液基细胞学技术联合高危HPV-DNA检测对宫颈癌前病变的诊断效度

王泽曼, 陈 玉， 郑建鹏

(珠海市第二人民医院1体检部妇科，2防保科,3检验科，广东 珠海 519020)

液基细胞学技术联合高危HPV-DNA检测对宫颈癌前病变的诊断效度

王泽曼1, 陈 玉2△， 郑建鹏3

(珠海市第二人民医院1体检部妇科，2防保科,3检验科，广东 珠海 519020)

目的： 探讨液基细胞学检查技术(LCT)联合高危人乳头状瘤病毒DNA(HPV-DNA)检测诊断宫颈癌前病变的效度。方法对2007年12月～2010年12月来我院行体检的19～65岁的6 521名女性采用LCT进行宫颈癌的筛查，以及HPV分型基因芯片检测系统进行18种高危HPV基因亚型检测。对上述检测阳性者行阴道镜下宫颈活组织检查，对检测均阴性者依其意愿进行阴道镜下宫颈活组织检查。结果LCT阳性(≥ASCUS)152例，HPV阳性86例，其中二者均为阳性的有42例，LCT和HPV均为阴性的有6 325例；LCT阳性的152例和HPV阳性的86例中病理活组织检查结果为阳性(≥CIN I)的分别有112例和68例，其中LCT和HPV均阳性的42例中病理活组织检查阳性的有34例。LCT和HPV均为阴性的6 325例中有2 000人自愿行病理检查，其中1人病理检查结果为阳性。LCT诊断宫颈癌前病变的灵敏度为76.19%，特异度为98.05%；HPV检测诊断宫颈癌前病变的灵敏度为46.26%，特异度为99.12%；两方法联合诊断(其中1项阳性即判定为患者)宫颈癌前病变的灵敏度为99.32%，特异度为99.61%。结论液基细胞检测技术和高危HPV-DNA检测的联合应用优于单项技术检测，对于宫颈癌前病变的筛检具有重要意义。

液基细胞技术； HPV-DNA检测； 宫颈癌前病变；效度

宫颈癌是最常见的一种妇科恶性肿瘤，其发生和发展是一个比较长的演变过程，而宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)是与宫颈浸润癌密切相关的一组癌前病变，它反映宫颈癌发生发展中的连续过程。宫颈癌前病变主要包括不典型增生和原位癌，病理学诊断分为3级即CIN I级(轻度不典型增生)、CIN II级(中度不典型增生)、CIN III级(重度不典型增生和原位癌)。近10年来大量流行病及基础研究的资料证实HPV持续性感染是CIN及宫颈癌发生的必要条件[1]。根据人乳头状瘤病毒(human papiloma virus,HPV)与癌瘤的关系，HPV可分为低危型和高危型。低危型HPV有6、11、40、42、43、44、53、54、57、61、62、72、81、83等型；高危型HPV有16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、MM4等型。高危型HPV检测已成为宫颈癌的重要筛查手段，不仅能提高细胞学筛查的敏感性，还可预警细胞学正常或ASCUS患者的病情发展，也能减少HPV阴性而细胞学异常女性的检查次数，延长检查间隔期。人乳头状瘤病毒DNA(HPV-DNA)检测与细胞学联合筛查宫颈病变具有高效性，两者结合的宫颈癌全面筛查方案有望取代单一的细胞学检测[2-5]。

效度指测量值与真实值的符合程度，对一筛查方法的真实性评价使用灵敏度、特异度等指标[6]。本文对2007年12月～2010年12月来我院体检的19～65岁的女性6 521人进行液基细胞学技术(liquid-based cytology technique,LCT)和HPV-DNA检测，对检测阳性者行阴道镜下宫颈活组织检查，对检测阴性的依其意愿进行阴道镜下宫颈活组织检查，探讨LCT联合HPV-DNA检测诊断宫颈癌前病变的效度。

材 料 和 方 法

1研究对象

为2007年12月～2010年12月来我院体检的6 521名女性，包括宫颈炎、宫颈湿疣、阴道不规则流血等患者，年龄19～65岁，平均(34.5±21.5)岁，孕次0～8次，产次0～5次，均有性生活史。

2方法

对所有患者采用LCT检测法进行宫颈癌的筛查，及HPV分型基因芯片检测系统进行18种高危HPV基因亚型检测。对上述检测阳性者行阴道镜下宫颈活组织检查，对上述两项检测均阴性的自愿进行阴道镜下宫颈活组织检查。

2.1LCT 擦去宫颈表面黏液，用特制宫颈细胞刷伸入距宫颈管内1 cm处，沿顺时针方向旋转5周左右，取出转入细胞保存液中，并将保存液中的细胞进行处理、制片以及阅片。采用TBS(the Bethesda System)[7]系统描述性诊断：非典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells of undetermined signification,ASCUS)或非典型腺上皮细胞(atypical glandular cells of undetermined signification,AGUS)、低度鳞状上皮内病变(low squamous intraepithelial lesion,LSIL)、高度鳞状上皮内病变(high squamous intraepithelial lesion,HSIL)或不能排除高度鳞状上皮内病变的非典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cell,cannot exclude high-grade squamous intraepithelial lesion,ASC-H)。对液基细胞检查异常者(包括ASCUS/AGUS、LSIL、HSIL、ASC-H、鳞状细胞癌/腺癌)即判定为阳性。

2.2高危HPV-DNA检测 将宫颈刷置于宫颈口转动4周，取足量分泌物及脱落细胞，然后将宫颈刷放入备有1 mL洗脱液的洗脱管中以送检或保存于-20 ℃冰箱中待检。检测时先进行离心、保留细胞块再裂解、沉淀、保留上清液待用。采用亚能生物技术有限公司(深圳)生产的人乳头瘤病毒分型基因芯片检测系统进行PCR扩增、杂交、洗膜以及显色，通过阅读仪上扫描，结果自动识别、保存及打印。可同时检测18种高危HPV亚型(包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、MM4)。

2.3阴道镜下宫颈活组织病理检查为确诊宫颈癌及宫颈癌前病变最可靠依据 宫颈有明显病灶者，可在病灶处直接取材。无明显病灶在阴道镜下行多点取材送病理学检查，做最后确诊。所取组织应包括间质及邻近正常组织。病理诊断阳性包括宫颈上皮内瘤变，按轻、中、重分为CIN I、CIN II、CIN III。

3统计学处理

对LCT和高危HPV-DNA检测的诊断结果进行关联性检验和McNemer检验，并分别计算LCT、高危HPV-DNA检测及两者联合诊断(其中1项阳性即为患者)宫颈癌前病变的灵敏度、特异度、阳性似然比和阴性似然比(阳性似然比越大，则确诊疾病的能力越强；阴性似然比越小，则排除疾病的能力越强)。

结 果

1LCT、高危HPV-DNA检测和活组织病理检查结果

6 521名受检者中，LCT阳性152例，HPV阳性86例，其中二者均为阳性42例，LCT和HPV均为阴性6 325例，见表1。关联性检验的结果显示，2=807.37，Plt;0.01，关联系数r=0.35，说明这2种诊断方法存在一定的正关联性；McNemer检验的结果显示，2=27.44，Plt;0.01，说明这2种诊断方法的阳性率不相等，不可互相替代。

LCT和HPV至少有1项阳性的196名受检者均接受病理检查，共检出阳性146例，其中LCT阳性的152例和HPV阳性86例中病理活组织检查结果为阳性的分别有112例和68例；LCT和HPV均为阴性的6 325例中有2 000人自愿行病理检查，其中1人病理检查结果为阳性(1/2 000)，即2196名(196+2 000)接受病理检查者共检出阳性147例(146+1)，见表2～4。

2LCT和高危HPV-DNA检测诊断宫颈癌前病变的灵敏度和特异度

根据表2～4的数据算出2 196名接受病理检查者中LCT、高危HPV-DNA检测及两者联合的灵敏度、特异度、阳性似然比和阴性似然比，结果见表5。高危HPV-DNA检测的阳性似然比大于LCT，说明其确诊疾病的能力更强；但其阴性似然比也大于LCT，则排除疾病的能力逊于LCT。2种方法联合诊断，阳性似然比大大提高而阴性似然比大大降低，说明无论是确诊还是排除疾病的能力均比单用更强。

表2 病理活检确认LCT诊断宫颈癌前病变结果

表3 病理活检确认高危HPV-DNA检测诊断宫颈癌前病变结果

表4 病理活检确认LCT和HPV-DNA检测联合诊断宫颈癌前病变结果

表5 LCT、高危HPV-DNA检测及两者联合诊断宫颈癌前病变的灵敏度、特异度、阳性似然比和阴性似然比

讨 论

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤。而细胞学检查则为最简单的宫颈鳞状皮内瘤变的辅助检测方法，因其检测无创、取材方便的特点，以及LCT技术制作的薄片，因其细胞结构清楚、背景清晰可明显提高涂片满意度，且宫颈异常细胞检出率较高的独特优势，已成为宫颈病变筛查的重要手段，对开展宫颈肿瘤的普查具有重要意义[8]。近40年以来由于宫颈细胞学筛查的广泛应用，使得宫颈癌和宫颈癌前病变得以早发现及诊疗，使宫颈癌的发病率及病死率已明显下降。本次研究中，LCT检测具有较高的检出率，与病理组织学对照诊断符合率亦较高，能较准确反映宫颈癌及宫颈癌前病变，是一种高效的宫颈癌前病变的筛查方法，但作为一种普查手段，其单项检测的灵敏度相对较低，漏诊率较高。

接近90%CIN有HPV感染，约20%有性生活妇女感染HPV，但其HPV感染多不能持久，常可自然消退而不伴临床症状。若HPV感染持续存在，在吸烟、性传播疾病等因素作用下可诱发宫颈上皮内瘤变。高危型HPV病毒可从感染到癌变的全过程中均能检出，本次研究中显示，高危HPV-DNA技术单项检测的灵敏度较低，漏诊率较高，不适宜单独应用于宫颈癌前病变的筛查。

国内外研究报道显示，细胞学检查是宫颈癌前病变规范化治疗的第一步，但其假阴性率较高。LCT和高危HPV-DNA检测的联合应用优于单项技术检测，对于宫颈癌前病变的筛检具有重要意义。 在此基础上结合行阴道镜下宫颈活组织检查的诊断构成了宫颈病变系统的有效诊断模式，值得推广应用。

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Diagnosticvalidityofcervicalprecancerouslesionsbyliquid-basedcytologytechniquecombinedwithhigh-riskHPV-DNAdetection

WANG Ze-man1, CHEN Yu2, ZHENG Jian-peng3

(1DepartmentofGynecologicalExamination,2DepartmentofPreventionandHealthCare,3DepartmentofLaboratoryMedicine,TheSecondPeople’sHospitalofZhuhaiCity,Zhuhai519020,China.E-mail:kellyw@tom.com)

AIM: To investigate liquid-based cytology technique (LCT) combined with high-risk human papilloma virus DNA (HPV-DNA) detection for diagnosis of cervical precancerous lesions.METHODSScreening of cervical cancer was performed by LCT combined with HPV-DNA detection in 6 521 women at the age of 19～65 in our hospital for physical examination from December 2007 to December 2010. Eighteen high-risk HPV isoform genes were detected by HPV typing gene chip detection system. The women with positive detection underwent colposcopic cervical biopsies. The women with negative detection also underwent colposcopic cervical biopsies if the operation was of their own accord.RESULTSThe LCT positive results (≥ASCUS) were observed in 152 cases and HPV positive results were obtained in 86 cases. The women with both 2 positive results were found in 42 cases. The women with both LCT and HPV negative results were determined in 6 325 cases. In 152 cases of LCT positive and 86 cases of HPV positive women, the positive results of pathological biopsy (≥CINI) were 112 and 68 cases, respectively. Thirty-four cases in the 42 cases of both LCT and HPV positive women were conformed by pathological biopsy. In 6 325 women with negative results of LCT and HPV detection, 2 000 were perform pathological biopsy according to their own accord and only 1 had positive result. The diagnostic sensitivity of LCT for cervical precancerous lesions was 76.19% with the specificity of 98.05%. The diagnostic sensitivity of HPV detection for precancerous lesions of uterine cervix was 46.26% with the specificity of 99.12%. Combination of the 2 methods to diagnose cervical precancerous lesions made the sensitivity increase to 99.32% with the specificity of 99.61%.CONCLUSIONLiquid-based cytology technique combined with high-risk HPV-DNA detection is better than each of the single technique for screening precancerous lesion of cervical carcinoma.

Liquid-based cytology technique; HPV-DNA detection; Precancerous lesions of uterine cervix; Validity

1000-4718(2011)12-2414-03

R363

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2011.12.035

2011-07-22

2011-10-17

△通讯作者 Tel: 0756-8136363; E-mail: kellyw@tom.com