毛细管气相色谱法测定膨化食品中BHT、BHA的含量

2012-04-27宗万里

生命科学仪器 2012年4期

宗万里

（威海市产品质量监督检验所，山东威海 264209）

二丁基羟基甲苯（BHT）、丁基羟基茴香醚（BHA）作为油脂类抗氧化剂而广泛应用于膨化食品中。但是抗氧化剂在减缓油脂酸败的同时也给人们带来了健康风险。研究表明BHT、BHA超量使用均对人体有害[1]。所以其添加必须在规定范围内按规定限量使用，而且添加之后必须在食品标签上注明。GB 2760—2011《食品添加剂使用卫生标准》中对BHT（二叔丁基羟基甲苯）、BHA（叔丁基羟基茴香醚）用于膨化食品中的最大使用量也有一定要求[2]，因此对膨化食品中的抗氧化剂的快速准确检测方法的研究十分必要。测定抗氧化剂的检测方法有气相色谱法[3-7]、高效液相色谱法[8-10]、气相色谱质谱联用法[11-14]。本文以无水乙醇直接提取试样中的抗氧化剂，以强极性毛细管柱FFAP分离检测膨化食品中抗氧化剂含量，前处理简单，所使用试剂对实验人员的健康危害小，灵敏度高，两种抗氧化剂保留时间适中，是一种准确、可靠、快速的分析方法。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱仪：GC2010型，带氢火焰检测器，日本岛津公司；分析天平：FC204型，精度为0.1mg，上海精密科学仪器有限公司；料理机，九阳股份有限公司；BHT标准品：99.5%，5g/瓶，CHEM SERVICE；BHA标准品：99.4%，5g/瓶，CHEM SERVICE；毛细管色谱柱：FFAP（强极性，25m×0.53 mm×1μm），中国科学院兰州化学物理研究所色谱技术研究开发中心；无水乙醇:分析纯，99.7%，天津天泰精细化学品有限公司。

1.2 色谱参考条件

色谱柱：毛细管色谱柱FFAP（强极性，25m×0.53 mm×1μm）；载气（氮气）流速为10mL/min，恒定流速控制；氢气流速为40mL/min；空气流速为400mL/min；WBI进样口温度:230℃；柱温：150℃保持3min，以30℃/min升至200℃，保持1min，再以10℃/min升至230℃，保持10min；检测器温度：250℃，尾吹30mL/min；进样方式:直接注入；进样量：1μL。

1.3 溶液配制

1.3.1 标准贮备液的配制

精密称取BHT标准品100mg,置于100 mL 容量瓶中,无水乙醇溶解至刻度,摇匀。得1000μg/mL的标准贮备液。

精密称取BHA标准品100mg,置于100 mL 容量瓶中，无水乙醇溶解至刻度,摇匀。得1000μg/mL的标准贮备液。

1.3.2 标准溶液的配制

分别精密量取1、2、5、10、20mL的BHT、BHA标准贮备液至100mL容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,得BHT、BHA浓度为10μg/mL、20μg/mL、50μg /mL、100μg /mL、200μg /mL的系列混合标准溶液。每个浓度取1μL直接注入气相色谱仪进行分析。

1.3.3 供试品溶液的配制(样品前处理)

用料理机将膨化食品样品粉碎,再精确称取2.5g置于30mL具塞刻度试管中，加入无水乙醇稀释至25 mL，充分振荡摇匀、静置20分钟后吸取提取液1μL注进气相色谱仪进行分析。

2 结果与讨论

2.1 色谱图

在1.2色谱条件下, 得到BHT、BHA标准样品、空白样品、空白加标样品的色谱图, 如图1所示,BHT、BHA保留时间分别为3.9、7.9分钟左右，峰型尖锐。两种组分分离良好，最后一种组分BHA在9分钟之前流出，分析时间适中。

图1 各样品的色谱图Fig.1 Chromatography of each sample

2.2 样品前处理

甲醇、乙腈、无水乙醇三种有机溶剂均能溶解BHT、BHA，并且三种有机溶剂都不与油脂互溶，由于甲醇、乙腈的毒性较大，考虑到保护环境以及实验人员的健康，本文采用无水乙醇作为提取溶剂。在样品经行粉碎时，粉碎粒度不要过小，以防细小的颗粒堵塞进样针。如果粒度过小，可以考虑吸取5毫升提取液至5毫升刻度管中，然后用离心机离心，或用0.45μm有机膜过滤,再注入气相色谱仪进行检测。

2.3 标准曲线和最低检出限

在实验条件下，以峰面积y为纵坐标、质量浓度c/(μg/ml)为横坐标绘制标准曲线，得线性方程，以基线噪声3倍峰面积对应的质量浓度为检出限(RSN=3)[15]，回归方程、相关系数及检出限见表1。

表1 回归曲线的基本参数Table 1 Regression equation

2.4 精密度和加标回收试验

取不含BHT、BHA的膨化食品进行加标回收试验，向2.5g膨化食品中分别添加1000μg/mLBHT、BHA标准溶液0.05 mL、0.1mL、0.25mL即样品中BHT、BHA含量为20mg/kg、40mg/kg、100mg/kg。按上述提取步骤进行提取，重复6次。按1.2色谱条件进行测定，精密度和回收率计算结果列于表2。由表2数据可知，采用本方法对BHT的平均回收率分别为94.90%，96.85%，97.81%，相对标准偏差分别为2.48%，2.66%，1.06%；BHA的平均回收率分别为97.35%，96.35%，94.86%，相对标准偏差分别为1.66%，2.40%，0.93%，满足实验要求。