H PLC测定复方甘草片中甘草酸含量

李聪

（新农甘草产业有限责任公司，新疆 阿拉尔 843018）

H PLC测定复方甘草片中甘草酸含量

李聪

（新农甘草产业有限责任公司，新疆 阿拉尔 843018）

目的：建立应用高效液相色谱法测定复方甘草片中甘草酸含量的检测方法。方法：色谱柱Kromasil-Cl8柱，规格：4.6 mm×150 mm，粒度：5 μm，柱温：25℃，流动相：乙腈-0.05%磷酸（36∶64），流速：1.0 mL/min，检测波长：250 nm，进样量：10 μL，以峰面积外标法定量。结果：甘草酸浓度在48.8～585.7 μg/mL有较好的线性范围，回归方程为Y=560 4.4 X－150 29（r=0.999 9），平均回收率为100.1%（n=6），RSD=0.42%。结论：此方法适用于测定复方甘草片中甘草酸的含量。

高效液相色谱法；复方甘草片；甘草酸

复方甘草片是常用复方制剂，是镇咳祛痰类非处方药品，其成分有甘草浸膏粉、阿片粉、樟脑、八角茴香油、苯甲酸钠等[1]。现代药理研究证实，甘草中皂苷类成分甘草酸具有肾上腺皮质激素样作用和抗炎、抗溃疡、抗变态反应、解毒、镇咳、抗肿瘤、影响脂代谢、抑制艾滋病病毒等作用[2-9]，为甘草的主要有效成分。《中国药典》2010年版规定高效液相色谱 （HPLC）法测定复方甘草片中的甘草酸，流动相为乙腈-0.025 mol/L磷酸二氢钾-0.002 5 mol/L庚烷磺酸钠（33∶33∶44），色谱柱为 C18，检测波长 250 nm[10]，作者采用该法检测，重复性达不到分析要求，本研究在该法的基础上参考 《英国药典》2009年版应用乙腈-水-乙酸（30∶64∶6），色谱柱为C18，检测波长254 nm检测甘草酸[11]，就此问题进行研究，旨在建立一个具有较好的灵敏度和准确度，操作简便、快速，重现性好的检测方法。

1 材料与方法

1.1 仪器

美国Laballiance高效液相色谱仪系列，包括SeriesⅢ输液泵、Model 500紫外-可见光检测器、LC 241 Plus自动进样器，Laballiance色谱数据工作站。

1.2 试药

对照品:甘草酸铵（原中国药品生物制品检定所提供，含量测定用），样品:复方甘草片（本公司提供），乙腈（上海星可生化有限公司生产，色谱纯），磷酸（美国 TEDIA生产，色谱纯），乙醇（西安化学试剂厂生产，分析纯），水为二次重蒸水。流动相经0.45 μm微孔滤膜过滤，经超声波脱气处理。

1.3 色谱条件

色谱柱:Kromasil-Cl8柱（4.6 mm×150 mm），粒度5 μm，柱温:25℃，流动相:乙腈-0.05%磷酸（36∶64），流速:1.0mL/min，检测波长:250 nm，进样量:10 μL。

1.4 对照品溶液的制备

精密称取甘草酸铵对照品16.09 mg，置25 mL容量瓶中，加入70%乙醇超声处理使溶解，取出，放冷，稀释至刻度，摇匀，即得（甘草酸/甘草酸铵= 0.979 7）。

1.5 标准曲线的建立和线性范围

分别稀释上述甘草酸铵对照品溶液，浓度为49.8、99.6、149.5、199.3、249.1、298.9、348.7、398.6、448.4、498.2、548.0、597.8 μg/mL，在上述色谱条件下进样10 μL，得色谱（见图1），以浓度为横坐标，相对应峰面积为纵坐标，制作标准曲线（见图2），回归方程为

r=0.999 9，甘草酸浓度在48.8～585.7 μg/mL有较好的线性范围。

1.5 重复性试验

连续进样对照品溶液 （0.201 8 mg/mL）6次，每次10 μL，分别得峰面积:1 109 986、1 110 995、 1 109 994、1 108 924、1 108 989、1 110 997（色谱见图1），平均值:1 109 981，RSD:0.08%。

图1 对照品溶液甘草酸的色谱

图2 标准曲线

1.6 供试品溶液的制备及测定

取复方甘草片，分别称取6个批号且每1个批号精密称定1片置50 mL量瓶中，加70%乙醇45 mL，超声处理（功率 200 W，频率 50 kHz）30 min，取出，放冷，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，注入10 μL，测定，本试验测试6个批号样品，结果见表1，色谱见图3。

表1 复方甘草片中甘草酸含量

图3 供试品溶液色谱

1.7 回收率实验

取表1中6个批号的复方甘草片样品各1片，溶于50 mL容量瓶中，均精密加入1.24 mg甘草酸，按上述供试品溶液的制备及测定甘草酸含量，计算回收率，测得平均回收率为 100.1%（n= 6），RSD=0.42%，结果见表2。

表2 加样回收率实验结果

2 比较

按 《中国药典》2010年版复方甘草片项下规定高效液相色谱法测定甘草酸含量，批号100335平行做6次，测得每片含量分别为6.01%、6.13%、6.31%、6.05%、6.52%、6.08%，RSD=3.16%，本研究方法检测有更好的重复性和精密度。

3 结论

本研究采用的HPLC法测定复方甘草片的甘草酸含量，有较高的灵敏度和准确度，操作简便、快速，重现性好，并且和《中国药典》2010年（一部）甘草浸膏的甘草酸检测的流动相一致，做2个品种时只需要通过双泵改变流动相比例即可，增强了此方法的可操作性，此方法可以作为复方甘草片中甘草酸的定量方法。

参考方献：

[1] 范瑞，刘汝成，冯慧.高效液相色谱法测定复方甘草片中甘草酸的含量[J].海峡药学，2010，22（8）:113-114.

[2] 陈红.甘草药理作用概述[J].海峡药学，2005，17（4）:37-41.

[3] 王惠敏.甘草药理作用及其临床应用[J].天津中医学院学报，2004，23（4）:184-185.

[4] Aly AM，Al-Alousi L，Salem HA.Licorice:a possible anti-inflammatory and anti-ulcer drug.[J].AAPS Pharm Sci Tech，2005，6（1）:E74-82.

[5] 杨德柱，刘建华.高效液相色谱法测定甘草浸膏中甘草酸的含量[J].中华医药学杂志，2004，3（2）:79-80.

[6] 刘秀英，王翔朴，贺全仁，等.甘草甜素和齐墩果酸对大鼠镉中毒性肝损伤的防护作用与机理[J].中国公共卫生，2000，16（1）:21-24.

[7] 贾道全，罗成福，张正，等.甘草甜素逆转肝纤维化及早期肝硬化的作用探讨[J].中国消化杂志，2001，21（12）:754-756.

[8] 马涛，曹颖林，白虹，等.甘草提取物对五氯硝基苯造成肝损伤的保护作用[J].沈阳药科大学学报，2002，19（4）:275-277.

[9] 高鸿霞，邵世和，王国庆.中药甘草研究进展[J].井冈山医专学报，2004，11（5）:8-11.

[10] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）[M].北京:中国医药科技出版社，2010:376.

[11] The British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia 2009[M].London:Stationery Office Bo，2008:7127-7129.

Content Determination of Glycyrrhizic Acid in Compound Liquorice Tablets by HPLC

Li Cong（Xinnong Licorice Industry Co.Ltd.，Xinjiang Alaer 843018，China）

Objective:To establish a method for the content determination of glycyrrhizic acid in compound liquorice tablets by HPLC.Methods：The Kromasil-C18（4.6 mm×150 mm）separation column was used with the column temperature at 25℃.The mobile phase was acetonitrile-0.05%phosphoric acid（36∶64），the flow rate was 1.0 mL/min，the UV detection wavelength was at 250 nm，and the sample volume was 10 μL.The external standard method of peak area was employed for quantitative analysis.Results：A good linearity was obtained in the range of 48.8～585.7 μg/mL，regression:Y=560 4.4 X－150 29（r=0.999 9），the average recovery was 100.1% （n=6，RSD=0.42%）.Conclusion:This method is good for the content determination of glycyrrhizic acid in compound liquorice tablets.

HPLC；Compound Liquorice Tablets；Glycyrrhizic Acid

10.3969/j.issn.1672-5433.2012.04.005

2011-12-03）

李聪，男，助理工程师。主要从事药品检验工作。E-mail：slit911@163.com