半乳糖凝集素-3和细胞角蛋白19表达在甲状腺穿刺病理诊断中的应用

牛春波，王丽萍，王雪梅，崔亚南，贾飞勇，张 广

(1.吉林大学中日联谊医院病理科，吉林 长春 130033；2.吉林大学第一医院儿内科，吉林 长春 130021；

3.吉林大学中日联谊医院甲状腺外科，吉林 长春 130033)

乳头状癌是甲状腺最常见的恶性肿瘤，目前穿刺活检提高了甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)的早期诊断率[1]，使患者得到早期及时治疗而明显改善了其预后。但穿刺标本由于癌组织量过少，形态上与甲状腺良性病变(benign thyroid lesions，BTL)差距不大，使部分穿刺病例术前得不到确切的病理诊断。半乳糖凝集素-3(Galectin-3)和细胞角蛋白19(CK19)是用于甲状腺手术标本鉴别诊断的常用抗体，文献[2]报道其在甲状腺良恶性病变的鉴别诊断中具有显著意义。但在甲状腺穿刺活检标本中的应用国内外少见报道。本研究通过分析Galectin-3、CK19和Ki67蛋白在PTC和BTL的表达差异，探讨这3种抗体联合检测在甲状腺穿刺标本PTC鉴别诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料收集吉林大学中日联谊医院2010年1月—2011年8月甲状腺穿刺病理标本，选择PTC标本20例，其中男性9例，女性11例，年龄23～57岁。BTL标本16例，其中结节性甲状腺肿5例，甲状腺腺瘤样增生7例，淋巴细胞性甲状腺炎3例，肉芽肿性甲状腺炎1例；男性7例，女性9例，年龄24～55岁。

1.2 形态学观察以上标本均为10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋，HE染色制片。显微镜观察各组病例的形态特点。

1.3 蛋白表达检测及结果判定应用免疫组化EnVision法检测36例阳性染色标本中3种蛋白表达，Galectin-3、CK19和Ki67均为即用型抗体(购自福州迈新生物技术开发有限公司),按试剂盒说明书步骤进行染色。用PBS代替一抗作阴性对照,用已知阳性的PTC组织作为阳性对照。Ki-67阳性为细胞核的棕黄色颗粒，细胞核着色细胞数<1%判定为阴性，着色细胞数>1%判定为阳性；Galectin-3阳性为细胞浆的棕黄色颗粒，CK19阳性为细胞膜的棕黄色颗粒，结果按阳性细胞所占百分比并参考着色强度确定分级：阳性细胞数<10%为阴性(-)，阳性细胞11%～25%为弱阳性(+)，阳性细胞数26%～50%为中度阳性()，阳性细胞数>51%为强阳性()。

1.4 统计学分析采用SPSS 13.0软件进行统计分析,组间率的比较采用χ2检验。

2 结 果

2.1 病理形态学特点穿刺标本PTC病变组织长约0.1～1.0 cm，直径多为0.1 cm，癌细胞排列成乳头状和(或)滤泡状结构，间质纤维化常见，部分伴钙化，多向周边甲状腺组织浸润性生长，细胞核增大呈椭圆形，核染色浅呈毛玻璃样，常见核内包涵体及核沟，核沟沿细胞核长轴排列(图1，见插页四)；BTL中结节性甲状腺肿为增生的甲状腺滤泡间见多条纤维条带；甲状腺腺瘤样增生为部分甲状腺滤泡聚集增生，与正常甲状腺组织界限清楚；淋巴细胞性甲状腺炎为增生萎缩的甲状腺滤泡间散在淋巴组织及淋巴滤泡形成；肉芽肿性甲状腺炎为甲状腺滤泡间见灶状肉芽肿性炎症。BTL中增生的滤泡状结构，可有或无细胞核的异型性，即核增大毛玻璃样，部分有核沟及核内包涵体，但无乳头状结构及周边浸润。

2.2 各种蛋白的免疫组织化学表达Galectin-3阳性染色为细胞浆呈弥漫性或颗粒状棕黄色(图2A，见插页四)，部分组织仅甲状腺滤泡胶质黄染需判断为阴性。CK19阳性染色为细胞浆棕黄色颗粒(图2B，见插页四)。Ki67阳性染色为细胞核棕色颗粒，部分细胞核淡染需判断为阴性。Galectin-3、CK19和Ki67在PTC组阳性率分别为90%(18/20)、95%(19/20)及60%(12/20)，在癌旁正常甲状腺滤泡阴性表达；在BTL组阳性率分别为12.50%(2/16，均为弱阳性)、31.25%(5/16，均为弱阳性)及62.50%(10/16)，在病变旁正常甲状腺滤泡阴性表达。经统计学分析，Galectin-3 和CK19在PTC与BTL 组间表达率比较差异有统计学意义(χ2=533.89，P<0.01；χ2=72.12，P<0.01)，而Ki67在PTC与BTL组织中表达均较低，2组比较差异无统计学意义(χ2=0.10，P>0.05)。

3 讨 论

Galectin-3是相对分子质量为31 000的β半乳糖蛋白，参与多种生物学过程，如细胞之间以及细胞与基质间的相互作用，调节细胞增殖与黏附、细胞凋亡、血管生成等过程，参与肿瘤的发生发展及转移等[3-4]。目前研究[5-8]报道：Galectin-3在甲状腺癌、胃肠道癌、胰腺癌、子宫内膜腺癌、乳腺癌以及平滑肌肉瘤等恶性肿瘤的发生发展以及转移过程中起着重要的作用。研究[9]表明：Galectin-3在不同性质甲状腺病变中的表达有明显差异,即在PTC中的表达率最高,其次是甲状腺滤泡癌，在结节性甲状腺肿和滤泡性腺瘤中则无表达或弱阳性表达，因而目前普遍认为Galectin-3是鉴别甲状腺良恶性病变最可靠的一线蛋白标记物。最近Htwe等[10]研究发现：Galectin-3在PTC组织中心部的表达强于其在癌灶周边甲状腺内浸润的细胞巢，认为Galectin-3参与甲状腺乳头状癌细胞的黏附作用而影响其转移。

CK19属细胞角蛋白家族成员，常用于甲状腺、肝胆胰腺系统及肺等部位肿瘤的病理诊断。研究[11]表明：CK19在PTC组织中多呈弥漫性强阳性表达，在非典型增生和滤泡癌中呈弱阳性或灶状阳性表达，在滤泡上皮增生和正常甲状腺组织多不表达。但以往对于Galectin-3和CK19的研究多限于甲状腺乳头状癌的手术标本，在穿刺标本的应用一直少有报道[12]。

近年由于免疫组化技术水平的提高和临床对术前穿刺活检诊断要求的增加，本文作者应用免疫组化法对甲状腺穿刺小标本进行了染色，36例甲状腺良恶性病变标本Galectin-3、CK19以及Ki67均得到成功染色，发现Galectin-3和CK19在PTC组穿刺标本中的阳性率和染色强度均显著高于BTL组，表明应用免疫组化方法检测Galectin-3和CK19蛋白表达，可用于甲状腺穿刺标本良恶性病变的鉴别诊断。而Ki67在2组表达率均较低，对良恶性病变没有明显的鉴别意义。

[参考文献]

[1]Renshaw AA.Sensitivity of fine-needle aspiration for papillary carcinoma of the thyroid correlates with tumor size[J].Diagn Cytopathol,2011,39(7):471-474.

[2]Zhu X,Sun T,Lu H,et al.Diagnostic significance of CK19,RET,galectin-3 and HBME-1 expression for papillary thyroid carcinoma[J].J Clin Pathol,2010,63(9):786-789.

[3]Argüeso P,Panjwani N.Focus onmolecules: galectin-3[J].Exp Eye Res,2011,92(1):2-3.

[4]Newlaczyl AU,Yu LG.Galectin-3，a jack of all trades in cancer[J].Cancer Lett,2011,313(2):123-128.

[5]Stewart CJ,Crook ML.Galectin-3 expression in uterine endometrioid adenocarcinoma: comparison of staining in conventional tumor glands and in areas of MELF pattern myometrial invasion[J].Int J Gynecol Pathol,2010,29(6):555-561.

[6]Weissenbacher T,Kuhn C,Mayr D,et al.Expression of mucin-1,galectin-1 and galectin-3 in human leiomyosarcoma in comparison to leiomyoma and myometrium[J].Anticancer Res,2011,31(2):451-457.

[7]Kobayashi T,Shimura T,Yajima T,et al.Transient silencing of galectin-3 expression promotes both in vitro and in vivo drug-induced apoptosis of human pancreatic carcinoma cells[J].Clin Exp Metastasis,2011,28(4):367-376.

[8]Abdou AG,Hammam MA,Farargy SE,et al.Diagnostic and prognostic role of galectin 3 expression in cutaneous melanoma[J].Am J Dermatopathol,2010, 32(8):809-814.

[9]Coli A,Bigotti G,Zucchetti F,et al.Galectin-3,a marker of well differentiated thyroid carcinoma is expressed in thyroid nodules with cytological atypia[J].Histopathology,2002,40(1) : 80-87.

[10]Htwe TT,Karim N,Wong J,et al.Differential expression of galectin-3 in advancing thyroid cancer cells: a clue toward understanding tumour progression and metastasis[J].Singapore Med J,2010,51(11):856-859.

[11]Hashimoto K,Morimoto A,Kato M,et al.Immunocytochemical analysis for differential diagnosis of thyroid lesions using liquid-based cytology[J].Nagoya J Med Sci,2011,73(1/2):15-24.

[12]赵 滨，续 薇.甲状腺肿物细针穿刺细胞学诊断[J].吉林大学学报：医学版，2005，31(3)：462-463.