电针对阿尔茨海默病模型大鼠认知行为影响的实验研究

佟 欣,刘丹丹,卫 彦,寇吉友,杨添淞,乔立达

(1.大西洋中医学院，美国佛罗里达州；2.现代中医药研究所，黑龙江 哈尔滨 150040；3.黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150040；4.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是严重威胁人类健康的常见病、多发病，是老年人一种常见的以学习记忆能力损害为主的中枢神经系统退行性疾病。AD是以记忆、认知等智能障碍为主要临床表现的慢性大脑退行性变性疾病[1]。随着人口老龄化进程的加剧，阿尔茨海默病的发病率呈升高趋势[2]，已成为继心脑血管疾病、癌症之后的又一致死疾病[3]。本组研究采用D-半乳糖(D-galactose，D-gal)建立AD动物模型，通过电针方法对其进行干预，观察其疗效，探讨其改善认知功能的效应。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康雄性Wister大鼠，清洁级，体质量(250±25)g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

1.2 主要试剂与仪器 注射用东莨菪碱(由河南竹林众生制药股份有限公司生产);D-半乳糖(由北京化学试剂公司生产)；胃饲用A1C13(由河南南宫益达化工厂生产)；跳台实验仪(参照金杰[4]设计方法自行制作)；电针仪(型号:G680，由济南宏兴达经贸有限公司生产)；无菌针灸针(华佗牌，规格:0.40 mm×25 mm不锈钢毫针，由苏州医疗用品厂有限公司生产)。

1.3 动物分组 常规喂养1周后，筛选出具有学习和记忆能力的大鼠24只,按体质量随机分为模型组、电针组和空白对照组各8只。

1.4 试验动物造模 3组大鼠均普通饲料正常食水喂养7 d。空白对照组持续上述常规饲料、饮食，胃饲和腹腔注射与模型组相同容量的生理盐水，共持续28 d，于实验观察前10 min，给予腹腔注射用东莨菪碱2 mg/kg。模型组和电针组大鼠均每日腹腔注射D-半乳糖(48 mg/kg)，每日胃饲A1C132mL，余处置同对照组。

1.5 实验方法 电针治疗：将大鼠固定于自制束鼠器操作台上,应用0.40 mm×25 mm不锈钢毫针，针刺大鼠“百会”“肾俞”“足三里”，取穴参照《大鼠穴位图谱的研制》中有关所选腧穴定位。针刺得气后，接通G6805脉冲电疗仪以连续波，频率为150 Hz,强度以大鼠肢体轻度抖动为度，1次/d，时间3～5 min。6 d为1个疗程,疗程间休息1 d,共治疗4个疗程。

1.6 大鼠认知行为观察 应用跳台实验:采用被动条件15 cm×30 cm×30 cm反应箱实验装置，箱底铺直径1 mm铜栅，接通交流电36 V，反应箱内右后侧放置一个大鼠逃避电击橡皮垫的安全区(直径和高度均4.5 cm)。大鼠受刺激后,正常的反应应是躲避电击跳到平台上。训练和测试时把大鼠放入反应箱内，置于箱内使其适应环境3 min后，接通交流电(36 V),持续达5 min。学习测试成绩：记录大鼠首次跳到橡皮垫上所需时间(即：潜伏期)、记录5 min内大鼠跳下橡皮垫的次数(即：错误次数)、记录大鼠受电击总时间。记忆保持测试成绩：24 h后重复上述试验，记录大鼠第1次跳下橡皮垫所需时间、5 min内跳下橡皮垫的次数及受电击总时间。3组大鼠均连续训练5天，于第6天进行大鼠学习成绩测试，于第7天进行大鼠记忆成绩测试；造模后第4天和第针刺干预结束后第1天进行学习成绩测试;于造模后第5天和第针刺干预结束后第2天进行记忆成绩测试。

1.7 统计学方法 所有实验数据均采用SPSS 11.0统计软件进行单因素方差分析。检验显著性水平定于P<0.05，或P<0.01。

2 结果

2.1 电针对阿尔茨海默病模型大鼠学习行为的影响比较 见表1。

表1 电针对阿尔茨海默病模型大鼠学习行为的影响比较±s)

2.2 电针对阿尔茨海默病模型大鼠记忆行为的影响比较 见表2。

表2 电针对阿尔茨海默病模型大鼠记忆行为的影响比较±s)

3 讨论

阿尔茨海默病是一种原发型、成年型、皮层痴呆，以学习记忆能力和人格改变为特征的慢性进行性神经病变[5]。AD属于中医学的“痴呆”“呆证”等范畴。正如《景岳全书》所载：“痴呆证，凡平素无疾而或以郁结，或以不遂，或以思考，或以惊恐而渐至痴呆。”《本草纲目》曰：“脑为元神之府，”《内经》：“心者，君主之官，神明出焉”。中医学认为，AD病位在脑，与心肝脾肾功能失调关系密切[6]。本病的病机为气虚血瘀，瘀血内阻，蒙蔽清窍，脑髓不足[7]。目前常用的针灸干预措施有毫针、电针、穴位注射、灸法，其中电针疗效较好[8]。笔者根据中医学经络腧穴理论，确以补肾填精、健脑益智为其治法。实验选用百会、肾俞、足三里组方。在百会与督脉相交会，而督脉也“入络脑”，具有醒神开窍、健脑益智之功，针刺其可以激发经气，使脑髓的气血之荣养而复聪；肾俞属膀胱经，是肾气输注之处，益肾填髓充脑；足三里为胃经合穴，有和胃健脾，升清降浊，导痰行滞之功[9]。诸穴配伍，共奏补肾填精、健脑益智之效，从而达到防治老年人痴呆的目的。

认知功能涉及知识获取、知识保存和知识运用的多个过程。学习记忆实验方法的基础是条件反射。跳台实验是目前较为公认的单向主动逃避实验，该实验既可观察对记忆过程的影响，也可观察对学习的影响。在本组研究中，各组大鼠随着训练次数的增加，其潜伏期均有不同程度的缩短。通过电针干预的大鼠在跳台实验的空间认知行为有明显的提高。提示电针百会、肾俞、足三里后大鼠的空间学习记忆能力有显著改善。

[1]戴思思,董克礼,朱宏.“补肾活血”针刺法对老年性痴呆模型SAMP8小鼠学习记忆能力和脑组织AChE活性的影响[J].上海针灸杂志,2010,29(1):57-59.

[2]赵立刚,马莉,郑祖艳,等.针刺“百会”“四神聪”对老年性痴呆大鼠认知行为及脑内超氧化物歧化酶的影响[J].针刺研究,2005,30(1):26-28.

[3]张迪,孙阳,王丽芹.电针百会、风府穴对学习记忆障碍大鼠的认知行为及脑内BDNF的影响[J].中医药学报,2011,39(3):113-115.

[4]金杰,陈海燕,关明智,等.健脑益智液作用的实验研究[J].成都中医药大学学报,1998,21(1):49.

[5]俞金鑫,张洪.老年性痴呆研究现状[J].吉林中医药,2010,30(9):822-823.

[6]黄太权,刘龙民,范华昌,等.补肾益精方对血管性痴呆患者认知功能影响的临床研究[J].吉林中医药,2009,29(9):771-772.

[7]毛蕾,张玉莲.补肾填精中药治疗老年性痴呆[J].吉林中医药,2010,30(5):394-395.

[8]刘佳琳,杜元灏,黎波,等.针灸治疗老年性痴呆常用治法的循证医学评价[J].吉林中医药,2009,29(10):855-857.

[9]孟培燕,孙国杰,毛娟娟,等.针刺预处理对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响[J].上海针灸杂志,2009,28(5):293-295.