应用HPLC法测定果汁饮料中的纳他霉素含量

李夏林 覃晓

纳他霉素（Natamycin）又称游链霉素（Pimaricin），是一种多烯烃大环内酯类抗生素，能有效抑制霉菌和酵母菌的生长，阻止丝状真菌中黄曲霉毒素的形成。1996年我国食品添加剂委员会对纳他霉素进行评价并建议批准使用，现已列入食品添加剂使用标准。根据我国《食品添加剂使用标准》的规定，果蔬汁（浆）中纳他霉素的最大使用量为0.3g/kg。本文参照《食品中纳他霉素的测定 液相色谱法》，对果汁饮料中纳他霉素的测定进行了方法学考察，以供相关检测人员参考。

SHIMADZU LC-20A全自动液相色谱仪（岛津制作所），METTLER XS105DU电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，KQ-500DE型数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；纳他霉素对照品（批号：00105、含量：89.0%，以无水物计97.0%、德国Dr、上海安普科学仪器有限公司）；统一鲜橙多（批号：2011-10-17，广州统一企业有限公司）；甲醇为色谱纯；冰乙酸为优级纯。备溶液，备用。

（2）样品溶液的制备：精密量取鲜橙多供试样10mL,置50mL锥形瓶中，加入甲醇30mL,超声提取30min，提取液依次过0.45μm和0.22μm的滤膜，取滤液备用。

3.方法的专属性

取溶剂甲醇、样品溶液、加标样品溶液与对照品溶液，按上述色谱条件，分别依法注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：溶剂甲醇对纳他霉素测定无干扰，样品未检出纳他霉素，

其内源性物质对纳他霉素测定无干扰，加标样品与对照品在

相同时间位置上检出纳他霉素峰（见图1）。

4.校准曲线和检出限、定量限

取2（1）项的标准储备液，甲醇分别稀释制成纳他霉素质量浓度为10μg/mL、5μg/mL、2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.25μg/mL的系列标准溶液，各取10μL，按上述色谱条件，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标（Y），与其对应的浓度为横坐标（X）绘制校准曲线，计算回归方程为：Y=58962X-5640，相关系数r=0.99998。显示纳他霉素的质量浓度在0.25～10μg/mL范围内具有良好的线性关系。在此色谱条件下，分别以信噪比（S/N）为3∶1时，相应的最低检出浓度0.1515μg/mL为方法检出限。以信噪比（S/N）为10∶1时，相应的最低检出浓度0.5051μg/mL为方法定量限。5.回收率和精密度

分别取统一鲜橙多样品10mL置50mL锥形瓶中，各加入3个浓度水平的纳他霉素对照品溶液（每个浓度做3个平行样，每个样注样2次），按照2（2）项的方法处理后，在上述色谱条件下，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算纳他霉素的含量和回收率，结果见表1。

从表1可看出，该方法的平均回收率为97.3%～107.0%，相对标准差（RSD）（n=6）为0.4%～1.0%，其准确性和精密度均能满足方法确认的技术要求。

6.样品测定

取统一鲜橙多平行样2份，按2（2）方法处理后，分别取滤液 10μL按2.1项下色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算纳他霉素的含量。结果样品色谱图在与对照品色谱图相应的位置上均无峰出现，即在该实验条件下未检出纳他霉素。