实验用兔弓形虫病血清学调查

朱楼英 方远书 余建国（浙江省金华市食品药品检验所 321000 金华职业技术学院）



实验用兔弓形虫病血清学调查

朱楼英①方远书①余建国②（①浙江省金华市食品药品检验所 321000 ②金华职业技术学院）

本试验通过免疫胶体金试纸对实验用50只兔血样进行检测，调查弓形虫病的感染情况，结果发现，弓形虫感染的阳性率为7%。

兔 弓形虫 血清学

弓形虫是一种专性细胞寄生性原虫，具有广泛的宿主群，并在世界范围内流行，引起人畜共患病[1]。爱滋病患者、移植用恶性肿瘤患者等免疫功能损伤或抑制者，弓形虫作为一种机会感染因子，可致患者死亡[2]。弓形虫病不但是医学上的一种重要疾病，更是影响人类优生优育的一个重要生物因子。怀孕妇女感染弓形虫，无论有无临床症状，均可使约50%左右携带者因垂直传播出现流产、死胎及胎儿先天性缺陷，在养殖上，弓形虫病也会造成重大损失[3]。

在临床工作中以病原诊断作为弓形虫病的诊断依据存在很大困难，故目前多采用免疫学诊断方法，敏感性高和特异性强的血清学检测方法，能够准确地检测出阳性兔和评定兔群的感染率，但常用的IHA及ELISA等方法操作烦琐[4]，只停留在实验室阶段，对基层的实验动物中心弓形虫病的检测带来诸多障碍。本研究制备的试纸条，可用于快速简便的诊断，以弥补基层检验设备的缺乏和技术力量的不足。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验血清 来自某实验动物中心的实验用兔。随机选取50只体重接近的实验用兔，先对采血部位进行消毒，用1次性注射器采血2ml于离心管中，室温静置，待血清分离或37℃1h后，30000r/min离心5min。移取上层血清至另一离心管中，编号，作为待检血清，4℃冰箱中保存备用。

1.1.2 试验仪器 针头、离心机、微量加样器、弓形虫试纸条等由金华职业技术学院动物医学研究所提供。

1.2 试验方法

1.2.1 IHA(反向间接血凝)法 反应在96孔V型微量有机玻璃板上进行，每块反应板设阴性血清、阳性血清、稀释液对照孔，每孔加稀释液25uL。在1~10排的第1孔分别加入1~10号待检血清25uL，在第11排的第1孔加入阳性对照血清25uL，并分别倍比稀释至第8孔。在第12排的第1孔加入阴性对照血清25uL，并分别倍比稀释至第6孔，在第12排的第7~8孔做空白对照[5]。

冻干抗原按说明书要求稀释，4冰箱内静置24h后，将稀释抗原摇匀，每孔加25uL，然后将反应板置于微量振荡器上震荡30s，于37温箱中作用1h。在阳性对照血清滴度不低于1:1024(第5孔)、阴性对照血清除第1孔允许存在前带现象(+)外，其余各孔均为(-)，稀释液对照孔为(-)的前提下，对被检血清进行判定。被检血清抗体滴度达到或超过1:64判为阳性。

1.2.2 试纸条法 以稀释液将待检血清按(1:5)稀释。检测时，从加样孔滴加2~3滴待检血清稀释液，同时，以标准阳性血清和阴性血清设阳性对照和阴性对照。2~5min内观察结果。10min后观察结果无效。判定标准：检测区(T带)、质控区(C带)均出现红色为阳性；仅质控区(C带)，出现红色为阴性；T、C均未出现红色则试纸无效。

2 结果

IHA(反向间接血凝)法检测结果及试纸条法检测结果(见表1)。

表1 血清学检测结果

检测结果提示，试验抽取的50只兔子样品中，弓形虫感染的阳性率约7%，且试纸条检测的灵敏度高于IHA，表明用于快速检测的试纸条的作用是可以确认的。

3 讨论与小结

（1）本次试验检出实验用兔的弓形虫感染率约7%，略低于周永华等报道的8.7%的结果[3]，这可能与该动物中心良好的屏障系统与严格的生物安全控制措施有关，但阳性兔的存在，依然给实验用兔的疫病控制带来诸多障碍。（2）本次检测没有考虑抗体的滴度分布，也没有进行病原分离，病原检测有利于呈现抗体检测阳性而抗原检测阴性的状态，依此判断虫体在体内的发育阶段及数量分布。（3）弓形虫血清学检测方法是多样的，免疫层析技术是新近发展起来的体外诊断技术。具有简单快速，操作简便，无需特殊设备等优点。本次试验中应用的弓形虫快速检测试纸条的性能稳定，与传统方法符合率高，这对临床应用而言有着重要的作用，对实验动物屏障系统的完善和生物安全控制有着积极的意义，可以期待在将来发挥更加重要的作用。

[1] 崔君兆. 弓形虫病研究九十年[J]. 实用寄生虫病杂志, 2000, 8(2): 75-78.

[2] 陈昌源. 家养宠物与大群弓形虫感染情况的研究[J]. 中国人畜共患病杂志, 2001, 17(1): 76-77.

[3] 周永华, 沈林南, 吴菁等. 实验兔弓形虫感染情况调查[J]. 上海实验动物科学, 1998 (1): 20.

[4] 魏梅雄, 张述义. 上海市动物弓形虫病研究概况[J]. 中国兽医寄生虫病, 2001(9): 3.

[5] 张阳根. 免疫金银染色法检测弓形虫抗体[J]. 上海免疫学杂志. 1996(16). 50.

项目来源：浙江省实验动物科技项目(2009F800013)

S852.72+9

A

1007-1733(2011)08-0064-02

（2011–06–02）