食管癌中人乳头状瘤病毒感染和P53的关系

张云虹

人乳头状瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一种高度特异性的嗜上皮性病毒，属双链闭环的小DNA病毒，它由蛋白衣壳这层外衣和被包裹着的核心构成。我国是食管癌高发区，食管癌居我国癌症死因的第四位，食管癌的发生发展和许多因素有关系，近年来HPV感染和食管癌的发生之间关系的研究越来越受到重视。本文通过免疫组化SP法检测HPV和P53在60例食管癌及其癌旁组织中的表达情况，来探讨HPV感染在食管癌和癌旁组织中的不同及与P53表达的相关性。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选择2009年9月至2011年9月河北省衡水市第二人民医院病理科存档食管癌石蜡标本60例，常规4%中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm切片，采用福州迈新生物有限公司的金·多聚赖氨酸粘附玻片行免疫组化。60例食管癌均为鳞状细胞癌，其中有17例发生淋巴结转移。

1.2 主要试剂 (1)鼠抗人人乳头状瘤病毒(广谱)单克隆抗体，克隆号BPV-1/1H8+CAMVIR，由上海太阳生物技术有限公司提供;(2)鼠抗人P53蛋白免疫组化单克隆抗体，克隆号DO-7，由福州迈新生物有限公司提供。

1.3 免疫组化实验 主要步骤:(1)石蜡切片常规脱蜡、水化;(2)柠檬酸盐抗原修复液高温修复;(3)滴加过氧化物酶阻断剂;(4)滴加正常非免疫动物血清;(5)滴加第一抗体;(6)滴加生物素标记的第二抗体;(7)滴加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶试剂;(8)DAB显色剂显色，苏木素复染，中性树胶封固。免疫组化均设有阳性对照(图1)，结果判读采用双盲法，由两位中级以上职称的病理医师阅片。

1.4 结果判断 HPV和P53阳性者细胞核内有棕黄色颗粒沉着，胞质胞核同时着色，仅胞质着色或胞质、胞核均不着色则判断为阴性。

1.5 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，两样本率比较采用四格表χ2检验，数据相关性采用Spearman等级相关进行统计分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 食管癌和癌旁正常上皮中HPV的感染情况 60例食管癌中HPV阳性的12例(20.0%)，癌旁正常鳞状上皮中HPV阳性的3例(5.0%)，食管癌和癌旁正常组织阳性率比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。HPV细胞核呈棕黄色为阳性(图2～4)。

2.2 食管癌组织中P53的表达与分布 P53为细胞核着色(图5)，60例食管癌中有阳性41例(68.3%)，癌旁正常鳞状上皮基本上不表达，仅在基底层可出现部分阳性(正常鳞状上皮基底层亦可部分阳性)，癌旁不典型增生的鳞状上皮可呈现阳性表达(图6)。

图1 HPV对照(外阴 女21岁)(免疫组化×200)

图2 HPV染色癌组织浸润肌层(免疫组化×100)

图3 HPV染色癌组织内见残存食管腺(免疫组化 ×100)

图4 HPV染色 癌细胞核着色且见角化珠(免疫组化×200)

图5 P53染色 癌细胞核着色且见角化珠(免疫组化×200)

图6 P53染色癌周不典型增生鳞状上皮阳性(免疫组化×100)

2.3 HPV感染和P53表达之间的关系 运用Spearman等级相关分析，食管癌中HPV感染和P53表达有一定的相关性(rs=0.5097，P=0.0000)。见表1。

表1 食管癌中HPV感染与P53表达之间的关系 例

3 讨论

99%的宫颈癌合并HPV感染［1］。宫颈癌发病的主要病因就是持续性的高危型的HPV感染，HPV的E6、E7蛋白是病毒的主要致癌蛋白，它们与细胞的转化和致癌性有密切关系，持续感染高危型的HPV16/18以后，E6、E7蛋白能改变调控宫颈上皮的正常周期的信号途径，使细胞周期失控而发生永生化［2］。而HPV感染与食管癌发生的关系远不如其与宫颈癌关系那么明确。食管癌的发生与HPV感染有关最早是由Syrjanen等［3］于1982年提出来的，随后许多学者也做了相关的研究，但结论不一。HPV的检出率与食管癌的关系因不同的地区，不同的标本来源以及不同的检测方法而有所差异［4，5］。本文应用免疫组化SP法检测出的食管癌中HPV感染的阳性率为 20.0%。

P53蛋白具有特异性的转录调节作用，是细胞生长周期的负调节因子，它与细胞周期的调控、细胞分化、DNA修复及细胞的凋亡有关。P53基因的突变与人类50.0%的肿瘤发生有关，它是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因［6，7］。本文中突变型P53(免疫组化方法只能检测到较稳定的突变型的P53蛋白，野生型的P53半衰期短，不易检测)在食管癌中高表达(68.3%)，而在癌旁正常鳞状上皮基本上不表达，仅在基底层可出现部分阳性，癌旁不典型增生的鳞状上皮可呈现阳性表达。该结果说明了突变型P53蛋白在食管癌的发生发展中可能起了很重要的作用。而文中HPV和P53蛋白的表达呈正相关，则可能说明了HPV通过上调突变型的P53而起到了致癌的作用。

目前，在世界范围内HPV与食管癌的关系尚存在一定的争议，但是不断完善的新的HPV检测技术推动了对食管癌病因学的研究。本文的结果初步显示了HPV感染与食管癌的发生有一定的关系，但最终确定HPV和食管癌的关系还需要大量的研究工作。进一步认识食管癌的发病机制及HPV的生物学特性可以为最终预防和治疗HPV引起的食管癌提供强有力的理论指导。

1 Adersson S，Rylander E，Larsson B，et al.The role of human papillomavirus in cervical carcinoma carcinogenesis.Int J Cancer，2001，37:246-256.

2 Talora C，Cialfi S，Segatto O，et al.Constitutively active Notchl induces growth arrest of HPV-positive cervical cancer cells via separate signaling pathways.Exp Cell Res，2005，305:343-354.

3 Syrjanen KJ.HPV infections and esophageal cancer.J Clin Pathol，2002，55:721-728.

4 朱林忠，苏秀兰，陈克能，等.人乳头瘤病毒16在食管癌不同人群中的检出率.癌症，2005，24:870-873.

5 张爱荣.多项肿瘤标志物联合检测对食管的诊断价值.中国基层医药，2011，18:549-550.

6 金磊，曹勤.人乳头状瘤病毒在食管癌中的表达及其作用.胃肠病学，2007，12:36-39.

7 杨胜利，杨明，杨劼，等.Survivin与P53、Rb蛋白在我国南北高发区食管癌组织中的表达及其临床意义.中国现代医学杂志，2009，19:2258-2260，2264.