血浆凝固法胸腹水细胞块技术的临床应用

陈建华，陈 中，丁 博

(萍乡市湘东区人民医院病理科，江西 萍乡337016)

血浆凝固法胸腹水细胞块技术的临床应用

陈建华，陈 中，丁 博

(萍乡市湘东区人民医院病理科，江西 萍乡337016)

胸腹水；细胞块；血浆凝固法；石蜡切片；免疫组化；特殊染色

脱落细胞病检是目前各级医院病理科的1个工作重点与发展方向，其中胸腹水细胞学检查在制片与诊断技术上都存在很大困难。我院研制的血浆凝固法胸腹水细胞块技术在制片方面取得了较好的效果，也提高了诊断质量。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本类型 本法适用于各种脱落细胞检查，对胸腹水尤其适用。

1.2 器材 细胞块制作仪器采用普通低速离心机，试剂采用枸橼酸钠抗凝血浆、凝血酶。石蜡切片采用病理科的组织切片程序。

1.3 操作方法

1.3.1 标本处理 取10ml胸腹水标本液加入试管中，普通离心机3000r/min,离心5min，弃去上层液体，保留沉渣制细胞块。

1.3.2 细胞块制作 在保留沉渣的试管中加入200～300μl血浆，用小玻棒将沉渣与血浆搅匀；此时还可加入1小滴伊红着色，便于制蜡块时看清细胞块；然后加入凝血酶试剂200～300μl，立即用小玻棒搅拌3～5s，让细胞均匀分布；10～20s后凝块形成;适当增加作用时间凝块形成得更好。

1.3.3 石蜡切片 摇动试管将上述凝块倒在小纱布上包好，放入95%乙醇中固定、脱水，当作组织块按病理组织切片程序进行制片。

1.3.4 读片诊断 结合细胞块片、直接涂片、临床资料、免疫组化等综合分析诊断。

2 结果

2.1 制片效果 本方法制出的细胞片染色十分清晰，细胞境界、核膜、核染质、核仁清楚，克服了胸腹水沉渣直接细胞涂片经常出现的细胞模糊现象。本院取了连续36例胸腹水用沉渣直接涂片法与血浆凝固细胞块制片法进行制片效果对照，将片子质量按细胞染色清晰程度分成三个等级：好(细胞清晰)；一般(细胞清晰度一般)；差(细胞不清晰)。两种方法制片效果对比见表1。

2.2 诊断效果 血浆凝固法细胞块技术制片效果好，细胞形态与染色清楚，又便于进行免疫组化与特殊染色，给病理诊断带来了很大帮助。

表1 36例胸腹水血浆凝固细胞块法与沉渣直接涂片法制片效果对比表

3 讨论

血浆凝固法细胞块技术的基本原理是血浆中的纤维蛋白原在凝血酶作用下形成纤维蛋白，造成血浆凝固，凝固过程一般需要16～18s[1]。血浆呈液态，制片过程中与沉渣可以充分混匀，加入液态的凝血酶试剂后的5s内，混合物仍然呈液态，可以用小玻棒搅匀，使细胞均匀分布；15s后形成完整的凝块，适当增加作用时间凝块形成得更好；适度摇动试管后凝块可以完整的从试管脱落，便于纱布包裹后脱水固定处理；如果凝块与试管粘得较紧，也可用小玻棒先拔动一下。相比之下，用琼脂法或蛋清加乙醇法制细胞块效果没有本法好，细胞块破碎不整，细胞分布不均，不易制成完整均匀的细胞块。本法采用的血浆与凝血酶成本每例不到1元，检验科做凝血功能检查时每天都会用到。

片子上有效细胞量的多少也是片子质量的重要方面，细胞太少容易漏诊，细胞太多、片子太厚又影响观察读片。本法细胞量的控制要点在于根据沉渣的多少调整血浆与凝血酶的量，如果标本细胞多，沉渣多，就应相应增加血浆与凝血酶用量，凝块适当做大一点；如果标本细胞较少，沉渣较少，就应减少血浆与凝血酶用量，凝块做小一点，保证单位体积的细胞含量适当；血浆用量应与沉渣量相等，凝血酶用量按试剂说明书执行。如果标本细胞量很少，可采用更大的试管加入更多的标本液离心收集细胞，或采用多次离心沉渣累加的办法增加细胞量。

马正中教授指出“许多诊断困难的涂片，实际上是涂片制作质量不佳造成的”，并提出了质量优良的涂片的标准，强调涂片中细胞结构必须清楚，核膜、染色质、核仁等结构必须清晰[2]。本法制作的细胞片最大的优点是细胞结构十分清楚，满足马教授指出的优质片要求，有利于读片诊断。必须注意的是，本法的细胞与直接涂片的细胞镜下表现有一定的差异，诊断标准也必须做一定的研究与调整。细胞团的立体结构与平面结构的鉴别在细胞块片子上困难一些，而在直接涂片上则更容易；细胞的大小也有差异。

本法适用于所有细胞学标本病检，可将细胞学病检纳入组织学病检程序中工作，便于细胞学与组织学的统一工作安排。

《阿克曼外科病理学》指出了胸腹水细胞学诊断的两个最困难的问题，即反应性间皮和肿瘤性间皮的鉴别，恶性间皮与转移癌的鉴别[3]，并指出了免疫组化与特殊染色在诊断中的一些作用。本法采用石蜡切片，可以连续大量切片与长期保存，可以做免疫组化等进一步鉴别工作。

[1]熊立凡,李树仁.临床检验基础[M].北京:人民卫生出版社,2005:92.

[2]刘复生,马正中.中国肿瘤病理学分类[M].北京.科学技术出版社,2001:619.

[3]Rosaw J.阿克曼外科病理学[M].第8版.沈阳：辽宁教育出版社,1999：2149.

R446.8，R446.19

B

1674-1129(2012)04-0412-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.04.049