基层医院自制反定型试剂红细胞的应用及评价

隆维东，刘万彬，李 坚，张玲玲

(重庆市巴南区人民医院检验科 401320)

成分输血是临床医学重要的治疗手段，而ABO血型鉴定是开展临床成分输血的重要基础[1]。按照《临床输血技术规范》要求，输血科在交叉配血前，需复查受血者和供血者ABO血型(正反定型)。在临床血型鉴定过程中,诸多因素可对血型正定型试验造成干扰，而同时开展反定型试验时,可及时发现和纠正正定型中的错误。在基层医院，血型鉴定及交叉配血标本量少，而商品化的血型反定型试剂红细胞价格昂贵、有效期短。同时，其他文献报道的自制反定型试剂红细胞方法、原材料准备及配制过程复杂,故部分基层医院未做血型反定型鉴定[2]。本院通过一种简便、经济、实用的自制反定型试剂红细胞方法，在基层医院运用，效果较好，现报道如下。

1 材料与方法

1.1材料与试剂 BIOBASE生物安全柜,由济南鑫贝西生物技术有限公司提供。Nikon YS100光学显微镜由南京覃思科技有限公司提供。隐血(FOB)检测试剂(胶体金法)，批号：201101014，由艾康生物技术有限公司提供。抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)，批号：20100610，由长春博德生物技术有限公司提供。ABO血型反定型试剂红细胞(人红细胞)，批号：201008005，由江阴力博医药生物技术有限公司提供。各型红细胞悬液，由重庆市血液中心提供。一次性真空采血管(无附加剂)，批号：100824，由成都市双流双陆医疗器械有限公司提供。

1.2方法

1.2.1反定型试剂红细胞配制 收集距离失效期大于20 d的A、B、O型红细胞悬液血袋上多余的交叉配血小辫。在生物安全柜内，将3个相同血型的不同献血员交叉配血小辫内的血液混合在一起，置于一次性无菌真空采血管(无附加剂)内。再通过ABO血型鉴定复核血型后，在试管上注明血型，配制日期，配制人，有效期，置2～6 ℃冰箱保存。

表1 自制反定型试剂红细胞溶血情况

表2 自制反定型试剂红细胞抗原稳定性检测结果

-：此项无数据。

1.2.2自制反定型试剂红细胞稳定性观察 自试剂配制当日起，每2天观察上清液有无出现溶血现象，并记录上清液颜色及透明度。同时,吸取红细胞层,推薄片,在显微镜下观察细胞形态。然后再吸取少量上清液，用无菌等渗生理盐水作倍比稀释,用隐血试纸条检测溶血程度,记录出现隐血阴性时的稀释倍数。

1.2.3自制反定型试剂红细胞抗原稳定性检测 自试剂配制当日起，每2天用单克隆抗A、抗B血清分别与各型自制反定型试剂红细胞作凝集试验，肉眼观察凝集状况，凝集强度以4+、3+、2+、1+、±表示。

1.2.4自制反定型试剂红细胞临床验证 收集本院成年健康体检人员标本520份，同时用商品化ABO血型反定型试剂红细胞(人红细胞)及自制试剂红细胞做ABO血型鉴定，对比两种试剂血型鉴定结果是否相符。

2 结 果

2.1自制反定型试剂红细胞溶血情况 从第1～15天，各型自制试剂红细胞，肉眼观察试剂底部的红细胞呈鲜艳红色，上清液呈微黄色,清澈透明。16 d后,上清液出现轻度溶血,呈浅红色。红细胞推薄片显微镜下观察，第1～15天，红细胞呈正常的圆盘状，均匀分布，无皱缩及其他异常情况。16 d后，少量红细胞出现皱缩或碎片。通过隐血试纸条检测的溶血情况结果(该隐血试纸条检出限为0.1 g/L，1∶8稀释阴性相当于含量低于0.8 g/L)，见表1。

2.2自制反定型试剂红细胞抗原稳定性检测结果 第1～9天A、B型试剂红细胞与相应的抗A、抗B血清产生4+凝集强度，第10～15天A、B型试剂红细胞与相应的抗A、抗B血清产生3+凝集强度，17 d后A、B型试剂红细胞与相应的抗A、抗B血清产生2+凝集强度。而O型试剂红细胞19 d内与抗A、抗B血清未产生凝集反应，见表2。

2.3自制反定型试剂红细胞临床应用验证结果 520例成年健康体检人员商品化试剂红细胞与自制试剂红细胞血型鉴定结果完全相符，见表3。

表3 自制反定型试剂红细胞临床应用验证结果

3 讨 论

现代输血发展的启动是由于ABO红细胞血型系统的发现,而ABO血型的准确鉴定是开展临床成分输血的基础。进行ABO血型鉴定时，需通过已知抗A、抗B标准血清检查红细胞表面抗原成分(正定型)和已知的反定型试剂红细胞来检查血清中的抗体成分(反定型)，只有正、反定型结果相符的情况下，才能准确判断ABO血型。而当正、反定型结果不相符时，须进一步查找原因来明确血型[3]。

本文通过混合相同血型血袋上交叉合血小辫内的血液来配制成反定型试剂红细胞。因血袋上交叉配血小辫内的血液与血袋内的红细胞悬液经过了同样的处理，其中包括献血员筛查，如HBsAg、HCV、抗HIV、梅毒、ALT的检测，故该自制试剂传染性相对较少。同时，细胞保存液能有效地为细胞代谢提供能量，防止溶血，保持红细胞活性[4]。在试剂稳定性方面,从第1～15天，各型自制试剂红细胞稳定性较好，16 d后,出现少量红细胞破坏现象。溶血情况从表1可以看出,各型试剂配制 16 d后，上清液游离血红蛋白含量仍低于0.8 g/L，与其他相关文献报道基本一致[5]。抗原稳定性方面，从表2可以看出，试剂配制17 d后A、B型试剂红细胞与相应的抗A、抗B血清产生2+凝集强度，而O型试剂红细胞19 d内与抗A、抗B血清不产生凝集反应。从临床应用验证来看，520份健康成年体检人员标本,通过长春博德生物技术有限责任公司提供的抗A、抗B血清做正定型鉴定，使用商品化试剂红细胞与自制试剂红细胞同时作反定型试验，520份标本血型鉴定结果完全相符(100％)。

自制反定型试剂红细胞细胞浓度较高,在临床反定型应用过程中,需吸取底层红细胞,用无菌等渗生理盐水洗涤3次，再稀释至5％左右浓度后使用，保质期为24 h[6]。从以上试验可以看出，通过该方法配制的反定型试剂红细胞,在15 d有效期内，试剂稳定性、抗原稳定性及临床应用效果较好[7]，15 d后，自制试剂溶血加重，抗原稳定性下降，故本文建议将自制试剂的有效期控制在15 d内。在日常应用过程中，每天需通过抗A、抗B血清进行抗原确认及质量控制，防止细菌生长或交叉污染。同时，为稳定红细胞正常功能及保证细胞膜结构的完整性，在试剂配制和使用过程中，要尽量减少机械损伤对红细胞的破坏[8]。因该试剂配制方法无需特殊试剂、材料及仪器，操作简便，经济实用，故适合在基层医院推广。

[1]曲惠青，刁汇玲，周荣佼.输血科输血安全隐患及应对策略[J].中国医疗前沿，2010，5(9)：93-94.

[2]陈伯伦，赵和平，孙丽山，等.试剂红细胞的研究与应用[J].实用医技杂志，2006，13(21)：3899-3900.

[3]胡永红.ABO血型反定型对输血前核验的价值[J].广州医药,1998,29(2):56-57.

[4]林武存，赵树铭.应用输血新技术提高输血安全性[J].重庆医学，2007，36(24)：2471-2472.

[5]周华友，陈少彬，于艳涛，等.用血细胞分析仪稀释液配制ABO反定型试剂红细胞[J].现代检验医学杂志，2009，24(3)：113-115.

[6]叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程[M]．3版．南京：东南大学出版社，2006:589-591．

[7]刘淑红，徐华，吴海涛,等.ABO反定型试剂红细胞的质量控制[J].中国实验血液学杂志，2007，15(6)：1289-1292.

[8]林一民，刘预，吴立翔.输血检验流程的质量控制[J].重庆医学， 2005，34(12)：1897-1899.