血府逐瘀汤对动脉粥样硬化大鼠血脂及血管活性物质的影响

耿兆辉，寿保栋，刘辉，杨永滨，任今今

（1.河北大学教务处，河北保定 071002；2.河北医科大学基础医学院，河北石家庄 050017；3.河北大学公共卫生学院，河北保定 071000；4.河北大学基础医学院，河北保定 071000）

血府逐瘀汤对动脉粥样硬化大鼠血脂及血管活性物质的影响

耿兆辉1，寿保栋2，刘辉3，杨永滨4，任今今4

（1.河北大学教务处，河北保定 071002；2.河北医科大学基础医学院，河北石家庄 050017；3.河北大学公共卫生学院，河北保定 071000；4.河北大学基础医学院，河北保定 071000）

通过观察血府逐瘀汤对动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）大鼠血脂及血管内皮活性因子的影响，探讨血府逐瘀汤抗动脉粥样硬化的机制.将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、治疗组（血脂康组、血府逐瘀汤高剂量组、血府逐瘀汤低剂量组）.对照组给予正常饮食；模型组给予高脂饮食；治疗组在高脂饮食基础上分别给予血脂康，血府逐瘀汤高、低剂量.12周后光学显微镜观察主动脉粥样斑块形成情况，检测血脂及测定血浆内皮素（ET）和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的含量.研究结果发现：与模型组相比血府逐瘀汤高、低剂量组，血脂康组均能降低血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C），升高高密度脂蛋白（HDL－C）（P＜0.05），降低ET和AngⅡ（P＜0.05）.表明血府逐瘀汤能调节AS大鼠血脂的异常，降低血管内皮活性因子水平，改善血管内皮病变程度，保护血管内皮，故可有效防治AS.

血府逐瘀汤；动脉粥样硬化；内皮素；血管紧张素Ⅱ

血府逐瘀汤为活血化瘀代表方剂，此方在治疗心绞痛、血脂异常、动脉粥样硬化等方面有一定的疗效［1］.研究表明，该方具有降低血脂、保护血管内皮细胞功能、降低血管内皮细胞黏附分子表达，抑制血小板黏附聚集、抑制SMC增生及相关基因的表达从而具有抗动脉粥样硬化的作用［2－4］，且效果优于其他的活血化瘀方［5］，但其保护血管内皮细胞、防治AS的具体作用机制仍未能阐明.有研究报道桂枝汤或通心络胶囊可以通过降低血清中内皮素（ET）和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）等血管内皮活性因子水平来防治AS［6－7］.但血府逐瘀汤有效防治AS的作用机制是否亦与其影响血浆中ET、AngⅡ的表达水平有关，至今尚未见相关报道.本研究通过饲喂维生素D3、高脂饲料的方法制作大鼠AS模型，给予血府逐瘀汤干预后进行主动脉形态学变化观察、血脂及血管内皮活性因子的表达水平同步检测等手段，探讨该药在保护血管内皮细胞，有效防治AS方面的可能作用机制.

1 材料与方法

1.1 动物

雄性SD大鼠40只，体重（190±10）g，由河北省实验动物中心提供，合格证编号909047.

1.2 药品与试剂

维生素D3注射液由上海第九制药厂生产，血脂康胶囊由北京北大维信生物科技有限公司生产，批号20081211，购自保定市一笑堂药店；胆固醇（分析纯）、胆酸钠购于北京天根试剂公司，丙基硫氧嘧啶为上海复兴制药厂有限公司生产.TC，TG，HDL－C，LDL－C试剂盒购自北京中生生物科技股份有限公司.血府逐瘀汤按文献［8］浸泡、煎煮、去渣浓缩至药液质量浓度为2 g／m L（含生药），灭菌后4℃冷藏保存备用.高脂饲料所需白糖、猪油均为超市购买.ET和AngⅡ试剂盒均购自北京福瑞生物工程公司.采用放射免疫分析法检测血浆中的ET和AngⅡ.

1.3 主要设备

H H·W 21型恒温水浴箱（北京长风仪器仪表公司生产）；M 300半自动生化分析仪（荷兰威图公司）；BMJ－1型包埋机（天津天利航空机电有限公司）；Qpj－1型切片机（天津天利航空机电有限公司）；TDL－5－A型低速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；FT－630G型放射免疫分析仪（北京核仪器厂）.

论证会上，评审组专家听取了相关单位汇报国际院士谷项目基本情况、《潍坊国家农业开放发展综合试验区国际院士谷项目筹备方案》、《国际院士谷项目概念规划设计方案》，对国际院士谷项目方案十分认同，给予了高度评价，并对项目规划设计及功能布局提出了许多优化建议。

1.4 动物分组及模型复制

SD大鼠40只常规观察1周，随机分5组，每组8只，分别为对照组、模型组、血府逐瘀汤高剂量组、血府逐瘀汤低剂量组、血脂康组.正常对照组给予普通饲料，其余各组均饲喂高脂饲料（配方中炼制猪油的质量分数为5%、胆固醇的质量分数为1%、胆酸的质量分数为0.35%、丙硫氧嘧啶的质量分数为0.1%，基础饲料的质量分数为93.55%）.饲喂高脂饲料大鼠按70万单位VitD3／kg的总剂量分3天腹腔注射［9］，对照组给予等体积的生理盐水腹腔注射.血府逐瘀汤低剂量组给予血府逐瘀汤混悬液12 g（6 mL）／（kg·d）灌胃；血府逐瘀汤高剂量组给予血府逐瘀汤混悬液24 g（12 m L）／（kg·d）灌胃；血脂康组给予血脂康混悬液0.12 g（4 m L）／（kg·d）灌胃；模型组给予每天灌胃蒸馏水（10 m L／（kg·d））.连续观察12周.

1.5 标本采集制备及指标检测

1）血脂检测.实验于第11周末进行.实验大鼠禁食12 h（不禁水），用1 g／L的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉.钝性分离主动脉用取血管取血，室温下放置30 min后3000 r／min离心15 min，取血清上机检测TC，TG，HDL－C，LDL－C，同时另取血经肝素抗凝制备血浆，放射免疫法测定ET和AngⅡ含量.

2）病理形态学观察.采血结束后，迅速分离升主动脉至髂总动脉分叉处并将其剪断，冷盐水灌洗除去血管内血液，迅速置于质量分数为10%的中性福尔马林溶液中，固定24 h以上.取约0.5 cm胸主动脉进行固定、脱水、透明、包埋，制备横切面石蜡切片，厚度约3μm，做HE染色观察主动脉的形态学改变.

1.6 统计学处理

所有数据用SPSS13.0统计软件包进行分析，其中计量资料以均数±标准差±s）表示，多组间比较采用单因素设计的方差分析，组间比较采用q检验.

2 结果

2.1 血脂测定结果

实验后，各组血脂见表1.模型组血清TC，TG，LDL－C含量均较对照组显著升高（P＜0.05），HDL－C显著降低（P＜0.05）.血府逐瘀汤高、低剂量组，血脂康组TG，TC，LDL－C含量较模型组明显降低（P＜0.05），HDL－C明显升高（P＜0.05）；血府逐瘀汤高剂量组与血脂康组对比HDL－C明显升高（P＜0.05）.

表1 不同组大鼠血脂含量的比较（±s）Tab.1 Lipid content of different comparison group（±s）

表1 不同组大鼠血脂含量的比较（±s）Tab.1 Lipid content of different comparison group（±s）

＊表示与对照组比较P＜0.05；＊＊表示与对照组比较P＜0.01；△表示与模型组比较P＜0.05；△△表示与模型组比较P＜0.05；＃表示与血脂康组比较P＜0.05.

组别剂量／（g·kg－1）n c（TG）／（mmol·L－1）c（TC）／（mmol·L－1）c（HDL－C）／（mmol·L－1）c（LDL－C）／（mmol·L－1）对照组—8 0.84±0.34 2.11±0.18 1.46±0.27 0.37±0.18模型组—8 1.27±0.34＊＊ 2.81±0.36＊＊1.04±0.28＊＊ 0.73±0.08＊＊血府逐瘀汤高剂量2.0 8 0.82±0.15 2.16±0.20 1.50±0.33＊△△＃ 0.46±0.18＊△血府逐瘀汤低剂量1.0 8 0.92±0.13 2.20±0.20 1.36±0.24＊△ 0.48±0.21＊△血脂康组0.3 8 0.86±0.12 2.17±0.14 1.35±1.03＊△ 0.42±0.23＊△

2.2 ET和AngⅡ测定结果

模型组与正常组相比血浆ET和AngⅡ含量均显著升高（P＜0.01）；血府逐瘀汤高、低剂量组，血脂康组和模型组相比血浆ET和AngⅡ含量均显著降低（P＜0.05），结果见表2.

表2 不同组大鼠血浆中ET和AngⅡ含量的比较（±s）Tab.2 Different groups in rat plasma levels of ET and AngⅡcomparison of（±s）

表2 不同组大鼠血浆中ET和AngⅡ含量的比较（±s）Tab.2 Different groups in rat plasma levels of ET and AngⅡcomparison of（±s）

＊表示与对照组比较P＜0.05；＊＊表示与对照组比较P＜0.01；△表示与模型组比较P＜0.05；△△表示与模型组比较P＜0.01；＃表示与血脂康组比较P＜0.05.

组别剂量／（g·kg－1）nρ（ET）／（pg·m L－1）ρ（AngⅡ）／（pg·m L－1）对照组—8 98.84±17.67 91.25±21.43模型组—8 127.16±20.44＊＊132.45±30.74＊＊血府逐瘀汤高剂量2.0 8 102.20±19.18△△95.47±24.29△△血府逐瘀汤低剂量1.0 8 114.08a±16.77＊△＃108.71±26.71＊△＃血脂康组0.3 8 98.14±18.30△△94.28±25.16△△

2.3 病理形态学特征

对照组（图1 a）主动脉壁各层结构正常，内膜下未见有脂质沉积，弹力纤维分布均匀；模型组（图1 b）主动脉壁内膜增厚，内弹力板断裂，内膜下可见由一层由平滑肌细胞、胶原纤维等构成的纤维组织帽，其下方有脂质沉积、不定形的坏死物质内有胆固醇结晶钙盐沉积，周边可见少许炎细胞，中膜有不同程度的萎缩，证明AS造模成功；血脂康组（图1 c）主动脉内膜稍有增厚，未见到有泡沫细胞，中膜平滑肌细胞排列较规整；血府逐瘀汤低剂量组（图1 d）内膜稍有增厚，内膜下可见数量不等的泡沫细胞，符合AS症的早期改变；血府逐瘀汤高剂量组（图1 e）主动脉内膜增厚不明显，内膜未见有泡沫细胞，中膜平滑肌细胞排列较规整.

图1 各组组织病理学改变（HE染色，40×10）Fig.1 Morphological changes of the groups（HE stain，40×10）

3 讨论

目前，在我国各种疾病的发病率和死亡率中，心血管系统疾病占第1位，AS是心血管系统疾病的病变基础.它是由于动脉内膜的脂质沉积、内膜灶性纤维化、粥样斑块的形成，导致管壁变硬、管腔狭窄.虽然目前AS的确切机制不是很清楚，但大量基础研究和流行病学调查表明高脂血症为AS形成的重要因素之一［10］，如果伴随血管内皮细胞受损、通透性增强、坏死和脱失，过多的脂质沉积在内膜上，最终将导致血管的硬化［11］.目前西药降血脂和抗动脉粥样硬化为主的治疗方法，取得了一定的疗效，但价格昂贵且持久服药易产生较多的副作用.因此寻找经济实惠、副作用小的降脂及抗动脉粥样硬化的中药，成为目前我国传统医学抗AS研究的重要课题.AS在传统医学中认为属于“血瘀”“癥结”“痹症”的范畴，在治疗中，《素问·至真要大论》中认为此类疾病应采用“结者散之，留着攻之”，即用活血化瘀的方法治疗.

本实验结果中显示模型组血清TC，TG，LDL－C含量均较对照组升高（P＜0.05），HDL－C降低（P＜0.05）出现了脂质代谢紊乱；各治疗组（血府逐瘀汤高、低剂量组，血脂康组）均能降低TG，TC，LDL－C，（P＜0.05），升高HDL－C（P＜0.05），且血府逐瘀汤高剂量组调节血脂的作用更明显，升高HDL－C优于血脂康组和低剂量组.这与以往的研究结果［12］基本相同，提示了血府逐瘀汤可以通过调节血脂代谢起到抗AS的作用.

血管内皮细胞覆盖血管内表面，不仅维护着血管的完整性，保持血管壁正常结构与通透性，维持正常的物质交换；而且是一个十分活跃的代谢与内分泌器官，有合成和释放多种活性物质的功能，对于AS的发生至关重要.ET是由血管内皮细胞产生的重要循环激素，正常时它维持了机体内环境的稳定，但在某些疾病过程中会明显增多，能促进血小板聚集和平滑肌细胞增殖，容易造成严重的组织损伤并且促进病情发展［13］.ET包括3个异构体（ET－1，ET－2，ET－3）能够与平滑肌和血管的靶细胞受体结合，促进平滑肌和血管的的收缩还能导致疼痛的发生［14］，导致内皮细胞的损伤而促进AS的发生.

本实验结果显示各治疗组ET含量均显著降低（P＜0.05），且血府逐瘀汤高剂量组和血脂康组作用强于血府逐瘀汤低剂量组，提示血府逐瘀汤可以通过降低ET表达水平，起到保护内皮细胞，抗AS的作用.

相关研究发现肾素－血管紧张素系统（RAS）参与了AS发病的过程［15－16］.AngⅡ是RAS系统中主要的活性肽产物，AS动脉壁的内皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞均可以分泌AngⅡ，AngⅡ可以趋化巨噬细胞吞噬脂质，氧化修饰低密度脂蛋白，同时AngⅡ可以引起细小血管收缩，血压升高继发性地引起AS.近年来发现AngⅡ还能通过产生氧自由基和影响纤溶功能，诱导炎症反应及细胞凋亡等多方面参与AS的形成.

本实验结果显示各治疗组AngⅡ含量均显著降低（P＜0.05），且血府逐瘀汤高剂量组和血脂康组作用强于血府逐瘀汤低剂量组，提示血府逐瘀汤可以通过降低AngⅡ的表达，起到抗AS的作用.

血府逐瘀汤是东汉末年由张仲景所创，收载于《伤寒杂病论》.处方由鳖甲胶、阿胶、蜂房（炒）、鼠妇虫、蜣螂、柴胡、黄芩、半夏（制）、党参、干姜、白芍等23味药物组成.其功效为活血化瘀，软坚散结.现代药理研究表明，本方药物及配伍组合有保护血管内皮的功能［2，17］，在防治AS方面有一定的疗效［8］，但是机制不是十分清楚.本实验在光学显微镜下观察血管壁的病理形态学变化证实模型成功.实验结果显示，血府逐瘀汤可影响血脂和血浆中ET和AngⅡ的表达，提示血府逐瘀汤有效防治AS的可能机制与其调节脂质代谢，降低血浆中ET和AngⅡ表达水平，改善血管内皮代谢，减轻病变程度有关.这可能是其抗AS的分子机制之一.

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Effect of Xuefu Zhuyu Decoction on the Expression of Blood－lipid and Vasoactive Substances in the Rats with Atherosclerosis

GENG Zhao－hui1，SHOU Bao－dong2，LIU Hui3，YANG Yong－bin4，REN Jin－jin4
（1.Office of Academic Affairs，Hebei University，Baoding 071002，China；2.College of Basic Medical Scicnce，Hebei Medical University，Shijiazhuang 050017，China；3.School of Public Health，Hebei University，Baoding 071000，China；4.College of Basic Medical Science，Hebei University，Baoding 071000，China）

To investigate the effect of Xuefu Zhuyu decoction on the expression of blood－lipid and vasoactive substances in the rats with atherosclerosis.Forty SD rats were randomly divided into control group，model group and treatment group（Xuezhikang group，Xuefu Zhuyu high－dose group，and Xuefu Zhuyu low dose group）.The control group was fed with normal diet，model group a high－fat diet，treatment groups the high fat diet mixed with Xuezhikang，High dose and low dose Xuefu Zhuyu decoction respectively.Themorphological changes of atheromatous plaque were observed 12 weeks later.The blood level of total cholesterol，triglyceride，low density lipoprotein，high－density lipoprotein，and endothelin（ET）angiotensinⅡ（AngⅡ）were tested at the same time.Compared with the model group，all the treatment groups could reduce the serum levels of total cholesterol，triglycerides，low density lipoprotein，ET and AngⅡ（P＜0.05），and increase high－density lipoprotein（P＜0.05）.It was found that Xuefu Zhuyu decoction could effectively regulate the serum level of lipidemia of AS rats，reduce the activity of vascular endothelial factors，and protecting the endothelium，and then prevent and cure atherosclerosis effectively.

Xuefu Zhuyu decoction；atherosclerosis；endothelins；angiotensin

R 543.5

A

1000－1565（2011）03－0304－05

2010－09－12

河北省卫生厅医学科学研究重点课题计划（08166）；河北省科技支撑计划项目（102761101）；河北省中医药管理局科学技术研究课题（2008071）

耿兆辉（1973－），男，山东德州人，河北大学讲师，主要从事医学基础及教育管理研究.E－mail：gengzhaohui＠hbu.edu.cn

赵藏赏）