科技进展

在PRRSV非结构蛋白2（nsp2）的非必需区插入的标记疫苗的外源基因稳定表达

猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)非结构蛋白2(nsp2)在PRRSV各株显示高度的多样性和可变性，nsp2区域中间的一些序列对于病毒的复制不是必要的。最近的研究试图在nsp2的不重要的区域插入外源基因，然而插入外源基因在体外不能被重组病毒稳定表达。

本研究在减毒疫苗毒株HuN4-F112（疫苗株HuN4-F112是高致病性PRRSV HuN4株的减毒株）的nsp2区域删除75个核苷酸 （25个氨基酸），然后插入一个编码新城疫病毒（NDV）核蛋白 （NP）的B细胞优势表位基因 （49个氨基酸），构建了一个感染性的cDNA克隆。

全长cDNA感染性克隆在体外感染细胞，拯救出重组病毒 （rHuN4-F112-Δ508-532），删除 75核苷酸和插入 NDV NP基因并没有影响病毒的复制。它们和改造前的病毒具有相似的生长动力学特点。

重组病毒在细胞上传20多代，通过免疫荧光分析 (IFA)和染色体基因组测序，可知插入的基因稳定表达。

为了评价重组病毒作为疫苗的免疫效果，我们给仔猪免疫重组病毒并且用致死剂量的高致病性PRRSV攻毒。免疫仔猪产生抗NDV NP和PRRSV的特异性抗体，没有产生对抗删除nsp2 25aa的抗体。攻毒后，所有的免疫仔猪没有出现临床症状或死亡，而对照组的猪只在攻毒后10天全部死亡。

这个试验的结果显示重组PRRSV可作为标记的备选疫苗。

译自：Xu YZ，Zhou YJ，Zhang SR，et al.Stable expression of foreign gene in nonessential region of nonstructural protein 2 (nsp2) of porcine reproductive and respiratory syndrome virus：Applications for marker vaccine design.Vet Microbiol，2012 Mar 30.[Epub ahead of print]

胸膜肺炎急性发作时放线杆菌的转录概况

细菌在其自然宿主内的基因表达谱可以洞察宿主-病原体相互作用和细菌感染的分子决定因素。本研究检测了胸膜肺炎急性发作时猪胸膜肺炎放线杆菌的转录概况。

我们对比分析了25只患病猪肺脏损伤组织分离的胸膜肺炎放线杆菌的转录概况 （样品在攻毒后6、12、24小时采样）。攻毒6个小时内，可在猪的肺脏观察到局灶性纤维蛋白出血性病变，这表明胸膜肺炎放线杆菌已设法在宿主体内成功地安顿下来。

我们识别了237个不同的调控基因，这些基因编码的蛋白与细菌在宿主体内寄生和生存有关。这些蛋白质由许多主导不同方面能量代谢的基因控制，特别是厌氧呼吸及碳水化合物的代谢。显示早期感染时，细菌外膜和蛋白质翻译后加工的改变也是重要的。结果表明，胸膜肺炎放线杆菌利用各种战略增加其适应性，如应用钠泵作为一种替代方法获得能量。此外，转录数据提供了胸膜肺炎放线杆菌逃避宿主诸多免疫因素和在恶劣环境中 （在宿主巨噬细胞内）生存的潜在线索。它能在巨噬细胞内生存可能与脲酶活性，动员各种应激反应相关，细胞表面的唾液酸使其逃避宿主的防御系统。

这些数据强调了胸膜肺炎放线杆菌随着宿主状态进行代谢调整的重要性，帮助人们深入了解胸膜肺炎放线杆菌高效入侵和在急性发病时定植和留存的机理。

译自：Klitgaard K，Friis C，Jensen TK，et al.Transcriptional Portrait of Actinobacillus pleuropneumoniae during Acute Disease-Potential Strategies for Survival and Persistence in the Host.PLoS One，2012 Apr 17.[Epub ahead of print]

明确人和猪的鞭虫基因的特殊性

鞭虫 （毛首线虫）能导致世界范围内约600百万人得病，大多在发展中国家。鞭虫也感染其他动物，包括猪 (T.suis)，狗 (T.vulpis)和非人灵长类动物，使被感染动物和人患相似的鞭虫病。虽然鞭虫物种一直被认为是具有宿主特异性的，但这一观点具有相当大的争议，多年来，T.trichiura和T.suis是否属同一种是有争议的。

这里，我们将人源和猪源鞭虫整个线粒体基因组进行对比，通过系统发生分析，验证了这一假说——人和猪的鞭虫是不同种的。这一结果与先前比较核糖体DNA得出的结论一致。

未来将进行大规模的研究工作证实T.trichiura在猪及T.suis在人中是否存在。

译自：Liu GH，Gasser RB，Su A，et al.Clear Genetic Distinctiveness between Human-and Pig-Derived Trichuris Based on Analyses of Mitochondrial Datasets.PLoS Negl Trop Dis.2012 Feb 21.[Epub ahead of print]

不同欧洲国家戊型肝炎病毒在家猪中的流行和传播

戊型肝炎病毒 （HEV）基因型3和4型能导致人的肝病，并且以猪为主要的储存器。世界范围内对猪HEV的研究很多，但是缺乏关于猪群中HEV感染动力学方面的资料。

在六个不同的欧洲国家研究商品猪养殖场HEV传播动力学。收集的数据显示HEV在断奶仔猪流行率在8%～30%。HEV在架子猪流行率在20%～44%之间。育肥猪的流行率在8%～73%之间。母猪流行率在所有这六个欧洲国家相似。只在西班牙和捷克共和国的被检公猪粪中便检测到HEV，流行率分别为4.3%和3.5%。

所收集的数据使用最近开发的模型进行了分析，估计不同国家的HEV传播动力学，证明戊型肝炎在猪场流行。

这个研究中所有的样品运用相同的检测方法 （实时RTPCR），运用相同的模型 （SIR模型）进行数据分析。本研究描述了欧洲国家戊型肝炎病毒的流行和畜群间传播动力学（捷克共和国、意大利、葡萄牙、西班牙、荷兰和英国），证实在猪场HEV从断奶仔猪到育肥猪的循环传播。繁殖数的数学定义为R0，所有被研究的欧洲国家R0在同一范围。

译自：Berto A，Baker JA，Mesquita JR，et al.Prevalence and transmission of hepatitis E virus in domestic swine populations in different European countries.BMC Res Notes，2012 Apr 25.[Epub ahead of print]

菲律宾猪埃博拉莱斯顿病毒血清流行病学调查

埃博拉病毒在非洲流行，可导致人和非人灵长类动物病毒性出血热。埃博拉莱斯顿病毒 (REBOV)已引起一些猕猴发病，但未发现其与人类患病有关联。2008年年底，在菲律宾人们首次在猪体内发现REBOV。

2008年，在菲律宾邦阿西楠省和布拉干省REBOV流行的猪场共采集215份猪血清。运用多个血清诊断系统检测这些样品中REBOV的特异性抗体。在非流行地区——打拉共采集了98份猪血清。通过检测这些样品，调查REBOV是否在菲律宾的猪群中普遍存在。通过检测发现感染猪场中70%的猪血清为REBOV抗体阳性，而在检测打拉采集的血清样品中未发现阳性。2008年感染猪场的REBOV高流行率显示猪是REBOV的易感动物。本研究中运用的多种血清学检测在未来可用于监测菲律宾猪群中的REBOV感染。

译自：Sayama Y，Demetria C，Saito M，et al.A seroepidemiologic study of Reston ebolavirus in swine in the Philippines.BMC Vet Res，2012 Jun 18.[Epub ahead of print]

益生菌发酵的高湿玉米日粮对断奶仔猪生长性能和肠道微生物的影响

本文研究了用嗜酸乳杆菌和乳酸片球菌发酵的高湿玉米对断奶仔猪生长性能和肠道微生物的影响。

270头刚断奶的仔猪 （公母各半）以体重和窝为区组，按照随机区组设计分成3个组 （每个处理5个圈，每圈18头猪），分别饲喂3种日粮：没有接种任何微生物的发酵高湿玉米 （对照组）；接种嗜酸乳杆菌发酵的高湿玉米 （LA组）；接种乳酸片球菌发酵的高湿玉米 （PA组）。猪饲喂液体日粮5周。用嗜酸乳杆菌和乳酸片球菌的特异性引物进行定量PCR分析，发现用这两种菌发酵的高湿玉米中富含这两种菌。乳酸是发酵过程中产生的主要短链脂肪酸 （SCFA）。3种发酵的高湿玉米中乳酸片球菌发酵组乳酸的浓度最高。5周的饲养试验结果显示，3种日粮对猪的生长性能无影响。但在试验的最后3周，与PA组相比，LA组猪的增重较高，粪便中的大肠杆菌的数量较少 （P＜0.05）。对结肠细菌区系进行PCR和DDGE分析发现3个细菌群，而PA组猪只有1个细菌群。另外，LA组和PA组结肠的细菌多样性和丰度降低 （P＜0.05）。无论饲喂何种日粮嗜酸乳杆菌和乳酸片球菌都很难在猪的肠道定植。这些结果说明饲喂益生菌发酵的高湿玉米可以调节猪的肠道微生物菌群，嗜酸乳杆菌发酵的高湿玉米具有影响猪的生长性能的潜力。

译自：Wang JQ，Yin FG，Zhu C，et al.Evaluation of probiotic bacteria for their effects on the growth performance and intestinal microbiota of newly-weaned pigs fed fermented highmoisture maize.Livestock Science， 2012， 145(1–3) ：79-86.

酿酒酵母菌对赫曲毒素A和玉米赤霉烯酮的吸收及其与细胞壁厚度的关系

为了研究酿酒酵母菌对赫曲毒素A和玉米赤霉烯酮清除能力及其脱毒能力与菌的细胞壁厚度的关系，研究了酿酒酵母菌在不同毒素浓度对真菌毒素的结合能力以及胃肠道环境对其结合能力的影响。

本研究所用的酿酒酵母菌株均具有清除赫曲毒素A和玉米赤霉烯酮的能力。RC012和RC016菌株对赫曲毒素A的清除率最高，RC009和RC012对玉米赤霉烯酮的清除率最高。用透射电子显微镜对酵母的细胞壁进行了超微结构分析，发现酵母的细胞直径或细胞壁厚度影响其对真菌毒素的清除能力。胃肠道环境中酵母菌与真菌毒素的结合能力增强。

以上结果说明，本研究所检测的酿酒酵母菌株均能清除赫曲毒素A和玉米赤霉烯酮，其清除作用的原理是物理吸附，胃肠道环境可增强其吸附能力。

译自：Armando MR，Pizzolitto RP，Dogi CA，et al.Adsorption of ochratoxin A and zearalenone by potential probiotic Saccharomyces cerevisiae strains and its relation with cell wall thickness.Journal of Applied Microbiology,2012,accepted.