四关穴埋线对AD大鼠学习记忆能力和脑海马AchE、Ach的影响*

杨进廉苟春雁田丰玮杨智

（1.重庆市中医院，重庆400021；2.重庆市大足区人民医院，重庆402360）

阿尔茨海默病（AD）发病率高，是当今神经疾病中研究的难点与热点。目前临床研究证明针刺治疗老年性痴呆有确效，但对于中晚期老年痴呆的治疗疗效却均不理想。穴位埋线治疗和预防老年性痴呆疗效较好，但报道不多，对其治疗机理更是鲜有研究。本实验对AD的治疗作用和机制进行了研究。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物SD大鼠，18月龄，清洁级，体质量450～550 g，雌雄各半，许可证号：SCXK（川）2008-11，由成都中医药大学实验动物中心提供。动物在实验前适应性驯养1周，雌雄分笼饲养，自由摄食、饮水。

1.2 主要实验试剂D-半乳糖（上海伯奥生物科技有限公司，批号20100217），氯化铝（成都科龙化工试剂厂，批号20090712），AchE检测试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20110626），Ach检测试剂盒（ELISA法）产自RD公司，批号20110705。

1.3 主要实验仪器通道式水迷宫：由无色有机玻璃制成，水深0.4 m，水温控制在22～25℃之间。本装置共设4个盲端，终点有台阶，动物可通过台阶上岸躲避溺水威胁，由中国医学科学院药物所研制。酶标仪（法国西蒙公司），低温离心机（美国贝克曼公司），Varioskan Flash全波长扫描式多功能读数仪（美国Thermo公司）。

1.4 实验方法 参照文献［1］以D-半乳糖和AlCl3制备老年痴呆动物模型。取18月龄SD大鼠48只，随机分为空白对照组、模型对照组、针刺组、穴位埋线组，每组12只。除空白对照组外其余各组动物均腹腔注射D-半乳糖48 mg/kg，同时灌胃2%AlCl3水溶液2 mL/只，每日1次，连续30 d，空白对照组采用等体积生理盐水腹腔注射和灌胃。在造模的同时开始治疗。穴位埋线组选用“四关穴”（即双合谷、双太冲），取穴标准参照文献［2］中大鼠穴位定位标准。使用三角针埋线法的改良方法 ，采用30号紫色医用羊肠线，让带线的针前后贯通该穴，埋入大鼠体内约2～3 mm，剪断两头断端方法 埋线，每10日埋线1次，连续3次。针刺治疗组选用“四关穴”，以30号1寸不锈钢毫针斜刺，刺入0.2寸，然后连接电针仪（型号G-6805，上海产），采用疏密波，频率80～100 Hz，大小以大鼠能承受为度，20 min后出针。电针治疗均于每日上午9时～11时进行，20 min/次，每日1次，连续治疗30 d。造模25 d后进行水迷宫训练，训练前将大鼠置于终点附近，让其自行爬台2次。训练时将大鼠放在起点后，记录其进入盲端的次数（错误次数）及到达终点所需的时间（游出时间）。每次完成后休息1 min，每只大鼠每天训练10次。训练第1日路径包括2个盲端，第2日包括3个盲端，第3日、4日、5日均为4个盲端，实验数据以第5日为准。设定总时间为3 min，超过3 min不能游出者按3 min计。以进入盲端次数、到达终点所需时间来衡量大鼠学习、记忆的能力。完成水迷宫实验后，断头处死大鼠，取出大脑，在冰浴下分离出海马组织，称重，冰浴下超声匀浆，制成10%匀浆液，3000 rpm低温离心10 min，取上清液，按试剂盒说明书方法 检测乙酰胆碱酯酶（AchE）和乙酰胆碱（Ach）。

2 结果

相较空白对照组，模型组大鼠精神状态差，动作迟缓，进食减少。针刺组和穴位埋线组大鼠较模型组有一定的改善。实验期间模型组死亡1只，针刺组死亡2只。

2.1 各组水迷宫测试结果 比较动物在水迷宫游出时间越短、错误次数越少，反映动物学习记忆能力越强。由表1可知，空白对照组的游出时间和错误次数显著低于模型对照组（P＜0.01），表明模型对照组动物学习和记忆能力下降。与模型组相比，针刺组和穴位埋线组游出时间和错误次数显著降低（P＜0.05或0.01），表明针刺和穴位埋线治疗能提高AD大鼠的学习和记忆能力。

表1 针刺和穴位埋线治疗对AD大鼠学习记忆能力的影响（±s）

表1 针刺和穴位埋线治疗对AD大鼠学习记忆能力的影响（±s）

与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01；与对照组比较，△P＜0.05；△△P＜0.01。下同。

组别n游出时间（秒）错误次数（次）空白组1217.34±8.26**2.04±1.33**模型组1157.29±18.13△△5.84±1.81△△针刺组1040.31±16.42*△△4.27±1.26*△穴位埋线组1238.76±19.13*△△4.09±1.76*△

2.2 各组大鼠脑海马组织Ach和AchE水平比较见表2。由表2可知，模型组大鼠脑海马组织AchE活性显著高于空白对照组（P＜0.01），Ach含量显著低于空白对照组（P＜0.01），表明AD大鼠脑海马组织AchE活性升高而Ach含量下降。与模型组相比，针刺组和穴位埋线组脑海马组织AchE活性虽有降低作用趋势，但无统计学差异（P＞0.05），Ach含量均显著高于模型对照组（P＜0.05），表明针刺和穴位埋线治疗对AD大鼠脑海马组织AchE活性无明显影响，但能明显提高Ach含量。

表2 针刺和穴位埋线治疗对AD大鼠脑内Ach和AchE的影响（±s）

表2 针刺和穴位埋线治疗对AD大鼠脑内Ach和AchE的影响（±s）

组别nAchE（U/g）Ach（pmol/g）空白组1245.62±14.95**1.95±0.23**模型组1186.84±32.81△△0.88±0.22△△针刺组1069.47±22.26△1.23±0.37△△*穴位埋线组1271.34±31.96△1.14±0.30△△*

3 讨论

目前治疗AD方法 多样，手段频出，但对于中晚期痴呆的治疗疗效均不太理想，这就为临床早期治疗及预防AD提出了要求。埋穴疗法利用其特殊的针具与所埋之羊肠线，产生了较一般针刺方法 更为强烈的针刺效应，有“制其神，令其易行”和“通其经脉，调其气血”的作用，且治疗一次持续时间长，约2～4周。能方便临床开展早期防治［3-4］。

本实验采用衰老和铝中毒的多因素损害制备AD模型，更贴近AD繁杂的病因和病理变化过程，在这种模型上研究针刺和穴位埋线的治疗作用及机理更加可靠。现代研究表明，AD脑内Ach含量减少，AchE活性升高，学习和记忆能力明显下降。本实验结果 表明，与空白对照组相比，模型组大鼠的学习和记忆能力明显下降，脑海马组织的Ach明显降低，AchE活性明显升高。同时提示，Ach减少程度与学习记忆障碍的严重性呈一定的正相关，这与文献报道相符［5-6］。而针刺、穴位埋线治疗可明显提高AD大鼠的学习和记忆能力，提高脑海马组织Ach含量，但对AchE影响不明显。这证实了针刺和穴位埋线治疗能改善中枢胆碱能功能。依据本实验的研究结果 ，两者治疗效果相仿且治疗机理可能与激活中枢胆碱能功能有关。

［1］ 董洪涛，房恭.多因素AD动物模型的建立及针刺对其学习记忆功能的影响［J］.上海中医药杂志，2002，36（5）：43.

［2］ 余曙光，郭义.实验针灸学［M］.5版.上海：上海科学技术出版社，2009：22-24.

［3］ 任晓艳.穴位埋线的源流及其机理探讨［J］.中国医药学报，2004，19（12）：759.

［4］ 曾宪锋.针刺“四关穴”对老年痴呆模型大鼠学习能力影响的研究［J］.武警医学，2008，19（9）：781.

［5］ 程海英，程东旗.针灸治疗老年痴呆症的研究进展［J］.北京中医，2006，25（5）：298.

［6］ 李前，朱振霞，孙曼霁.乙酰胆碱酯酶与老年性痴呆关系的研究进展［J］.中国老年学杂志，2002，22（4）：325.