赶黄草不同溶剂提取物抑菌活性的初步探讨

雷 娇，肖 茂，朱 锐，夏静若，杨宗琪

（1.川北医学院 医学检验学系，四川 南充 637000；2.川北医学院 临床医学系，四川 南充 637000；3.川北医学院 病原中心，四川 南充 637000）

赶黄草，学名扯根菜，别名水泽兰、水杨柳等，主要分布在华北、华东、中南及陕西、四川和贵州等地［1，2］。

赶黄草含有没食子（GaLie acid）、槲皮素（Guercatin）、2，6－二羟基苯乙酮－4－0－β－D－吡喃葡萄糖苷（2，6－dihydroxyacetophenone－4－0－β－D－gLucside）、两个结构有待进一步确证的化合物及丰富的黄酮类物质［3，4］。中医学认为，赶黄草性温味甘，具有祛黄疸、利尿、活血、保肝、清热等功效，以其为原料提取而成的肝素颗粒广泛应用于临床。近几年来，国内外对赶黄草的化学成分及其对肝病的治疗作用研究较多，但对该植物抑菌方面的作用，少有报道。本文分别采用赶黄草的水提取物及乙醇提取物对多种菌进行体外抑菌实验，拟观察赶黄草的体外抑菌活性，为临床提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

赶黄草，采于四川古蔺桂花乡。供试菌种：金黄色葡萄球菌（StaphyLococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia co－Li）、枯草芽孢杆菌（BaciLLus stubtiLis）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）、表皮葡萄球菌（StaphyLococcus epidermidis）、新生隐球菌（Cryptococcus neoformans）、白色念珠菌（MoniLia aLbican），皆由我校微生物实验室提供。

1.2 方法

1.2.1 赶黄草水提取法［5］

取赶黄草10g，加适量蒸馏水浸泡30min后加热煮沸，再用文火加热30min，过滤得第1次水提取物，将滤渣用同样方法得到第2次、第3次水提取物，合并3次滤液，再浓缩至10mL，得到赶黄草水提取物（即每毫升药液含1g干药）。

1.2.2 赶黄草乙醇提取法［6］

取赶黄草10g，共4份，分别置于500mL圆底烧瓶中，然后加适量30%、50%、70%和90%乙醇浸泡30min后，100℃加热30min后过滤。药渣再加适量同浓度乙醇溶液，100℃加热30min后过滤。将两次滤液合并，用文火浓缩至10mL，得到赶黄草相应浓度乙醇提取物（即每毫升药液含1g干药）。

1.2.3 比浊管的配制［7］

取0.5mL浓度为0.048moL／L的BacL2加到99.5mL浓度为0.18moL／L的H2SO4中配制成0.5个麦氏浊度的比浊管（相当于细菌数为1.5×108个／mL），密封备用。

1.2.4 菌悬液的制备［7］

将供试菌接种至固体培养基上，细菌37℃培养24h，真菌28℃培养48h后，用适量生理盐水将菌落洗下。用比浊调管对比稀释至0.5麦氏浊度（1.5×108个／mL），4℃保存备用。

1.2.5 药敏纸片制备

取优质滤纸，用打孔器制备成直径6mm的滤纸片，置于洁净干燥的培养皿中，121℃高压蒸汽灭菌20min。无菌操作下将其分别浸在赶黄草的各种提取液及相应提取剂中，备用。

1.2.6 药敏试验［9］

无菌操作下吸取0.2mL菌悬液于琼脂平板上（细菌用MH琼脂平板，真菌用沙氏琼脂平板），均匀涂布，取含药滤纸片紧贴于平板上，每个平板贴4片，每个菌种做三组平行，另外每个菌种用含提取剂滤纸片做一份阴性对照，10min后倒置于恒温培养箱中37℃培养，细菌培养24h，真菌培养48h。使用十字交叉法测量抑菌圈直径，并记录数据。

2 结果

赶黄草水提取物及不同浓度乙醇提取物的体外抑菌效果见表1。

表1 赶黄草提取液的抑菌效果比较（抑菌圈直径mm）

3 讨论

现代药理研究表明赶黄草有治疗黄疸、水肿、经闭、血甭、带下、跌打损伤以及各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等作用［10］，对细菌与真菌的抑菌作用研究甚少。本实验用赶黄草的30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇提取物与水提取物，分别对白色念珠菌、新生隐球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌在体外进行抑菌效果观察。结果如表1所示，赶黄草水提物及醇提物对绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌均有不同程度的抑制作用，对供试真菌无抑菌效果。

表1提示水与乙醇不同溶剂赶黄草提取物的抑菌活性无明显差别；乙醇浓度与抑菌效果之间呈不均一的线性关系，随着乙醇浓度的增高，赶黄草乙醇提取物对绿脓杆菌的抑菌活性降低，对枯草芽孢杆菌和表皮葡萄球菌的抑菌活性增强：30%乙醇提取物对绿脓杆菌抑菌效果最好，90%乙醇提取物对枯草芽孢杆菌和表皮葡萄球菌体外抑菌效果较好。

随着抗生素的广泛应用，致使多重耐药菌株的出现，细菌耐药性的问题已日益突出。中草药以其价格低廉，毒副作用小，且很少产生耐药性等独特优势越来越受到外界重视，中草药的抑菌作用已受到重视。目前，对赶黄草的抑菌作用研究较少，进一步对其抑菌机制、抑菌成分及其对更多其他菌种的抑菌活性进行研究将具有更大的价值。

［1］中国科学院植物研究所.中国高等植物属检索表［M］.北京：科学出版社，1979：205.

［2］中国植物志编委会.中国植物志（第二分册）［M］.北京：科学出版社，1992：2.

［3］张旭，杨明.赶黄草有效成分的研究［J］.成都中医大学学报，2002，25（4）：46－47.

［4］汪洪武，任启生，冯长根，等.赶黄草中黄酮提取方法的研究［J］.中国药学杂志，2002，37（7）：551.

［5］陈奇.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科技出版社，1996：67.

［6］钟有添，陈玉帅，毛晓洁，等.玉米须抗菌活性的初步研究［J］.赣南医学院学报，2008，28（4）：477－478.

［7］高尚进，毛艳，周汉东，等.11种中草药对8种常见细菌的体外抑菌试验［J］.川北医学院学报，2008，23（5）：466－468.

［8］范家佑，郁建平，罗莉斯，等.马尾松叶提取物的抑菌活性研究［J］.山地农业生物学报，2010，29（3）：279－282.

［9］向秋玲.帖觅菜不同溶剂提取物抑菌作用的研究［J］.江苏农业科学，2010，15（4）：360－362.

［10］宋丽，臧志和，廖洪利，等.赶黄草的研究进展［J］.西南军医，2007，9（2）：87－88.