高效液相色谱法测定急肝退黄胶囊中盐酸小檗碱含量

2012-04-25，，

长春中医药大学学报 2012年3期

，，

(1.吉林省食品药品检验所，吉林长春 130033；2.长春中医药大学，吉林长春 130117)

急肝退黄胶囊为茵陈、黄柏、板蓝根、白茅根、苍术、郁金、秦艽、蒲公英、车前草、黄芩、麦芽、大黄、栀子诸药组成的复方制剂，用于急性黄疸型肝炎。该制剂收载于卫生部药品标准中成药制剂第2册,无含量测定方法[1-2]。本文采用高效液相色谱法测定该制剂中黄柏的盐酸小檗碱含量，结果表明，本法简便、迅速、结果准确。

1 仪器与试药

2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津),Class-vp工作站，SPD-M10AVP型紫外可见检测器(日本岛津)；KQ-50B超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号110713-200208供含量测定用)；急肝退黄胶囊(贵州省安康)；乙腈为色谱醇，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)[5];流动相：乙腈-[水-冰醋酸-三乙胺(64∶1∶1)](25∶75)；流速：1.0 mL/min;检测波长：264 nm;柱温：30 ℃；进样量：10～20 μL。理论塔板数按盐酸小檗碱峰记不低于4 000。盐酸小檗碱与相邻的杂质峰的分离度为1.54。

2.2 对照品溶液的制备精密称取在100 ℃干燥5 h的盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇制成每1 mL中含盐酸小檗碱0.1 mg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物约3 g,精密称定，置锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液50 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)40 min,放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，蒸干，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备按急肝退黄胶囊处方比例称取缺黄柏的阴性样品适量，按供试品溶液的制备方法提取阴性对照溶液。

2.5 干扰试验取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件依法测定，结果样品色谱图中与对照品溶液有相同保留时间(tR=19.2 min)的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间无此峰，说明急肝退黄胶囊的其他成分对盐酸小檗碱的测定无干扰。

2.6 线性关系考察精密吸取对照品储备液(每1 mL含0.0 966 mg)4、6、8、12、16、20 μL注入色谱仪，以上述色谱条件测定峰面积值，以峰面积为纵坐标，盐酸小檗碱的浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=-168 112.656 1+362 288 5.366X，r=0.999 7，结果表明线性关系良好。线性范围为0.386 4～1.932 0 μg。

2.7 稳定性试验取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h进样，每次20 μL，按上述色谱条件测定峰面积。得峰面积平均值27 892 03(n=7)，RSD为2.75%，表明供试品在24 h内稳定。

2.8 精密度试验取同一供试品溶液，重复进样6次，按上述色谱条件测定峰面积，测得平均峰面积为29 441 87(n=6)，RSD为1.87%。

2.9 重复性试验取同一批号供试品6分，按照供试品溶液制备项下方法处理，依上述色谱条件依法进行测定，并计算含量，结果盐酸小檗碱平均含量为0.203 mg/粒。

2.10 回收率试验采用加样回收试验，精密称取已知含量的样品6分(各约1.5 g)，精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(0.096 6 mg/mL)10 mL，按照供试品溶液制备项下方法处理,依上述色谱条件依法进行测定盐酸小檗碱的含量，并计算回收率，结果平均为98.20%，RSD为1.41%。

2.11 样品测定取5个批号的样品，按照供试品溶液制备项下方法处理，依上述色谱条件进行测定，每批测定2次，结果见表1。