，添加不同水平的ＩＢＡ（０．１、０．４、０．８ｍｇ／Ｌ）或不同的水平ＮＡＡ（０．１、０．４、０．８ｍｇ／Ｌ），并以Ｗｈｉｔｅ为对照，共７个处理。２５ｄ后统计生根率，以筛选适宜的生根培养基。

以上启动培养基、增殖培养基中添加蔗糖３０ｇ／Ｌ，生根培养基中添加蔗糖２０ｇ／Ｌ，3种培养基均添加琼脂６．５ｇ／Ｌ、ｐＨ为５．８～６．２；高温高压湿热灭菌２０ｍｉｎ。培养条件均为：光照强度１５００～２０００ｌｘ，温度（２３±１）℃，光照时间１３ｈ／ｄ。

１．２．５试管苗过渡移栽当试管苗不定根长０．８～１．０ｃｍ，苗高３～４ｃｍ时，从培养瓶中取出，洗净基部培养基，用６００～８００倍多菌灵稀释液浸泡基部２～３ｍｉｎ（药浴）后，种植于不同基质中进行过渡移栽，同时采取适度降温、遮光、增湿等技术措施，以提高试管苗过渡移栽成活率。过渡移栽基质设泥炭、泥炭与珍珠岩等体积混合、蛭石、珍珠岩等４个处理，２５ｄ后统计成活率。

２结果与分析

２．１培养基中ＢＡ浓度对薰衣草愈伤与腋芽萌动的影响

带芽茎段接种于启动培养基上，５～７ｄ时腋芽始萌发，３０～３５ｄ时部分形成丛生芽。试验结果（表１）表明，腋芽萌发率有随启动培养基中ＢＡ浓度的提高而升高的趋势。在ＢＡ浓度为２．０ｍｇ／Ｌ时，腋芽萌发率最高，不定芽数量多；在ＢＡ浓度较低时，不定芽数量少，但芽健壮、长势旺，综合两方面因素，薰衣草启动培养以ＭＳ培养基添加ＢＡ１．０～２．０ｍｇ／Ｌ的效果最好。

２．２激素种类与水平对薰衣草不定芽增殖的影响

带芽茎段接种于继代增殖培养基上，３～５ｄ后芽陆续萌发，２５～３５ｄ时再次形成不定芽丛。试验结果（表２）表明，继代增殖培养基中添加的ＢＡ与ＩＢＡ水平不同，芽的增殖率与长势存在显著差异。增殖率与ＢＡ浓度密切相关，在试验浓度范围内，增殖率先随ＢＡ浓度的升高呈升高趋势，但ＢＡ浓度过高时，增殖率有所下降，且芽的长势减弱。后续试验也表明，ＢＡ浓度为３．０ｍｇ／Ｌ时，随继代次数增加，不定芽出现玻璃化现象，不利于后期成苗。增殖率与ＩＢＡ浓度亦表现出一定的相关性，在试验浓度范围内，ＩＢＡ浓度为０．２５ｍｇ／Ｌ时增殖率最高。因此，薰衣草不定芽增殖培养中，ＭＳ培养基添加ＢＡ１．０～２．０ｍｇ／Ｌ和ＩＢＡ０．２５ｍｇ／Ｌ增殖效果好，丛芽壮。

２．３激素种类与水平对薰衣草不定根形成的影响

单芽接种于生根培养基上，７～１０ｄ时切口处出现白色根状突起，试验结果（表３）表明，Ｗｈｉｔｅ添加ＩＢＡ０．４ｍｇ／Ｌ或ＮＡＡ０．８ｍｇ／Ｌ时生根率较高，但添加ＮＡＡ０．８ｍｇ／Ｌ时根稍壮。

２．４不同基质对薰衣草试管苗过渡移栽成活率的影响

用等体积的泥炭与珍珠岩混合后做基质，试管苗生长快，过渡移栽成活率可达９６．９％，苗质优良；而以蛭石做基质，试管苗生长缓慢，且过渡移栽成活率最低，为８２．０％（表４）。此外，移栽试验表明，薰衣草试管苗苗龄２０～２５ｄ，根长０．８～１．０ｃｍ时，试管苗生理活性旺，根吸收能力强，且此时期移栽不易伤根，成活率高。

３结论

本试验结果表明，薰衣草离体培养适宜的培养基分别为：不定芽启动培养基ＭＳ＋ＢＡ１．０～２．０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ｇ／Ｌ；继代增殖培养基，ＭＳ＋ＢＡ１．０～２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．２５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ｇ／Ｌ；不定根分化培养基，Ｗｈｉｔｅ＋ＩＢＡ０．４ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ｇ／Ｌ或Ｗｈｉｔｅ＋ＮＡＡ０．８ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ｇ／Ｌ；以等体积的泥炭与珍珠岩混合后作为基质驯苗，幼苗成活率可达９６．９％。

参考文献：

［１］陈和平，周贺新，贺瑞振，等．薰衣草的研究进展［J］．农垦医学，2005，27（2）：142-145.．

［２］刘忠军，刘虹，热西达，等．薰衣草的引种栽培及应用研究［Ｊ］．新疆农业科技，２００５（２）：４４－４５．

［３］韩继龙．薰衣草栽培技术［Ｊ］．现代园艺，２０１０（６）：３８－３９．

［４］王远会，项华，何叶，等．薰衣草栽培管理技术［Ｊ］．南方农业（园林花卉版），２００９（５）：２４－２５．

［５］廖苏梅，周巍，徐程．薰衣草的组织培养［Ｊ］．植物生理学通讯，２００４，４０（３）：３３６－３３６．

［６］许耀祖，王晓军，赵民安，等．薰衣草高频植株再生系统的建立［Ｊ］．西南农业大学学报（自然科学版），２００５，２７（３）：３４４－３４９．

［７］许耀祖，王晓军，赵民安，等．几种生物学因子对薰衣草胚性愈伤组织悬浮培养生长的影响［Ｊ］．生物技术通讯，２００５，１６（１）：３４－３６．

［８］周辉明，陈燕，罗庆国．薰衣草的组织培养和快速繁殖［Ｊ］．三明农业科技，２００６（３）：１２．

（责任编辑向闱）

收稿日期：２０１１－０８－１６

基金项目：湖北省襄阳市科技攻关项目