中药薄层色谱鉴别的实习带教探讨

黄月纯

中药薄层色谱鉴别的实习带教探讨

黄月纯

（广州中医药大学第一附属医院，广州510405）

毕业实习是中药学或药学专业教学计划中的重要组成部分，是学生从学校走入工作实践的重要桥梁，医院药学部（药剂科）的药检室是临床实习带教的主要部门之一，对药检室中药检验的薄层色谱鉴别的实习带教进行了探讨。

药检室；中药；薄层色谱法；实习带教

毕业实习是学生从学校走入工作实践的重要桥梁，通过实习可巩固所学的基础知识，培养学生的操作技能，有利于提高分析和解决实际问题的能力。我院药剂科每年均承担较重的中药或药学专业毕业实习带教任务，药检室是药剂科实习班组之一，一般安排学生实习时间多为2～4周，时间较短，但涉及的专业知识面较广。近年国家有关部门对医院制剂的质量控制要求不断提高，要求制剂用的中药尽可能检验合格后投料，因此，制剂用中药的检验工作已成了药检室的重要工作之一。本文根据学生实习时间及以往带教中遇到的问题对药检室中药检验的薄层色谱鉴别实习带教模式进行探讨。

1 岗前安全培训、准确度和精密度的学习

中药薄层色谱鉴别涉及有毒或易燃易爆等危险化学试剂，在实验前应介绍药检室的试剂室管理制度及化学试剂使用管理制度，巩固学生的安全意识。药品检验的取样量问题，是一个简单而容易忽视的问题。因此，在实验前应让学生掌握取样量的准确度和试验的精密度[1]，能正确“称重”或“量取”，减少在实验中可能出现的差错。

2 薄层色谱技术的介绍

中药的真伪优劣直接关系到制剂质量的安全和有效。目前中药真伪鉴别方面通常采用性状鉴别、显微鉴别和薄层色谱鉴别等。薄层色谱因具有良好的专属性，自《中国药典》1990年版起，被广泛应用于中药鉴别中。前些年我国中药薄层色谱鉴别基本是以手工点样、实验室自制薄层板进行试验，色谱质量往往不高，分离度、重现性均难以达到满意效果。近年政府对药检部门的设备投入明显加大，为进一步提高中药薄层色谱鉴别技术提供了良好的条件。自《中国药典》2005年版开始，逐渐使用商品预制薄层板，进一步细化操作条件。对供试品溶液的制备、薄层板的活化、点样、展开、显色、色谱图像的拍摄和制作等均有新的要求，色谱质量有了明显提高。

根据对近年到药检室的中药或药学专业实习生的了解，他们在学校的实验课中较少涉及薄层色谱鉴别的规范化操作，或大多只是曾经在实验室进行自制薄层板手工点样的简单操作，色谱质量往往很不理想。因此，在实验前就薄层色谱实验操作技术方面的一些共性问题对学生进行介绍非常有必要。

3 薄层色谱实验操作技术的掌握

3.1 样品的制备 中药供试品溶液的制备一般用溶剂提取法（加热回流、超声提取等）。如样品含有较多的杂质，如鞣质、叶绿素、糖、粘液质等，多采取适当的预处理，减少杂质的干扰，以便获得比较清晰的薄层色谱。中药饮片样品的预处理相对简单，容易操作。但应提醒学生注意供试品溶液及对照药材溶液制备相对量化操作，目的是使样品的色谱与对照药材的色谱更有可比性。

3.2 薄层板的准备 学生开始实验时，最好先用手工自制板进行试验，但必须注意保证自制板的质量。有条件的情况下最好采用预制薄层板。有学生认为预制薄层板可以直接使用，实际上预制板贮藏时间过长，表面涂布的硅胶吸附剂容易被污染，需要在使用前用甲醇、甲醇－二氯甲烷混合溶剂或异丙醇在不密闭的展开缸中上行展开至最前沿，取出晾干，重新活化[2]。有学生认为预制薄层板一定比手工自制板效果好，其实未必，对某些成分（如黄酮类）采用手工自制板效果往往也较理想。

3.3 点样 样品的点样是影响色谱效果的主要因素之一，为了保证色谱的图谱质量，药检部门多采用半自动或自动的条带式喷雾点样，少数品种是点状点样。实际应用中如无相应的仪器，也可手工接触式点状点样或条带点样，但操作需要细致小心，原点尽量减少溶剂扩散现象，特别是点样量较大时更要注意。学生开始点样操作时技术不好，往往损伤薄层板板面，斑点过大；同时，当活化后的硅胶薄层板从干燥器中取出，从准备点样到展开前，薄层板是暴露在实验室的大气中，薄层板的活性就取决于实验环境的相对湿度，暴露时间过长，容易影响薄层板的活性。因此，可让学生先在自制薄层板训练，掌握点样技巧后方能在预制薄层板操作。此外，应指导学生控制供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液尽可能定量制备，定量点样，则样品色谱不仅可以鉴别“真伪”，还可以粗略地进行量化评价，在一定程度上提供“优劣”的信息[2]。

3.4 展开 样品的展开也是影响色谱效果的主要因素之一，也是学生容易疏忽的部分，在带教时应提醒学生注意一些容易疏忽的问题。薄层展开用薄层色谱专用展开箱最多的是直立式展开箱，双槽展开箱具有节省溶剂、便于预平衡、可控制展开箱内相对湿度等优点，应用最多。但学生在操作时常对饱和状态控制不好，如展开箱在通风柜中饱和后，在加薄层板过程时间过长，使饱和状态的溶剂蒸气挥发，达不到饱和状态，因此，应迅速加入薄层板，同时展开注意展开箱的密闭。大多数中药样品适宜用直立式不饱合或部分饱和。展开剂用的溶剂需使用分析纯级别，临用前配制，不可多次反复使用，这点也需提醒学生注意。展开剂如需分层，则放置分层后按要求分取上层或下层，备用。此外，由不同极性有机溶媒组成的展开剂常有少量不易察觉的分层现象，会严重影响展开效果，因此，展开剂配好后可先放置片刻，再将上清液倒入展开箱中。多数品种展距为70～90mm，取出，晾干。

3.5 显色 色谱斑点本身有颜色者可直接在日光下观察，斑点在紫外光激发下可发射荧光者，可直接在紫外光灯下观察荧光色谱。中药大多需要用显色剂使斑点显色，常用喷雾法，但需将试剂均匀喷洒于薄层板面，直接观察或加热显色后观察。加热显色须注意加热时间和温度，如用含羧甲基纤维素钠的手工自制薄层板代替预制板，注意加热温度过高或加热时间过长，容易引起板面的焦化，如用硫酸等显色剂，更易造成板面的炭化而影响显色效果，需要特别留意。但有些方法只是说加热至斑点显色清晰，未注明加热温度，学生往往把握不好，无法达到色谱要求，如白芍中芍药苷的鉴别[3]，方法为喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，如温度控制在60℃左右，斑点为清晰的蓝紫色，如温度超过100℃，则对照品斑点都有可能消失。有的品种需熏以试剂或试液的蒸气显色，如延胡索熏以碘蒸气后检视[3]，但应挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯（365nm）下检视，否则斑点颜色明显较暗。

4 选择有代表性的中药 让学生参与检验全过程

大黄是常用中药，《中国药典》大黄项下薄层色谱鉴别方法[3]涉及薄层色谱的多个方面，具有代表性，可作为学生带教的典型实例。供试品溶液的制备是先采用甲醇加热回流提取，滤液蒸干后加水溶解，加盐酸水解，然后用乙醚提取游离蒽醌，制备方法涉及回流提取、水解、液液萃取方法等。采用大黄对照药材及大黄酸对照品进行对照，大黄对照药材可采用掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄，因为这三种大黄均具有大黄的五个游离蒽醌斑点。采用以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板，可为手工铺板，但应注意手工板质量。展开剂采用石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上层溶液，因为石油醚（30～60℃）沸点较低，在室温较高条件下展开，石油醚容易挥发，造成展开剂系统极性增大，斑点展距偏低，分离度不佳，因此，应指导学生在适宜的实验温度下操作。展开晾干后先置紫外光灯（365nm）下检视游离蒽醌的橙黄色荧光斑点，然后置氨蒸气中熏后，游离蒽醌斑点变为红色。通过大黄等典型实例的带教，让学生参与检验全过程，能加强学生对薄层色谱技术的掌握。

根据学生的实习时间及学习要求，本文对药检室中药检验的薄层色谱鉴别实习带教模式进行了探讨，以期有效地提高学生的实验操作技能，提高实习质量。

[1] 黄月纯.药检室制剂检验的实习带教模式探讨[J].现代医院,2011,11(5): 126-127.

[2] 国家药典委员会.中国药典中药材薄层色谱彩色图集(第一册)[S].北京:人民卫生出版社,2009:6.

[3] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010,96 (130):22.

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.18.047

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