HPLC测定十味黑冰片丸中没食子酸含量

2012-01-25张小青张雪菊

中国民族民间医药 2012年19期

关键词：冰片回收率供试

张小青张雪菊

甘肃奇正藏药有限公司，甘肃兰州730100

HPLC测定十味黑冰片丸中没食子酸含量

张小青张雪菊

甘肃奇正藏药有限公司，甘肃兰州730100

目的:研究十味黑冰片丸中没食子酸含量HPLC的测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为乙腈－4%磷酸溶液(5:95)，检测波长为272nm，流速0．8mL·min－1。结果:没食子酸对照品在0．4～2．0ug浓度内线性关系良好，r=0．9993。平均加样回收率99．64%，RSD为0．22%(n=6)。结论:该方法准确可靠、简便，可用于十味黑冰片丸的质量控制。

十味黑冰片丸;没食子酸;HPLC;含量测定

本文选择了测定诃子药材中没食子酸的含量作为本品质控定量指标，采用了十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，建立了准确、简便、可靠的没食子酸分析方法，能有效的控制该产品的质量，利于提高药品生产质量管理水平。

1 仪器、试剂与样品

仪器高效液相色谱仪(美国Aglient公司1200系列)包括:Aglient1200双元泵，自动进样器，紫外检测器，柱温箱，色谱工作站、CSF－IB超声波清洗器(上海超声波仪器厂)

试剂乙腈、甲醇均为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸水。

对照品没食子酸(中国药品生物制品检定所，批号:110831－2009);

样品十味黑冰片丸(20101101、20101102、20101103由本研究院提供)。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Aglient－XDBC18色谱柱(4.6mm×150mm，5um);流动相:乙腈－4%磷酸溶液(5:95);流速:0.8ml·min－1;检测波长:272nm;柱温:25℃。理论板数n=7024;相邻峰分离度R=2.06;拖尾因子T=0.977。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备取没食子酸对照品10.30mg，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，制成浓度为0.412mg·mL－1的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品细粉约0.6g，精密称定，置100ml量瓶中，精密加入甲醇80ml，超声处理30分钟，放冷，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.2.3 阴性对照液的制备按处方中药味的比例，自配不含诃子药材的阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备成阴性液。

2.3 线性关系的考察

精密吸取没食子酸对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品的进样量(ug)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为y=4954.7x－35.949(r=0.9993)，没食子酸在0.4～2.0ug范围内呈良好的线性关系。结果:进样量为0.412时，峰面积为2067.33;进样量为0.824时，峰面积为4036.64;进样量为1.236时，峰面积为6019.50;进样量为1.648时，峰面积为8049.14;进样量为2.060时，峰面积为10267.80。

2.4 空白试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液各10ul，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，结果阴性对照液在与没食子酸对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。

2.5 精密度试验

精密吸取浓度同一对照品溶液10μl，连续进样5次，测定峰面积，结果第1次峰面积为4036.83，第2次峰面积为4029.06，第3次峰面积为4068.91，第4次峰面积为4026.26，第5次峰面积为4027.25;5次平均值为4037.66，RSD值为0.47%。试验结果表明，精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一供试品(批号20101101)溶液10μl，分别于配制后0、2、4、6、8、12h进样，测定峰面积，结果0h峰面积为3167.02，2h峰面积为3161.08，4h峰面积为3151.82，6h峰面积为3184.68，8h峰面积为3158.97，12h峰面积为3176.25;各个时间段平均值为3163.63，RSD为1.37%。试验结果表明，供试品溶液在12小时内基本稳定。