苯并咪唑-镍(Ⅱ)-L-α-氨基酸配合物的合成及其SOD活性*

周晓华，马卉芳，吴海雷

(华南农业大学 理学院 应用化学系，广东 广州 510642)

由于组氨酸残基、天冬氨酸残基和胱氨酸残基等在Ni-SOD的活性中心与Ni离子配位，Ni-SOD的抑制类型和生物活性与CuZn-SOD相似[4，10]，在化学稳定性及空间结构上，苯并咪唑(bim)比咪唑更适合模拟组氨酸残基，L-氨基酸为金属酶蛋白的结构单元。

1 实验部分

1．1 仪器与试剂

UV-Vis 4000型紫外-可见分光光度计；ACATAR 360 FT-IR型红外光谱仪(KBr压片)；Vario EL型元素分析仪；DDS-11A型数显电导仪。

天然CuZn-SOD酶(纯度98%,比活6 000 μ·mg-1)；其余所用试剂均为分析纯或生化纯。

1．2 1～3的合成

在反应瓶中加入NiCl2·6H2O 1 mmol，L-氨基酸2 mmol和热水10 mL，搅拌使其完全溶解后加入bim(2.2 mmol)的乙醇(5 mL)溶液，用NaOH溶液调pH至中性，回流反应2 h～3 h。冷却至室温，过滤，滤液于室温放置几天后析出蓝色微晶。过滤，滤饼用乙醇洗涤，真空干燥得蓝色晶体1～3。

1.3 SOD活性测定[11，12]

用磷酸缓冲液(pH 7.8)配制c(NBT)=9.32×10-5mol·L-1，c(VB2)=6.80×10-6mol·L-1，c(四甲基乙二胺)=1.0×10-4mol·L-1和c(1～3)=0.01 μmol·L-1～0.8 μmol·L-1的各种试样溶液。恒温25 ℃下，用恒定光强的冷光灯(50 500±500 Lux)照射(首次60 s，以后30 s/次)待测溶液，测定560 nm处的吸光度(平行实验两次，取平均值)，计算IC50。 IC50越小，SOD活性越强。

2 结果与讨论

2．1 配合物的表征

Λ值表明1～3均为非电解质类型[15]。从表1还以看出，1～3均有三个较强的吸收峰，归属于bim的π→π*跃迁。与bim相比，1～3的π→π*峰位基本未变，但由于bim的N与Ni(Ⅱ)配位，引起π电子云密度下降，使其强度减弱。另外，在可见光谱区，1～3在620 nm左右均出现了一个归属于Ni(Ⅱ)的d→d*跃迁的弱而宽的吸收峰。UV-Vis数据也表明bim与Ni(Ⅱ)配位成键。

综合UV-Vis, IR,Λ值和元素分析数据，并参考文献[12,14]方法，推测1～3的分子式分别为：Ni(bim)2(L-ala)2，Ni(bim)2(L-leu)2·H2O和Ni(bim)2(L-arg)2，其可能的结构如Chart 1所示。

表1 配合物的IR，UV-Vis和Λ数据

1～3

Chart1

2．2 配合物的SOD活性

1～3的相对分子量和IC50值列于表3。由表3可知，1～3的IC50接近于文献[8,12，16]值，优于文献[5，9]报道的类似配合物，说明三种配合物具有良好的清除超氧阴离子自由基的活性。其SOD活性顺序为：1⟩3⟩2。

表2 配合物的元素分析数据

表3 配合物的相对分子量和IC50值

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