黎药-裸花紫珠氯仿萃取部位的化学成分

董 琳 刘明生 王金辉 张 蕾 沈 硕 张小坡 关薇薇

1.海南医学院药学院，海南 海口 571199；2.海南省南药黎药研究院，海南 海口 571101；3.沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016

裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hook.Et Arn.）为马鞭草科（Verbenaceae）紫珠属植物。黎药名为补阀，国内主要分布广东、广西、海南等地，其中以海南的裸花紫珠最为道地，是海南黎族医生常用药材之一。药用部位为干燥地上部分，具有有抗菌止血、消炎解毒、散瘀消肿、驱风祛湿之功效[1-3]。

目前，国内外对裸花紫珠化学成分研究的报道较少，其化学成分主要有萜类、黄酮类、挥发油等[4]。为了开发和利用该药用植物资源，笔者对裸花紫珠叶进行化学成分研究。本实验从裸花紫珠氯仿萃取部位中分离鉴定的5个已知化合物，分别鉴定为：7α-Hydroxysandaracopimaric acid（Ⅰ）、香草醛（Ⅱ）、5，4′-二羟基-3，7，3′-三甲氧基黄酮（Ⅲ）、5-羟基-3，7，3′，4′-四甲氧基黄酮（Ⅳ）、齐墩果酸（Ⅴ）。其中化合物Ⅱ为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Barnstead International显微熔点测定仪 （温度未经校正）。Bruker ARX-300型和Bruker AV-600型核磁共振光谱仪（TMS为内标，瑞士Bruker公司）。ESI-MS用Agilent 1200SL RRLC-6410 QQQ液相-质谱联用仪。半制备HPLC：ShimadzuLC-6AD高效液相色谱仪；色谱柱为YMCC18（5μm，10 mm×250 mm）。

1.2 试药

裸花紫珠采自海南省五指山，由中国医学科学院药用植物研究所海南分所陈伟平研究员鉴定为马鞭草科紫珠属裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hook.Et Arn.）。薄层色谱和柱色谱用硅胶 （青岛海洋化工有限公司），Sephadex LH-20（Pharmacia biotech Sweden），普通色谱用试剂均为分析纯（天津大茂化学试剂公司），甲醇（色谱纯，美国Tedia公司）；氘代试剂为中国科学院武汉波谱公司生产。

2 方法与结果

2.1 提取与分离

裸花紫珠叶12.5 kg，粉碎，用水加热回流提取3次，每次3 h，减压回收溶剂将提取液浓缩至8000 mL，再依次用氯仿、乙酸乙酯和正丁醇反复萃取，得氯仿萃取物55 g、乙酸乙酯萃取物40 g和正丁醇萃取物207 g。将氯仿萃取物经硅胶开放柱色谱分离，以石油醚-丙酮（200∶0～0∶200）进行梯度洗脱，TLC检识，合并得到17个流份。各流份分别通过硅胶柱色谱、凝胶柱色谱及半制备HPLC分离纯化，得化合物Ⅰ～Ⅴ。

2.2 结构鉴定

2.2.1 化合物Ⅰ 无定形固体（甲醇），香草醛-浓硫酸反应显红色，ESI-MS m/z 317.5[M-H]-，分子式为 C20H30O3。1H-NMR（300 mHz，DMSO-d6） δ：0.74 （3H，s，CH3-20），0.99 （3H，s，CH3-17），1.05（3H，s，CH3-19），4.36（1H，s，7β-H），4.91（1H，dd，J=10.8，1.2 Hz） and 4.97（1H，dd，J=17.4，1.2 Hz）（H-16），5.36（1H，s，H-14），5.78（1H，dd，J=17.7，10.8 Hz，H-15）；13CNMR（75 mHz，DMSO-d6）δ：38.4（C-1），18.6（C-2），37.0（C-3），46.7（C-4），42.3（C-5），32.5（C-6），71.5（C-7），140.2（C-8），45.9 （C-9），38.6 （C-10），18.4 （C-11），34.5 （C-12），37.6（C-13），132.2（C-14），148.8（C-15），111.9（C-16），26.6（C-17），183.1（C-18），17.7（C-19），15.1（C-20）。与文献[5]对照，其光谱数据基本一致，故化合物Ⅰ鉴定为7α-Hydroxysandaracopimaric acid。

2.2.2 化合物Ⅱ 无色针晶（甲醇），mp.81～83℃。三氯化铁-铁氰化钾反应阳性。1H-NMR（300mHz，DMSO-d6）：δ9.72（1H，s，-CHO），δ 3.82（3H，s，OCH3-3），δ 7.38（1H，dd，J=1.7，8.1 Hz，H-6），δ 6.90（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），δ 7.34（1H，br.s，H-2），薄层 E-merson反应提示羟基对位有取代基，上述数据与文献[6-7]报道的香草醛光谱数据基本一致，故化合物Ⅱ鉴定为香草醛。

2.2.3 化合物Ⅲ 黄色粉末（甲醇）。三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，盐酸-镁粉反应阳性，推测为黄酮类化合物。1H-NMR（300 mHz，DMSO-d6）中，δ 12.67（1H，s，5-OH）、δ 9.96（H，s，4′-OH）为酚羟基质子信号，烯氢区给出5个质子信号δ：6.37（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）、6.80（1H，d，J=2.0 Hz，H-8）、7.67（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′）、6.97（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′）、7.63 （1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6′）；3 个甲氧基质子信号 δ：3.88、3.87、3.82（9H，s，OCH3）。上述数据与文献[8-9]对照，其光谱数据基本一致， 并与 5，4′-二羟基-3，7，3′-三甲氧基黄酮（即藿香黄酮醇）对照品共薄层，在三种溶剂系统中Rf值和显色一致，且混合熔点不下降，故化合物Ⅲ鉴定为5，4′-二羟基-3，7，3′-三甲氧基黄酮（即藿香黄酮醇）。

2.2.4 化合物Ⅳ 黄色粉末（甲醇），三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，盐酸-镁粉反应阳性，推测为黄酮类化合物。1H-NMR（300 mHz，CDCl3） δ：6.37（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）、6.44（1H，d，J=2.0 Hz，H-8）、7.69（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′）、6.99（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′）、7.73（1H，dd，J=8.6，2.0 Hz，H-6′）、3.97，3.97，3.88，3.86（12H，s，3，7，3′，4′-OCH3）。上述数据与文献[10]对照，其光谱数据基本一致， 并与 5-羟基-3，7，3′，4′-四甲氧基黄酮对照品共薄层，在三种溶剂系统中Rf值和显色一致，且混合熔点不下降，故化合物Ⅳ鉴定为 5-羟基-3，7，3′，4′-四甲氧基黄酮。

2.2.5 化合物Ⅴ 白色固体（氯仿），Liebermann-Burchard反应阳性。1H-NMR（300 mHz，Pyr-d5） δ：5.28（1H，s，H-12），3.22（1H，dd，J=10.2，4.2 Hz，H-3），1.14 （3H，s，CH3），0.99（3H，s，CH3），0.93 （3H，s，CH3），0.92 （3H，s，CH3），0.91（3H，s，CH3），0.78（3H，s，CH3），0.76（3H，s，CH3）。13C-NMR（75 mHz，Pyrd5） δ：38.4（C-1）、27.1（C-2）、79.0（C-3）、38.7（C-4）、55.2（C-5）、18.3（C-6）、32.6（C-7）、39.2（C-8）、47.6（C-9）、37.0（C-10）、22.9（C-11）、122.6（C-12）、143.5 （C-13）、41.6 （C-14）、27.6（C-15）、23.5（C-16）、46.5（C-17）、41.0（C-18）、45.8（C-19）、30.6（C-20）、33.8（C-21）、32.4（C-22）、28.1（C-23）、15.6（C-24）、15.4（C-25）、16.9（C-26）、25.9（C-27）、182.7（C-28）、33.0（C-29）、23.4（C-30）。13C-NMR 数据与文献[11-12]光谱数据基本一致，并与齐墩果酸对照品共薄层，在三种展开剂系统中Rf值和显色一致，且混合熔点不下降，故化合物Ⅴ鉴定为齐墩果酸。

3 讨论

本文对裸花紫珠叶的水提取物的氯仿萃取部分经各种色谱手段（硅胶吸附柱色谱和Sephadex LH-20柱色谱等）分离得到了5个化合物，通过对其波普数据的分析以及与文献数据对照，分别鉴定为：7α-Hydroxysandaracopimaric acid（Ⅰ）、香草醛（Ⅱ）、5，4′-二羟基-3，7，3′-三甲氧基黄酮（Ⅲ）、5-羟基-3，7，3′，4′-四甲氧基黄酮（Ⅳ）、齐墩果酸（Ⅴ）。化合物Ⅱ为首次从该植物中分离得到。此外，本文中分离得到的化合物 5，4′-二羟基-3，7，3′-三甲氧基黄酮 （Ⅲ） 和 5-羟基-3，7，3′，4′-四甲氧基黄酮（Ⅳ），在笔者先前的研究中从乙酸乙酯萃取部位也曾分离得到且含量较大，表明该两种化合物在乙酸乙酯萃取部位和氯仿萃取部位中均为主要化合物。

裸花紫珠叶具有抗菌止血，消炎解毒，散瘀消肿的功能，其成药裸花紫珠片是海南省著名的黎药品种之一，对细菌感染引起的炎症、急性传染性肝炎、呼吸道及消化道出血等具有确切的疗效[1-3]。目前，国内外对裸花紫珠化学成分研究的报道较少，其抗炎和止血药效物质基础尚不明确。梁继军等[13]曾报道，不同剂量的裸花紫珠总黄酮具有良好的抗炎和止血作用，因此，笔者将继续对分离得到的化合物进行药理活性筛选以确定其主要活性成分。

[1]中国医学科学院药用植物资源开发研究所，中国医学科学院药物研究所，北京医科大学药学院，等.中药志[M].5册.北京：人民卫生出版社，1994：147.

[2]刘明生.黎药学概论[M].北京：人民卫生出版社，2008：165-197.

[3]Dan Y，Qian ZZ，Liu YZ，et al.New Collection of crude drugs in Chinese Pharmacopoeia 2010 I.Callicarpa Linn.and Related Items[J].Chin Herb Med，2010，2（4）：272-288.

[4]蔡金平，董琳，关薇薇，等.裸花紫珠的研究进展[J].现代药物与临床，2012，27（1）：1-5.

[5]Norio MU，Tatsuru TO， Mari HA，et al.Isolation of Apoptosis-and Di?erentiation-Inducing Substances toward Human Promyelocytic Leukemia HL-60 Cells from Leaves of Juniperus taxifolia [J].Biosci Biotechnol Biochem，2008，72（2）：477-484.

[6]侯峰，郭汉文，靳玲，等.沙拐枣的化学成分研究[J].中草药，2008，39（5）：669-670.

[7]孙莉，闫永波.苦碟子的化学成分研究[J].中国新药杂志，2011，20（24）：2460-2461.

[8]Hideji I，Keiichi S，Koichi T.Studies on a novel p-coumaroyl glucoside of apigenin and on other flavonoids isolated from Patchouli（Labiatae）[J].Chem Pharm Bull，1981，29（1）：254-256.

[9]梁耀光，徐新亚，谢海辉，等.细花线纹香茶菜的化学成分研究[J].热带亚热带植物学报，2010，18（5）：564-568.

[10]Sutthanut K，Sripanidkulchai B，Yenjai C，et al.Simultaneous identification and quantitation of 11 flavonoid constituents in Kaempferia parviflora by gas chromatography[J].J Chromatogr A，2007，1143（1-2）：227-223.

[11]Shashi BM，Asish PK.13C NMR spectra of pentacyclic triterpenoids—a compilation and some salient features[J].Phytochemistry，1994，34：1517.

[12]魏娜，王勇，李佩佩，等.黎药角花胡颓子乙酸乙酯萃取部位的化学成分[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（21）：118-120.

[13]梁纪军，徐凯，李留法，等.裸花紫珠总黄酮的抗炎、止血作用研究[J].现代中西医结合杂志，2009，18（26）：3161-3162.