河北地区发现6例RHD(711delC)基因型分布①

乔 芳 石翠英 何路军 王振雷 赵志弘 张 虹 田亚娟 刘敬闪 (河北省血液中心，石家庄050071)

一直以来RhD血型因其在临床输血和产科学上的重要性及其自身的复杂性而成为研究的热点。RhDel表型是一种变异的极弱RhD阳性血型，长期以来Del型的个体一直被当作RhD阴性对待，随着研究的深入，发现Del型血液可能会引起Rh真阴性受血者产生抗D［1，2］，其血清学反应特征为盐水介质反应和间接抗人球蛋白实验呈阴性，吸收放散试验呈阳性，在分子水平上1227A是其重要的遗传标记［3］。笔者在对近两年的石家庄Rh阴性无偿献血者进行Del型筛查分析时，发现有6例具有完整的RhD基因但不具备1227A遗传特性，鉴定为RhD(711delC)基因型，现报道如下。

1 对象与方法

1.1对象 79例受检样本均来自河北省血液中心无亲缘关系的汉族无偿献血者，IAT确定为RhD阴性，C或E抗原阳性，携带RhD完整基因。

1.2方法 标本的血清学特征研究方法参见文献［4］，RhD 基因遗传特征分析方法参见文献［5，6］，经两次PCR-SSP实验确定为RhD1227A(-)的标本进行RhD全部外显子序列分析。

2 结果

携带完整RhD基因的79例研究样本中，73例具有RhD(1227G＞A)遗传特征，血清学吸收放散试验阳性，确定为Del型;6例(ccEe4例，CcEe1例，Ccee1例)不具有 RhD(1227G＞A)遗传特征(图1)，血清学吸收放散试验为阴性，确定为RhD(-)。序列分析显示，6个标本的两条RhD基因均在第5外显子的711位置缺失一个C，形成了移码突变(图2，3)，为 RhD(711delC)基因型。

图1 RHD(K409K)等位基因的PCR-SSP结果Fig．1 The results of PCR-SSP for RHD(K409K)allele

图2 该例标本RHD基因第5外显子有缺失基因的部分序列图谱Fig．2 The results of sequencing

图3 该例标本RHD基因第8内含子有突变基因的部分序列图谱Fig．3 The results of sequencing

3 讨论

决定人类Rh血型的RhD/CE基因位于染色体1p34.3～36.1，分别由10个外显子组成，编码区总长均为1 251 bp，分别编码417个氨基酸组成的糖蛋白：D抗原和CcEe抗原。两个基因具有极高的同源性(约96%)，其间仅有40个核苷酸不同，这40个核苷酸分别位于RhD和 RhCE基因第3、4、5、6、7、9外显子。因此在PCR试验中，扩增引物的3＇末端均是RhD特异性碱基，可准确检测RhD基因的完整性［7］。RhD基因具有多态性，任何座位上的基因突变都可能影响抗原的表达或表达的抗原结构［8］。一般认为RhD抗原阳性个体具有 RhD基因，而研究表明有的个体具有RhD基因但不表达RhD抗原或有极少表达，使Rh血型系统中产生了许多D变异的亚型。Del表型就是其中非常特殊的一种，可能是因其完整的 RhD基因上存在 RhD(1227G＞T)突变特征而使其抗原表达数量急剧减少。不表达的RhD基因为沉默基因或失效基因，血清学检测结果表现为阴性。本研究发现的6例非RhD(K409K)样本，拥有完整的RhD基因(见文献［6］报道)，血清学检测为RhD阴性，通过对其RhD基因全长序列进行分析，发现在两条RhD基因外显子5的711位置上均缺失一个C，710～712的CCG变成了CGT，形成了移码突变，为RhD(711delC)基因型，同时在内含子8的4779位置上检测到一个纯合突变，即4779C/T，而外显子9未发现异常。该发现在河北地区属首次报道。

西安地区报道RhD阴性个体RhD(711delC)基因型可能与E抗原有一定的相关性［9］。而本研究结果显示，有1例RhD(711delC)的表型是Ccee，另外5例为E抗原阳性，与西安地区报道结果不符，有待于扩大样本进一步研究。

另外RhD(711delC)基因型的分子背景中，是否第5外显子中的缺失与第8内含子中的纯合突变同时存在，还需要进一步扩大研究样本。

1 Wagner T，Körmöczi G F，Buchta C et al．Anti-D immunization by DEL red blood cells［J］.Transfusion，2005;45(4)：520-526.

2 Yasuda H，Ohto H，Sakuma S et al．Secondary anti-D immunization by Del red blood cells［J］.Transfusion，2005;45(10)：1581-1584.

3 Chen J C，Lin T M，Chen Y L et al．RHD 1227A is an important genetic marker for RhD(el)individuals［J］.Am J Clin Pathol，2004;122(2)：193-198.

4 乔 芳，石翠英，何路军 et al．4例Rh部分D基因型研究［J］.河北医药，2011;33(5)：769-770.

5 乔 芳，石翠英，何路军 et al．河北地区汉族人群RhDel表型血清学及分子生物学研究［J］.河北医药，2011;33(7)：1065-1066.6 乔 芳，石翠英，何路军et al．河北地区汉族人群RhD阴性血型中De1基因型分布［J］.河北医药，2011;33(19)：3002-3004.

7 李 勤，叶璐夷，郭忠慧et al．中国人群中Del表型分子背景研究［J］.中华医学遗传学杂志，2006;23(5)：486-491.

8 徐 群，张世训，张建业 et al．中国汉族群体RhD阴性个体D基因外显子多态性研究［J］.中华医学遗传学杂志，2001;18(1)：39-42.

9 王满妮，叶世辉，刘孟黎et al．西安地区RhD阴性个体RHD71 1DelC等位基因频率研究［J］.中国输血杂志，2011;24(3)：229-230.