反相高效液相色谱法测定地塞米松软膏中地塞米松含量

杨习江，哈娜，哈力

(哈尔滨医科大学附属第一临床医院药学部，150001)

地塞米松软膏可用于治疗过敏性皮炎、神经性皮炎、脂溢性皮炎或各种瘙痒症等。该制剂收载于1990年版黑龙江省医院制剂规范，其质量标准中无含量测定项。为有效控制该制剂的质量，笔者建立了反相-高效液相色谱(reversed phase-high performance liquid chromatography，RP-HPLC)法测定地塞米松软膏中地塞米松含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 美国Waters 600高效液相色谱系统，2996二极管阵列检测器，717plus自动进样器，Empower数据管理系统。十万分之一电子天平(型号:BP211D Sartorius)，万分之一电子天平(型号:AE200上海梅特勒——托利多仪器有限公司)，超声波清洗仪(型号:SB3200型 上海 BRANSON)，超纯水器(型号:UPW50S北京普析通用仪器责任有限公司)。

1.2 试药 地塞米松对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100129-200804)，地塞米松软膏(哈尔滨医科大学附属第一临床医院药学部制剂室，批号:20090504，20090511，20090518)，甲醇为色谱纯，水为超纯水(实验室自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Sinochrom ODS-BP柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(80∶20);检测波长:240 nm［1］;流速:1.0 mL·min-1;柱温:25℃;进样量:20μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取地塞米松对照品25.0 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀;精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升含地塞米松50.0μg)。

2.3 供试品溶液的制备 取地塞米松软膏适量(相当于地塞米松2.5 mg)，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇约30 mL，置60℃水浴中加热，振摇使地塞米松溶解，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却＞2 h，取出后迅速过滤，放至室温，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备 按处方量称取处方中除地塞米松以外的其他药用辅料，按制备工艺制成不含地塞米松的阴性供试品，按照“供试品溶液的制备”项下操作，制备阴性供试品溶液，备用。

2.5 系统适应性实验 分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20μL进样，按“2.1”项下色谱条件进行测定。对照品与供试品溶液的地塞米松保留时间基本一致，阴性样品溶液在此处无吸收峰出现，不干扰主药的含量测定。

2.6 线性范围的考察 精密吸取0.5 mg·mL-1对照品溶液 0.25，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20μL，测定地塞米松的峰面积，以进样量为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程:Y=2.37×106X-2.22×105，r=0.999 9。结果表明:在上述色谱条件下，地塞米松在0.25～2.50μg范围内，地塞米松峰面积值与进样量呈良好的线性关系。

2.7 精密度实验 精密吸取上述同一份的对照品溶液20μL和同一份的供试品溶液20μL，分别在上述的色谱条件下连续进样6次，测定地塞米松的峰面积。实验结果表明，样品中地塞米松峰面积值的RSD＜2%，精密度良好。

2.8 稳定性实验 取同一份供试品溶液(批号:20090511)分别于0，1，2，4，6，8 h 进样20 μL，测定地塞米松的峰面积。实验结果表明，样品中地塞米松峰面积值的RSD＜2%，供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.9 重复性实验 对同一批样品(批号:20090511)分别取样6份，按拟定的含量测定方法，制备供试品溶液，在上述的色谱条件下测定供试品溶液和对照品溶液的峰面积，计算地塞米松的含量。实验结果表明，样品中地塞米松含量的RSD＜2%，重复性良好。

2.10 加样回收率实验 精密称取阴性对照样品5 g(相当于含有地塞米松2.5 mg)，分别精密加入地塞米松对照品2.0，2.5，3.0 mg，按上述供试品溶液的制备方法制备成加样回收供试品溶液，并按照上述色谱条件，吸取供试品溶液和对照品溶液，进样20μL，测定地塞米松的峰面积，计算加样回收率。结果见表1。实验结果表明，平均回收率为100.1%，RSD为0.75%(n=9)。

表1 地塞米松加样回收率实验结果Tab．1 Results of recovery test of dexamethasone

2.11 样品含量测定 按照上述含量测定方法，分别对3批样品进行含量测定，结果批号为20090504，20090511，20090518的3批样品地塞米松平均含量分别为 0.49，0.46，0.51 mg·g-1。

3 讨论

笔者参照地塞米松含量测定的有关文献［2-6］，分别采用甲醇和乙醇提取样品中的地塞米松，在同一流动相系统中作相溶性预实验。其中采用甲醇提取处理的样品在(Ⅰ)甲醇∶水(80∶20)、(Ⅱ)甲醇∶水(90∶10)流动相溶液中有良好的溶解性，未见浑浊和白色絮凝物，但在(Ⅲ)甲醇∶水(70∶30)流动相溶液中可生成少量白色絮凝物;而用乙醇提取处理的样品在上述3种流动相系统中均出现白色絮凝物，故实验采用甲醇提取样品中的地塞米松。

乳膏中的基质可污染色谱柱，因此在样品处理时采用冰浴冷却后迅速过滤的方法，为了使基质完全除去，以减少对色谱柱的损害，并使测定结果更加准确，一定要在提取地塞米松后将提取溶液放至室温再定容至刻度，同时应在冰浴中冷却＞2 h。

在参照地塞米松含量测定的有关文献［1-6］和上述预实验的基础之上，采用3种流动相:(Ⅰ)甲醇∶水(80∶20)、(Ⅱ)甲醇∶水(90∶10)、(Ⅲ)乙腈∶水(60∶40)，在上述色谱条件下，取对照品溶液和供试品溶液分别进样20μL，记录HPLC色谱图。结果表明，样品在流动相(Ⅱ)甲醇∶水(90∶10)中基质和主药地塞米松无法分离，而在流动相(Ⅲ)乙腈∶水(60∶40)中基质和主药地塞米松分离不完全，但采用流动相(Ⅰ)甲醇∶水(80∶20)可得到较理想的HPLC色谱图，方法简便快速、分离度好、结果稳定，可为该制剂的质量控制提供客观的定量评价方法。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［M］.北京:化学工业出版社，2005:184.

［2］ 钱方，黄伟，吴洪.高效液相色谱 (HPLC)法测定复方地塞米松乳膏中地塞米松的含量［J］.药学服务与研究，2002，2(4):253-254.

［3］ 林竹贞，蓝明雄.皮炎平软膏中醋酸地塞米松的含量测定［J］.井冈山医学高等专科学校学报，2004，11(3):52-53.

［4］ 周征，卓开华.高效液相色谱法测定复方氯霉素乳膏的含量［J］.中国医院药学杂志，2007，27(2):276-277.

［5］ 严玲.反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定复方维A酸软膏中醋酸地塞米松的含量［J］.中国药房，2007，18(7):540-541.

［6］ 王丽萍.高效液相色谱法测定皮炎平软膏中樟脑与醋酸地塞米松含量［J］.医药导报，2007，26(5):550-551.