ABSCIEX黄曲霉毒素整体解决方案

日前，在液体乳产品中发现黄曲霉毒素M，超标，引发公众广泛关注。ABSCIEX公司一直致力于为客户提供全方位的解决方案，在事件爆发的第时间建立并向客户提供测定黄曲霉毒素的整体解决方案。

黄曲霉毒素检测常见的方法为经免疫亲和柱净化后，采用HPLC(高效液相色谱法)、TLC(薄层层析法)、LCMS／MS(液质联用)及ELISA(酶联免疫)法检测。其中ELISA法使用较为普遍，但因其定量不准确，只能作为阳性样品的初筛工具；LC Ms／MS检测方法具有灵敏度高，快速、准确等特点，适用于乳制品中黄曲霉毒素的检测，被广泛应用于食品安全检测。AB SCIEX公司就是用高效液相串联质谱法建立的黄曲霉毒素整体解决方案——iMethod^TM。

样品前处理方法

1提取方法

(1)乳

称取50.00g(精确至0.01g)混匀的试样，置于50mL具塞离心管中，在水浴中加热到35-37℃。在6000r／下离心15min。收集全部上清液，供净化用。

(2)发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)

称取50.00g(精确至0.01g)混匀的试样，用0.5mol／L的氢氧化钠溶液在酸度计指示下调pH值至7.4，在9500r／rain下匀浆5min，在水浴中加热到35-37℃。在6000r／min下离心15min。收集全部上清液，供净化用。

(3)乳粉和粉状婴幼儿配方食品

称取10.00g(精确至0.01g)试样，置于250mL烧杯中。将50mL已预热到50℃的水加入到乳粉中，用玻璃棒将其混合均匀。如果乳粉仍未完全溶解，将烧杯置于50℃的水浴中放N30min。溶解后冷却至20℃，移入100mL容量瓶中，用少量的水分次洗涤烧杯，洗涤液并移入容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀后分别移至两个50mL离心管中，在6000r／min下离心15min，混合上清液，用移液管移取50mL上清液供净化处理用。

(4)干酪

称取经切细、过10目圆孔筛混匀的试样5.00g(精确至0.01g)，置于50mL离心管中，加2mL水和30mL甲醇，在9500r／min i,匀浆5min，超声提取30min，在6000／min下离心1 5min。收集上清液并移入25 0m L分液漏斗中。在分液漏斗中加／X30mL石油醚，振摇2min，待分层后，将下层移于50mL烧杯中，弃去石油醚层。重复用石油醚提取2次。将下层溶液移到100mL圆底烧瓶中，减压浓缩至约2mL，浓缩液倒入离心管中，烧瓶用乙腈+Tic溶液(1+4)5mL分2次洗涤，洗涤液并倒入50mL离心管中，加水稀释至约50mL，在6000转／mm b离心5min，上清液供净化处理。

(5)奶油

称取5.00g(精确至0.01g)试样，置于50mL烧杯中，用20mLC油醚将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20mL水和30mL甲醇，振荡30min后，将全部液体移于分液漏斗中，待分层后，将下层溶液全部移到100mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪中减压浓缩至约5mL，加水稀释至约50mL，供净化处理。

2净化方法

(1)免疫亲和柱的准备

将次性的50mL注射器筒与亲和柱上顶部相串联，再将亲和柱与固相萃取装置连接起来。

(2)试样的纯化

将上述样品提取液移至50mL注射器筒中，调节固相萃取装置的真空系统，控制试样以2-3mL／miD稳定的流速过柱。取下50mL的注射器筒，装上10mL注射器筒。注射器筒内加入水，以稳定的流速洗柱，然后抽干亲和柱。脱开真空系统，在亲和柱下部放入10mL刻度试管，上部装上另一个10mL注射器筒，加入4mL乙腈，洗脱待测物，洗脱液收集在刻度试管中，洗脱时间不少于60秒。然后用氮气缓缓地在30℃下将洗脱液蒸发至近干(如果蒸发至干，会损失待测物)，用乙腈+水溶液(1+9)稀释至1mL。

LC—MS／MS仪器条件

1液相色谱参数

色谱柱：Phenomenex Luna PFP(2)3um，100A，50mm×2.0mm；

柱温：28℃：

流动相：含0.1％甲酸，甲醇／5mM乙酸铵水溶液(60：40)；

流速：0.4mL／min：

进样量：10uL

运行时问：3min。

2质谱参数

以API 3200为例的质谱参数如表所示，具体参数和检测灵敏度视仪器不同而有所差异。

离子源参数

CUR：20psi：lS：5500V：TEM：425℃：GS：30psi；GS2：60psi；Ihe：On；CAD：High。

实验结果

黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂和M₁提取离子流图如图1所示。

结论

AB SCEIX公司提供的仝方位解决方案iMethod_TM可同时测定乳及乳制品中B₁、B₂、G₁、G₂和M₁共5种黄曲霉毒素。iMethodTM不仅能够为您提供快速的方法从而减少方法开发需要的时问，拥有了可立快Cliquid软件，您就可以用一种简化的四步法工作流程选择试验、建立样品表单、选择报告模版和运行试验。这四步法工作流程极为简单，即使是没有质谱操作经验的人员也能够很快掌握。AB SCIEX公司免费提供用于测定黄曲霉毒素的iMethodTM，在cliquid~软件中安装后便可直接使用。