清远市肿眼肉鸡病原诊断和药敏试验

许华

摘要：广东省清远地区３群肉鸡临床表现不同程度的肿眼、流鼻水等症状，临床治疗处理效果不理想。在3群病鸡中各取病鸡鼻窦腔分泌液进行细菌分离培养、革兰氏和瑞氏染色，并对分离菌株进行了玻片凝集和生化试验。结果表明，革兰氏染色呈阴性，瑞氏染色呈蓝色，油镜下可见细菌呈短杆菌或球杆菌，两极着色，３群分离株均与副鸡嗜血杆菌Ａ型血清完全凝集反应，与Ｂ和Ｃ型血清无凝集反应，确定肿眼肉鸡病原为Ａ型副鸡嗜血杆菌。同时选用多种药物研究了该病原菌的药敏性，结果显示，Ａ型副鸡嗜血杆菌对头孢噻呋、氟苯尼考和青霉素３种药物均表现极敏。

关键词：副鸡嗜血杆菌；病原诊断；药敏试验

中图分类号：Ｓ８５２．６１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）04－0782-03

副鸡嗜血杆菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｇａｌｌｉｎａｒｕｍ，ＨＰＧ）是引起鸡上呼吸道疾病的一种致病菌，俗称鸡传染性鼻炎，以鼻腔和鼻窦发炎、流鼻汁、脸部肿胀和眼结膜炎为主要特征。１９２０年，Ｂｅａｃｈ首先报道该病，Ｄｅｂｌｉｅｋｃ于１９３１年首次分离到了该病的病原菌［１］。本病呈世界性分布，主要引起产蛋鸡的产蛋量下降，育成鸡的生长发育缓慢，给养禽业造成很大的经济损失。我国从１９８０年起就有许多疑似该病的病例出现，冯文达［２］于１９８７年首先在北京分离到１株病原菌。２０１０年１１月，广东省清远市某肉鸡养殖合作社３群肉鸡表现不同程度的肿眼、流鼻水症状，并有严重的呼吸道疾病，病鸡表现为精神沉郁、咳嗽、肿头等症状，鸡群经治疗处理，效果不理想，死淘较大，给肉鸡合作社农户造成较大的经济损失。笔者对这３群发病肉鸡的病原菌进行了分离鉴定，同时进行了药物敏感试验，旨在筛选出临床上有效治疗该致病菌株的敏感药物，为防治该病提供一定的参考。

１材料与方法

１．１材料

病料采集于广东省清远市某肉鸡养殖合作社（３群，分群采集），副鸡嗜血杆菌A、B、C 3种血清型的阳性血清均购自中国兽医药品监察所；常规培养基、生化试剂和药敏纸片购于杭州天和微生物试剂有限公司。

１．２方法

１．２．１细菌分离培养在无菌操作条件下，用棉拭子蘸取病鸡鼻窦腔内分泌物，划线接种于巧克力琼脂培养基，置于３７ ℃恒温箱烛缸培养２４ ｈ，之后挑取单个菌落进行纯培养。分群采集，培养。

１．２．２染色镜检挑取单个菌落进行革兰氏染色及瑞氏染色，在光学显微镜下观察细菌的形态特征。

１．２．３血清学鉴定采用快速血清平板凝集试验方法，取所分离纯培养的各菌株分别与副鸡嗜血杆菌的Ａ、Ｂ、Ｃ 3种血清型的阳性血清分别进行玻片凝集试验。

１．２．４生化试验对所分离的３株病原菌进行葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和海藻糖发酵试验，并进行接触酶、吲哚试验、硝酸盐还原试验及Ｈ２Ｓ试验等生化指标的测定。

１．２．５药敏试验细菌纯培养后，挑选分离的单个菌落，用无菌生理盐水洗下混匀，取０．２ ｍＬ接种于巧克力培养基上涂布均匀，均匀贴上各药敏纸片，置于３７ ℃恒温箱烛缸培养２４ ｈ后观察结果，并记录抑菌圈直径大小。

２结果与分析

２．１菌落形态、染色、镜检和血清学鉴定结果

对临床的３群肉鸡均分离到疑似副鸡嗜血杆菌菌株，具体表现为在巧克力培养基上形成灰白色、边缘整齐、光滑隆起、半透明、针尖大小、露珠样的菌落。由表1可知，３群肉鸡分离的菌株革兰氏染色阴性，瑞氏染色蓝色，油镜下可见细菌呈短杆菌或球杆菌，两极着色，３群肉鸡病原分离株与副鸡嗜血杆菌的Ａ型阳性血清均发生完全凝集反应，而与其他两种血清均无凝集反应，故鉴定这３群分离菌株为Ａ型副鸡嗜血杆菌。

２．２生化试验结果

生化试验结果见表2，３群肉鸡病原分离菌株的生化特性完全一致，即细菌不发酵海藻糖，发酵葡萄糖、蔗糖和麦芽糖；能还原硝酸鹽，吲哚试验阴性，接触酶阴性，不产生Ｈ２Ｓ。

２．３药敏试验结果

由表3可见，该病原菌对头孢噻呋、氟苯尼考和青霉素极敏，对丁胺卡那、阿莫西林高敏，对多西环素中敏，对泰乐菌素低敏，对磺胺嘧啶不敏感。

３小结与讨论

本研究通过巧克力烛缸培养，Ａ型副鸡嗜血杆菌分离率较高，属于致病菌，由于该次培养未能完全达到５％ ＣＯ２培养箱的条件，导致菌株生长不良，出现菌落数偏少的现象。

本研究３群清远肉鸡病原分离菌株在生化特性上表现为发酵葡萄糖、蔗糖和麦芽糖，而且分离菌株能还原硝酸盐，接触酶阴性，吲哚试验阴性，不产生Ｈ２Ｓ，这些结果与罗廷荣等［３］确定副鸡嗜血杆菌的生物化学特性完全一致；３群肉鸡病原菌分离株与副鸡嗜血杆菌的Ａ型阳性血清产生均完全凝集反应，而与其他两种血清均无凝集反应。由以上这些特性可鉴定这３群分离菌株均为Ａ型副鸡嗜血杆菌，说明目前清远地区肉鸡Ａ型副鸡嗜血杆菌的流行占据主导地位［４］。但从近年的文献报道来看，我国部分地区已经有Ｂ、Ｃ型副鸡嗜血杆菌的存在［５－７］，呈现为近年来我国鸡传染性鼻炎流行的新特点。因此，养殖过程中对肉鸡进行免疫时应注意该流行病的这一特点，同时在疫苗研发时也应注重多价苗或全价苗的研究与开发［８］。虽然，目前肉鸡的鼻炎疫苗均有效，但菌苗的保护率一般不能达到１００％，所以肉鸡养殖过程中需要增强鸡群的抵抗力，做好环境的消毒及病鸡的隔离。由于康复带菌鸡是主要的传染源，所以肉鸡合作社各存栏鸡舍内的动物用具要做好隔离，以避免病原菌的群间传播。

从药敏试验结果发现，Ａ型副鸡嗜血杆菌对头孢噻呋、氟苯尼考、青霉素、丁胺卡那和阿莫西林都表现出了很高的敏感性，其中对头孢噻呋、氟苯尼考和青霉素这３种药物的敏感性最高。根据本研究药敏试验结果，笔者选用了头孢噻呋、氟苯尼考和青霉素这３种极敏感药物对该肉鸡养殖合作社３个发病鸡群进行了注射治疗，同时投服药物辅助治疗，并补充电解多维等增强肉鸡机体抵抗力，结果发现鸡群采食量逐渐恢复，精神好转，呆立、嗜睡鸡明显减少，４ ｄ后基本恢复正常。因此，肉鸡感染Ａ型副鸡嗜血杆菌后可以考虑选择这３种药物进行临床治疗。治疗时，除了注射给药和口服给药外，也可考虑滴鼻或者喷雾治疗。

参考文献：

［１］ ＰＯＥＲＮＯＭＯ Ｓ， ＳＵＴＡＲＭＡ， ＲＡＦＩＥＥ Ｍ，ｅｔ ａｌ． Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉzａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｇａｌｌｉｎａｒｕｍ ｆｒｏｍ Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ［Ｊ］． Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０００，７８（１１）：７５９－７６２．

［２］ 冯文达． 北京鸡传染性鼻炎病原菌分离及鉴定［Ｊ］． 微生物学通报，１９８７（５）：２１６－２１９．

［３］ 罗廷荣，艾博特，梁家权，等． 二株副鸡嗜血杆菌分离株的生物学特性鉴定［Ｊ］． 中国预防兽医学报，２０００，２２（３）：１７０－１７３．

［４］ 马艳平，张杰，陈豪泰，等． 副鸡嗜血杆菌的分离鉴定［Ｊ］． 西南农业学报，２００９，２２（３）：８３４－８３７．

［５］ 张培君，苗得园，龚玉梅，等． Ｂ型副鸡嗜血杆菌的分离鉴定［Ｊ］． 中国预防兽医学报， ２００３，２５（１）：５６－５８．

［６］ 孙慧玲，苗得园，王艳平，等． Ｂ型副鸡嗜血杆菌北京株的分离与鉴定［Ｊ］． 中国兽医杂志，２００５，４１（２）：２８－２９．

［７］ 张培君，陈小玲，苗得园． 鸡传染性鼻炎流行学调查（Ⅱ）［Ｊ］． 中国兽药杂志，２００１，３５（１）：２１－２３．

［８］ 苗得园，孙惠玲，陈晓峰，等． 副鸡嗜血杆菌的分离鉴定及我国鸡传染性鼻炎的流行状况分析［Ｊ］． 中国预防兽医学报，２００６，２８（４）：３９２－３９５．