结核菌痰涂片检验76例结果分析

相天河

（吉林省结核病医院检验科，吉林 长春 130500）

结核病是一种严重危害人类健康的慢性传染病，多由牛型结核分枝杆菌引起，可累及全身多脏器，最常见的患病部位是肺脏，占各器官结核病发生率的80～90%，也可以累及肝、肾、脑、淋巴结等器官。主要的传播途径是呼吸。结核菌痰涂片检查是确诊肺结核最特异的方法，痰结核菌检查具有特异性高、操作简便易行的特点，一般涂片阳性肺结核诊断即可基本确立。为了加强痰菌涂片检验的质量控制，现将我院近两年来共76例痰涂片检查结果统计报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2009年1月至2011年12月我院76例肺结核就诊患者的痰涂片，初诊时取患者夜间痰、清晨痰和即时痰3份痰标本，（如无夜间痰或清晨痰，则在送痰时，留取两份即时痰）。复诊患者按期送检清晨痰和夜间痰两份痰标本。痰标本采集方法：即时痰—深呼吸后咳出的痰；晨痰—患者晨起立即清水漱口，而后咳出的第2、3口痰液；夜间痰—痰检前一晚患者咳出的痰液。采集标本的容器：采用WHO推荐的通用螺旋盖痰瓶、可密封塑料盒、蜡纸盒等收集痰标本（直径4cm，高2cm）。容器应清晰标明患者的姓名、编号。标本的性状：多为干酪状、血痰、黏液痰。

1.2 痰检方法[1]

痰液收集、取样、涂片、染色及镜检、结果判断均按《全国结核病防治工作手册》的规定进行。采用痰直接涂片萋尼氏染色检查法。

1.2.1 涂片

小心打开承载痰标本的容器，防止产生气溶胶或使标本外溢。使用折断的竹签茬端，挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部分0.05～0.1mL，于玻片正面右侧2/3处，均匀涂抹成10mm×20mm的卵圆形痰膜。痰膜朝上，静置，待自然干燥后（一般约需要30min）进行染色镜检。

1.2.2 染色

①初染：火焰固定涂片，滴加石碳酸复红染液2～3滴盖满玻片，火焰徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3～5min，待标本冷却后用水自玻片一端轻缓冲去染色液[2]。②脱色：从玻片上端外缘滴加脱色剂布满痰膜，脱色1～2min至无红色冲洗出来为止，清水冲洗玻片。③复染：用亚甲蓝复染液复染30s。水洗，用吸水纸吸干玻片残余水，待玻片干燥后镜检。

1.2.3 镜检

染色合格的玻片，由于被亚甲蓝染色而呈淡蓝色。使用100×油镜观察。在淡蓝色背景下，抗酸菌呈红色；其他细菌和细胞呈蓝色。仔细观察300个不同视野。载玻片使用之后用二甲苯去油，编号、登记。存放在阴凉干燥的环境中保存。

1.3 结果报告标准

连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌，报告为阴性。报告抗酸杆菌菌数：1～8条抗酸杆菌/300视野。

抗酸杆菌阳性（1＋）：3～9条抗酸杆菌/100视野。抗酸杆菌阳性（2＋）：1～9条抗酸杆菌/10视野。抗酸杆菌阳性（3＋）：1～9条抗酸杆菌/每视野。抗酸杆菌阳性（4＋）：≥10条抗酸杆菌/每视野。

1.4 统计学方法

应用SPSS13.0统计软件完成数据的统计分析。采用卡方检验分析数据，以P＜0.05说明有显著差异，有统计学意义。

2 结 果

两年结核菌痰涂片检查共检查76例患者，其中初诊59例，占77.6%，涂阳率为14.2%，总涂片数177张，阳性率12.2%；复诊患者17例，占22.4%，涂阳率为2.9%，总涂片数34张，阳性率2.1%，初诊患者涂阳率明显比复诊患者涂阳率高，有显著性差异（P＜0.05）；阳性涂片率结果看，初诊患者亦高于复诊患者，有显著性差异（P＜0.05）[3]。男性和女性各年龄组的痰菌阳性率比较无差别，各年龄组的痰菌阳性率比较差别不大。男女比较痰菌阳性率相近。初诊患者不同咳痰时间痰涂片阳性率镜检结果：清晨痰＞夜间痰＞即时痰。

3 小 结

结核菌痰涂片是最特异的确诊肺结核方法，观察到结核菌是肺结核确诊的主要依据。通过细菌学检测是诊断传染性肺结核的重要手段，具有特异性高、简便易行、费用低、易推广的优点。只有符合标准的标本才能准确反映病情。①检测时应尽量取深部呼吸道的痰液，涂阳率才能相对较高。切忌取唾液，唾液中不存在结核杆菌，涂阳率几乎为零。②采集时间对检测也有影响，夜间痰、晨痰菌含量较高，而晨痰又稍高于夜间痰，即时痰中菌含量最低。③患者排菌有间断、不均匀的特点，若只送检一次会使一半阳性传染源漏检，最好能够连查3次，以防止假阴性[4]。在工作中要先采符合要求的痰液，同时要注重提高涂片和染色水平，尽可能提高样本菌检出率。其次也要注意个人防护，检测完的标本及污染物要及时处理。实现更准确、规范化结核病痰检工作。

患者在留取痰标本前，医师必须向患者讲明留痰的注意事项，并安排其在有排气设备的角落咳痰，以免造成对环境的污染。收集痰标本后要立即送至化验室进行检查，以免标本干涸影响检出率。痰涂片的制作应在灭菌的通风柜内进行，脱色时间应不能超过2min，以防出现假阴性。涂片处、显微镜检查工作台要隔开，防止造成交叉污染。废弃标本、痰盒和污染物应专门分放并及时处理，不可随意丢弃。对于不能烧毁的物品要先行高压消毒灭菌，而后再专门清洗。最后对工作场所要进行严格彻底的消毒。

痰菌阳性表明其病灶是开放性的，有传染性。若排菌量在每毫升10万个以上，即为社会传染源，痰检易呈阳性。痰菌量在每毫升1万个以下，检测时易误诊，可用集菌法进行检测。

出现假阳性的常见原因如下：其他抗酸物质，如食物、染料沉渣，腐物寄生性抗酸菌，细菌的芽胞、胞子等均可造成假阳性。此外在操作过程中的相互污染，如阳性标本脱落至阴性标本、镜油、吸水纸、滴镜油棒上等，都能导致假阳性[5]。注意出现阳性不仅能诊断疾病，还能说明传染程度及病变的严重程度。

假阴性出现的主要原因如下：标本的收集是否标准、涂片制备是否按要求进行，染色过程及看片等诸多方面。标本收集得法，是涂片检查的关键。涂片时如果标本选取不当，就很可能采集不到结核菌。涂片、染色不当，涂片过薄或过厚，涂片标本量太少，也会对结果有影响；涂片在固定要防止加热过度，否则细菌会发生染色不良；加热过度又造成染料破坏。复染时染液太浓，则会过度遮盖抗酸菌。另外，将姓名、标本、编号、标签搞混等不负责现象责也是造成错检的一个主要原因。检验结果的准确性与检验人员工作水平及个人素养有很重要的联系，检验人员必须怀有崇高的敬业精神，并要熟练掌握操作规则，才能提高检验结果的准确性，为临床提供可靠的诊断依据[6]。

痰菌检验作为发现结核病传染源及制定合理治疗方案的重要依据，在控制传染源、消除结核病传播方面起着至关重要的作用。而涂片质量的好坏又直接关系阳性率。所以在工作中要不断提高对痰检重要性的认识，收集合格的痰标本，并严格按规范执行。这样才利于及早发现患者病情，有效地控制结核的发生和传播，早日实现防治目标。

[1]刘玉红.结核菌痰涂片检验85例结果分析[J].中国现代药物应用,2010,4(7):82.

[2]娄泉伟,戚雅萍.1270份痰标本结核菌检测结果分析[J].现代中西医结合杂志,2008,17(4):582.

[3]廉世松.沅陵县CDC2005-2009年痰抗酸杆菌检查结果分析[J].中国民康医学,2011,23(1):32-32.

[4]马瑞红.2008～2009年肺结核痰涂片镜检结果分析[J].中国城乡企业卫生,2011,2(1):79-80.

[5]高晓霞,邢宝芝.痰涂片检查在肺结核病诊疗工作中的重要作用[J].中国民族民间医药,2008,17(7):63.

[6]王伟.共和县2005至2009年痰标本质量分析[J].中国医药指南,2010,8(23):54-55.