白芷乙醇提取物镇痛作用研究

邢俊波，曹 红，王国佳

(中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所，北京100071)

白芷为伞形科植物白芷的干燥根，性温，味辛，具有散风除湿，通窍止痛，消肿排脓的功效［1－2］，临床上主治感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、牙痛等症。历版《中国药典》均有收载。为了进一步对其进行研究开发，本文对白芷乙醇提取物(Ethanol extract of Radix Angelicae dahuricae，EEAD)的镇痛作用进行了初步研究。

1 实验材料

1.1 药品与试剂 EEAD的制备

实验用白芷购自北京绿野饮片有限公司，由总后药检所中药室邢俊波鉴定为伞形科植物白芷Angelica dahurica(Fisch.Ex Hoffm.)Benth.Et Hook.f.的干燥根。取白芷药材，加8倍量的70%乙醇，浸泡24 h，2 mL/min渗漉，干燥，得到白芷流浸膏，出膏率为22.9%。每克浸膏相当于4.4 g原药材，临用时以0.5%吐温－80溶液配成所需浓度。阿司匹林片(北京市曙光药业有限责任公司，批号100928);吐温－80(分析纯，中国医药公司，批号920920)，36%醋酸(北京化工厂，批号20061211)，水为蒸馏水。

1.2 仪器

ME215S电子天平，由德国赛多利斯公司生产;GJ－8402型热板测痛仪，由中国浙江宁海白石电子医药仪器厂生产;DK98－1电热恒温水浴锅，北京赛伯乐仪器公司。

1.3 动物

昆明种雌性小鼠，体重18～22 g，购于军事医学科学院动物实验中心。

1.4 数据处理

2 实验方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

按照小鼠平均体重20 g，灌胃0.4 mL，计算得高浓度、中浓度、低浓度的白芷浸膏溶液(相当于白芷原药材/小鼠体重为 4 g/kg、2 g/kg、1 g/kg)的浓度为0.045 5 g/mL、0.022 75 g/mL、0.011 38 g/mL。

精密称取白芷浸膏4.55 g，研细，置于100 mL容量瓶，加吐温80适量，加蒸馏水至刻度，摇匀，定容。制得高浓度白芷浸膏溶液。用移液管量取25mL和12.5 mL的高浓度白芷浸膏溶液，分别置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，得中浓度和低浓度的白芷浸膏溶液。

阿司匹林片每片重约0.5 g，按70 kg人体重算0.007 2 g/kg体重，10倍于人的给药剂量给小鼠，按照小鼠平均体重20 g，灌胃0.4 mL计算得阿司匹林片浓度为0.003 6 g/mL。精密称取阿司匹林片0.361 9 g，置于100 mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，定容，摇匀，配制成0.003 6 g/mL的阿司匹林片溶液100 mL。

用移液管移取36%的醋酸溶液1.7 mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，定容即得0.6%的醋酸溶液。

2.2 热板法

2.2.1 热板温度 调节温度水浴恒定于(55±0.1)℃

2.2.2 动物筛选 取雌性小鼠放入烧杯后，30 s内有舔后足反应者为合格小鼠，对逃避跳跃者和30 s内不出现添后足者，弃之不用。

2.2.3 实验分组 用GJ－8402热板测痛仪，温度为(55±0.5)℃，记录小鼠足底接触热板至出现舔后足的时间(S)，即热板反应潜伏期作为痛阈指标，室温18℃ 左右，选用预筛基础痛阈值在5S～30 S之雌性小鼠40只，8只一组，分空白、阿司匹林片、高浓度、中浓度、低浓度5个组，空白组给药蒸馏水，按照0.2 mL/10g小鼠体重给药，每只小鼠给药0.4 mL，连续给药3天。

2.2.4 测痛阈值 小鼠给药前禁食12 h(不禁水)，第3天给药前测定小鼠痛阈值一次，在口服给药后20、40、60、90 min各测痛阈值一次，并记录痛阈值。给药后，若小鼠在热板上60 s仍无痛觉反应，应取出，按60 s计算。按下式计算痛阈提高百分率。

2.2.5 实验结果 结果见表1。

表1 白芷提取物素对热板致小鼠疼痛反应的影响

结果表明，白芷提取物可以显著延长小鼠热板反应的潜伏期，给药后90 min最明显。

2.3 扭体法

2.3.1 实验分组 50只小鼠，雌雄各半，10只一组，分空白、阿司匹林片、高浓度、中浓度、低浓度5个组，空白组给药蒸馏水，按照0.2 mL/10g小鼠体重给药，每只小鼠给药0.4 mL，连续给药3 d。

2.3.2 测扭体次数 给药30 min后，各组小鼠腹腔注射新制的0.6%醋酸0.2 mL/只。分别在注射醋酸溶液后15～30 min内出现的扭体反应(即腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起、蠕行)次数及时间，记录结果。

2.3.3 实验结果 结果见表2。

表2 白芷提取物对醋酸所致小鼠疼痛的影响

结果表明，白芷提取物和阿司匹林片都能延长扭体反应出现的时间，白芷提取物高浓度组与中浓度组能显著抑制小鼠扭体反应出现次数，其中高浓度组效果最明显。

3 讨论

3.1 在热板实验小鼠筛选过程中，正常小鼠一般放入烧杯后10～15 s内出现不安，举前肢，添后足，踢后肢，跳跃等现象。这些动作均不作为疼痛指标，只有舔后足才作为疼痛的指标。不用雄鼠，阴囊可触烧杯底部，易呈现敏感反应。

3.2 扭体实验时，0.6%醋酸溶液在临用时新配为宜，存放过久可使作用减弱。小鼠体重轻，“扭体反应”次数较低。镇痛百分率大于50%时，才能认为有镇痛效力。室温以20℃为宜，低温时，小白鼠扭体次数减少。动物的疼痛反应个体差异较大，因此实验用动物数越多结果越可靠。

3.3 白芷作为一种解表药，在临床治疗各种类型的疼痛症状中广泛应用。本实验结果表明EEAD在以上的经典实验中镇痛效果确切，且维持时间较长，对其进一步进行新药研发提供了依据。

［1］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:97.

［2］魏玉平，刘 俊，严小林，等.白芷治疗头痛的提取工艺评判指标的研究［J］.中草药，200l，32(4):318.