新生儿金黄色葡萄球菌败血症早期诊断和治疗的进展

许国庆

（广东省惠州市第二妇幼保健院，广东 惠州 516001）

新生儿败血症是一种常见的新生儿感染性疾病，虽然近年来研究发现表皮葡萄球菌的感染率逐年上升，但是金黄色葡萄球感染仍是导致败血症发生的最常见原因[1]。该病发病凶险，具有较高病死率，为12%～20.5%[1]。早期诊断及治疗是决定疾病转归的关键因素。现在诊断该疾病的金标准为血液培养，但是该方法检出率低，检查时间长，极大影响患儿的治疗效果。本组通过进行大量的文献检索，对该病诊断及治疗方法的新进展进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 文献来源

本组研究主要采用文献检索的方法对相关新进展进行研究。其中所得资料主要来源于CNKI数据库及PubMed数据库。所用到的检索词主要有金黄色葡萄球菌败血症、新生儿、诊断及治疗、早期等。所得文献类型主要有总数、论著及临床研究等。

1.2 入选标准

本组研究中资料的纳入标准主要为：①观点明确、论据可靠。②内容与新生儿金黄色葡萄球菌败血症的诊断及治疗新进展密切相关。③以近5年内发表的文献为主，排除其中相关动物实验、研究内容不清、论据不明确的文献。

1.3 质量评估

本组研究中所得资料的筛选由2名专业人士进行，筛选过程中专业人员均仔细阅读所检测论文的摘要及全文，严格按照纳入标准选择所需文献，对于其中意见出现分歧者进行讨论，得出统一结论。

2 结 果

本组初次检索所得文献134篇，经筛选后得到24篇。其中记载的主要诊断方法为通过原位杂交法检测静脉血中性粒细胞中金黄色葡萄球菌中的DNA。研究发现该方法在较短时间内即可检出金黄色葡萄球菌。治疗方面仍然沿用药敏试验所得结果进行。

3 讨 论

新生儿败血症是一种常见的新生儿感染性疾病，虽然近年来研究发现表皮葡萄球菌的感染率逐年上升，但是金黄色葡萄球感染仍是导致败血症发生的最常见原因。该病发病凶险，具有较高病死率，为12%～20.5%。早期诊断及治疗是决定疾病转归的关键因素。文献中记载的诊断新方法为过原位杂交法检测静脉血中性粒细胞中金黄色葡萄球菌中的DNA，该方法进行检查时需要的试剂及仪器主要有：Hybrisep试剂盒、Hybfism杂交仪、，BacT/AIERT PF瓶、全自动血培养仪及显微镜及上、下游引物和探针。其中所使用的上游引物为[2]：5’-TGTGTAGCGGTGAAATGCG-3’(690～708 bp)，所研究中使用的下游引物的基因序列为为[2]5’-CATCGTTACGGCGTGGAC-3 ’(810～829 bp)，研究中所用探针的基因序列为[2]5’-TCTAATCCTGTT TGATCCCCACG 3’(778～800 bp)。检查时[3]需要采集2ml患儿的静脉血，分理出其中的中性粒细胞并进行固定，并通过热处理方法对DNA进行变性处理。将特异性DNA探针用地高辛进行标记，与固定好的细菌DNA杂交后，与被ALP标记好的抗体相结合结合，通过硝基四氮唑蓝/5，溴-4，氯-3，吲哚基磷酸染色，结果为阳性时在细胞中可见及青紫色颗粒，检测过程中尚需用及荧光定量-PCR法对细菌的DNA进行测定，通过设立对照组进行结果的判定。进行血液感染判定时所需判定标准为：若3次血培养中2次或2次以上结果为阳性或血液荧光定量-PCR检查结果为阳性时均可判定为金黄色葡萄球菌感染所致败血症判若3次血培养中仅有1次检查结果为阳性或荧光定量-PCR检查结果为阴性，判断为其他污染性细菌。

研究表明[4]，近年来分子生物学检查是目前临床实践中微生物检查诊断中最有价值的一种。文献记载中所应用的原位杂交法具有许多优点：不需要进行分离培养，可直接由患者的静脉血中分离出中性粒细胞，可克服血液细菌培养时耗时长的缺点，并且不会因抗生素的应用而受影响。初次之外，部分资料就荧光定量-PCR的优点进行总结主要有[4]：特异性好、灵敏度高等优点，但是该方法对环境及设备条件要求较高，只有在具有一定经济实力的医院中才能应用。因此其推广应用受到一定限制。

[1]Forrest GN,Mehta S,Weekes E,et a1.Impact of rapid in situ hybridization testing on coagulase-negative staphylococci positive blood cultures[J].J Antimicrob Chemother,2006,58(1):154-158.

[2]Flayhart D,Borek AP,Wakefield T,et a1.Comparison of BACTEC PLUS blood culture media to BacT/Alert FA blood culture media for detection of bacterial pathogens in samples containing therapeutic levels of antibiotics[J].J Clin Microbiol,2007,45(3):816-82l.

[3]德全,季海生.BacT/Alert3D血培养分级报告的临床应用研究[J].中华医院感染学杂志,2006,16(8):955-957.

[4]王沛,何永贵.金黄色葡萄球菌败血症早期诊断方法的建立[J].中华传染病杂志(临床论著),2009,27(11):682-684.