Livin和PTEN在肾细胞癌中的表达及其临床意义

倪建华 辛 军 伍伯聪 辛明华 吴文峰

肾细胞癌是泌尿系统中发病率仅次于膀胱癌的恶性肿瘤，也是成人肾脏最常见的恶性肿瘤，预后较差，且对放、化疗均不敏感。Livin和PTEN均参与细胞凋亡的调控，但其在肾肿瘤发生、发展中的作用及其相互机制有待更深一步研究。本研究通过免疫组化SP法检测44例肾细胞癌组织和10例正常肾组织Livin和PTEN的表达，探讨它们在肾细胞癌发生、发展中的作用以及两者的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集福建医科大学附属泉州第一医院泌尿外科2008～2009年手术切除的肾细胞癌石蜡包埋标本44例，其中男性24例，女性20例;年龄26～75岁，平均年龄(53.65±10.09)岁;组织学分级按 WHO推荐的Fuhrman分级标准，高～中分化26例，低分化18例;病理分期按Robson临床分期标准，Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期17例，发生淋巴结转移有11例。正常肾组织10例，取自结石、积水或肾外伤手术切除病例并经病理检查证实。所有患者术前均未行放疗或化疗。

1.2 实验方法

石蜡切片脱蜡水化，采用免疫组织化学SP法，DAB显色。具体步骤参考说明书进行。Livin单克隆抗体和PTEN单克隆抗体均为美国UCL公司产品。Livin和PTEN一抗工作浓度均为1∶100，用已知阳性切片(膀胱癌)作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定

Livin和PTEN染色程度判断:阳性均为胞质染为淡黄色至棕黄色，凡显色强度与背景无明显差别者为阴性。随机观察5个高倍视野(×400)，计数阳性细胞显色程度及其所占比例。阳性细胞百分比＜10%，显色强度为淡黄色或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色，判定为弱阳性(+);阳性细胞百分比＞60%，多数细胞呈黄至棕黄色染色，判定为强阳性(+++);阳性细胞百分比及显色强度介于两者之间，判定为中度阳性(++)。

1.4 统计学方法

采用SPSS13.0统计软件进行分析，Livin和PTEN的表达与肾细胞癌临床病理参数之间的关系采用卡方检验;两者之间的相关性采用Spearman等级相关分析;显著性检验水准取α=0.05。

2 结果

2.1 Livin、PTEN 的表达

正常组与肾癌组，Livin表达率分别为0、47.7%(21/44)，PTEN 表达率分别为 100.0%、38.6%(17/44)，两两比较，P 均 ＜0.05。

2.2 Livin、PTEN表达与肾细胞癌临床病理参数的关系

Livin、PTEN蛋白表达均与肾细胞癌临床分期及有无淋巴结转移有关(P均＜0.05)，与性别、年龄、肿瘤大小无关(P均＞0.05)，见表1。

表1 Livin、PTEN表达与肾细胞癌临床病理参数的关系

2.3 肾细胞癌中Livin和PTEN蛋白表达相关性

PTEN、Livin蛋白表达均阳性13例，均阴性19例，根据Spearman等级相关分析:Livin和PTEN表达呈显著负相关(γ = －0.326，P ＜0.05)，见表2。

表2 PTEN与Livin蛋白表达的相关性(例)

3 讨论

PTEN是具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，广泛存在于乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌等恶性肿瘤中，通过辅助蛋白、张力蛋白的协同调节，在肿瘤细胞浸润、血管发生及肿瘤转移中起到一定的抑制作用［1］。Weng等［2］发现PTEN通过对细胞周期和细胞生存的负性调节抑制细胞生长，在细胞信号转导和凋亡中发挥重要作用。本研究结果显示:PTEN蛋白在肾癌中的表达显著低于正常肾组织，且与肾癌病理分级、临床分期和淋巴结转移等显著相关，推测PTEN可能起到抑制肿瘤发生、发展的作用。Kim等［3］研究亦发现，PTEN的阳性表达缺失与肾癌患者的不良预后显著相关。

Livin是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)的新成员，特异性地分布于多种肿瘤组织，如黑色素瘤、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、淋巴瘤以及肺癌等。Livin抑制肿瘤细胞凋亡主要有以下几个通路:①抑制天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)途径:Kasof等［4］研究表明，Livin能够直接抑制 Caspase 3、7、9等的酶水解作用，从而抑制细胞凋亡;②激活TAK1/JNK1信号传导途径:livin通过选择性激活由TAB1/TAK1介导的JNK1信号传导途径，明显抑制由TNF-a和ICE介导的凋亡［5］;③诱导 NF-kB激活 Akt(丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶)途径，钙离子结合蛋白等方式发挥抗凋亡作用。本研究结果显示:正常肾组织不表达Livin，而44例肾细胞癌组织中Livin阳性表达率为47.7%，差异有统计学意义，表明Livin可能和肾细胞癌的发生有关;且随临床分期的增高，表达逐渐增高，差异有统计学意义，提示Livin与肿瘤浸润深度有关，对肾细胞癌的发展起一定的作用，其阳性表达可作为肿瘤侵袭能力强的指标之一;但不同分化程度的肾细胞癌组织中Livin表达率差异无统计学意义，推测这可能与样本量相对较少和采用定性检测等有关，如加大样本量及采用定量检测方法，可能会得到有统计学意义的结果。Gazzaniga等［6］研究表明，Livin表达较高的肿瘤患者易复发，常提示预后不良。国内杨春明等［7］研究表明，Livin的异常阳性表达与肾癌的不良预后显著相关，可作为判断肾癌预后的标志之一。本研究亦显示:PTEN与Livin在肾细胞癌组织中的表达呈显著负相关性，PTEN表达缺失可直接或间接引起Livin的异常高表达，减少细胞的凋亡，从而促进肿瘤的发生、发展及恶性增殖。但肿瘤的发生是多基因共同作用的结果，如PTEN、Livin基因表达的调控，与其他癌基因，抑癌基因与凋亡抑制基因的联系还有待深入研究。

综上所述，PTEN、Livin在肾细胞癌的发生、发展中具有一定的作用，且与肾细胞癌的发展和淋巴结转移密切相关，可作为评价肾细胞癌发展和预后的重要的生物学指标，可能成为肿瘤基因治疗的新靶点。

［1］Keniry M，Parsons R.The role of PTEN signaling perturbations in cancer and in targeted therapy〔J〕.Onco，2008，27(41):5477.

［2］Weng L，Brown J，Eng C.PTEN induces apoptosis and cell cycle arrest through phosphoinositol-3-kinase/Akt-dependent and-independent pathways〔J〕.Hum Mol Genet，2001，10(3):237.

［3］Kim HL，Seligson D，Xueli L，et al.Using protein expressions to predict survival in clear cell renal carcinomar〔J〕.Cli Can Res，2004，10(11):5464.

［4］Kasof GM，Gomes BC.Livin，a novel inhibitor of apoptosis

protein family member〔J〕.Biol Chem，2001，276(5):3238.

［5］Sanna MG，da Silva Correia J，Ducrey O，et al.IAP suppression of apoptosls involves distinct mechanisms:the TAK1/JNK1 signaling cascade and caspase inhibition〔J〕.Mol Cell Biol，2002，22(6):1754.

［6］Gazzaniga P，Gradilone A，Giuliani L，et al.Expression and prognostic significance of Livin，Surviving and other apoptosis—related genes in the progression of superficial bladder cancer〔J〕.Ann 0nco，2003，14(1):85.

［7］杨春明，刘海波，孙志熙，等.凋亡抑制蛋白Livin在肾癌组织中的表达及临床意义〔J〕.中国医科大学学报，2009，38(4):289.