饥饿小鼠和饱食小鼠肝糖原含量及血糖的比较

罗永会，张翠香，徐春萍

（大理学院基础医学院 生物化学与分子生物学实验室， 云南大理 671000）

糖原是由许多葡萄糖分子聚合而成的物质，是动物机体能迅速动用的糖储形式存之一。肝糖原的含量通常约占肝重的5%。许多因素可影响肝糖原的含量，如饱食后肝糖原增加，饥饿则肝糖原逐渐降低。同样饥饿和饱食对血糖也有一定影响,饥饿时血糖会短暂降低,通过神经调节和体液调节的转化来维持血糖浓度。会缓慢升高直到平衡，饱食时血糖会短暂升高,刺激胰岛B细胞分泌胰岛素 胰岛素促进血糖的分解和肝肌糖原的合成，使血糖浓度下降，以调节血糖平衡到正常水平。本文以昆明种小鼠作实验对象，分析饥饿和饱食对小鼠肝糖原含量及血糖的影响。

1 仪器和材料

1.1 仪器

HH－4数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；722 E可见分光光度计（上海分析仪器有限公司）；小架盘天平、手术剪、镊子、微量移液器。

1.2 试剂

氢氧化钾、蒽酮、浓硫酸，标准葡萄糖，无水碳酸钠、洒石酸、酒石酸、结晶硫酸铜（CuSO4·5H2O）、钼酸、钨酸钠、浓磷酸（85%）、无水葡萄糖、苯甲酸、生理盐水、氟化钠、草酸钾等，均为国产分析纯；昆明种小鼠（大理学院实验动物房提供）。

2 方法

2.1 动物准备

取体重在25g以上的健康小鼠60只，随机分成两组：饥饿组30只：实验前严格禁食不禁水30h；饱食组30只：正常摄食，饮水。

2.2 样品的制备

小鼠断头取全血于抗凝管中，轻轻混匀即得小鼠抗凝血液备用。立即剖腹取出肝脏，用生理盐水洗去血污后用滤纸吸干水份。

2.3 肝糖原的测定[1]

准确称取饥饿小鼠肝脏0.6g,饱食小鼠肝脏0.4g。分别于15ml大试剂管中，各加入30%KOH溶液1.5ml，置于沸水浴中煮沸20min，第隔5min振摇试管1次，使充分混匀。待肝组织全部溶解后取出试管冷却后，用蒸馏水定容到100ml混匀后,按表1操作：

表1 小鼠肝糖原的测定

混匀，置沸水中10min，冷却，经以空白管调零，于620nm波长处读取吸光度。计算肝糖原原含量，计算公式：

式中：1.11是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，即111ug糖原用蒽酮试剂显色相当于100ug葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色。

2.4 血糖的测定[2]

微量移液器准确吸取小鼠抗凝血液0.2 ml，慢慢地将血液滴入水中，并用其水洗涤微量移液器吸头，使血液全部移入锥形瓶内，混匀。在加入1/3 mol/L H3SO4 0.4 ml，10%钨酸钠溶液0.4 ml，充分混匀。放置5~10 min。待溶液由红色变为咖啡色后，过滤收集滤液备用。滤液必须透明清亮，即无蛋白血滤液，按表2操作。

表2 小鼠血糖的测定

混匀放置3 min，将上述各管用蒸馏水3 ml稀释。将各管混匀后，用空白管调零，在波长620 nm比色，分别读取各管吸光度值，计算血糖浓度，计算公式：

2.5 统计学处理

数据采用均数±标准差( ±s )表示，采用SPSS 17.0统计分析软件进行方差分析，比较组间显著性差异。

3 结果与分析

饥饿与饱食对小鼠肝糖原及血糖的影响结果如表3。

表3 饥饿与饱食对肝糖原及血糖的影响 ( ±s )

饱食和饥饿组小鼠肝糖原含量以及血糖浓度测定结果：饱食和饥饿组小鼠肝糖原含量及血糖浓度相差很大，且个体差别也很大。饥饿与饱食进行比较小鼠血糖及肝糖原都表现为明显的降低或升高趋势（即饥饿小鼠血糖及肝糖原降低，而饱食小鼠血糖及肝糖原升高），P<0.05具有统计学意义。

[1] 吴慧平.饱食与饥饿对小鼠肝糖原含量影响的实验方法改良察[J].生物学杂志,2007,24(5):64-65,74

[2] 张翠香，罗永会，陈贵元.胰岛素及肾上腺素对家兔血糖含量影响综合实验的建立和探讨[J].临床与实验医学杂志