枯草芽孢杆菌M6和木霉10对番茄灰霉病的防治效果研究

2011-11-12徐升运赵文娟马齐张强任平秦涛

长江蔬菜 2011年24期

徐升运，赵文娟，马齐，张强，任平，秦涛

（1.陕西省科学院酶工程研究所，西安，710600；2.陕西省酶工程技术中心）

番茄灰霉病是一种世界性的重要病害，且为害较重，番茄灰霉病的防治已成为保证生产发展的关键性措施[1]。目前防治番茄灰霉病主要采用化学药剂，如苯并咪唑类的多菌灵、甲基硫菌灵，二甲酰亚胺类的腐霉利、异菌脲以及N-苯氨基甲酸酯类的乙霉威[2]。长期、连续使用化学药剂使病原菌逐渐产生了抗药性，影响防治效果，同时易造成农药残留、环境污染等问题[3，4]。据张传清等[5]报道，设施蔬菜灰霉病菌对百菌清、多菌灵、腐霉利、异菌脲、乙霉威、嘧霉胺均产生不同程度的抗药性。因此，利用拮抗菌防治番茄灰霉病日益受到国内外研究者的重视，国内在这一方面陆续有研究报道，以枯草芽孢杆菌为主，也有用木霉防治番茄灰霉病的研究[6]。但单独用细菌或真菌防治番茄灰霉病容易受到病菌的变异影响，降低防效，而应用拮抗细菌和拮抗真菌联合防治番茄灰霉病，则可有效提高防治效果。

本研究以本课题组分离出的1株木霉10（Trichoderma10）和1株枯草芽孢杆菌M6（BacillussubtilisM6）菌株的发酵液，及2种菌的发酵液混合后制得的复合菌剂W为材料，对番茄灰霉病进行了防治试验。

1 材料与方法

1.1 供试材料

木霉10菌株与枯草芽孢杆菌M6菌株由陕西省科学院酶工程研究所从土壤中分离保存。有效活菌数，枯草芽孢杆菌 M6 为 1.0×1010亿个/mL，木霉 10 为1.0×1010亿个/mL，将 2 种菌的发酵液按 1∶1 比例配成复合菌剂W，自行生产。对照药剂为75%百菌清可湿性粉剂。

番茄灰霉病菌灰葡萄孢菌MB1从临潼地区的番茄病果上分离、纯化得到。

番茄品种毛粉802由西安市蔬菜所培育。

试验地点在西安市临潼区任留乡的无公害蔬菜示范基地。试验期间大棚温度15～25℃。

1.2 番茄灰霉病的抑制试验设计

将灰葡萄孢菌MB1配制成浓度为1.0×109cfu/mL菌液，并制成含菌平板。将木霉10、枯草芽孢杆菌M6和混合菌剂W分别接种在平板上，于25℃培养5 d后分别测定抑菌圈直径，并计算抑菌率。每个处理重复4次。

1.3 复合菌剂W防治番茄灰霉病的最佳浓度的研究

吸取混合菌剂W培养液2 mL至18 mL灭菌后的PDA培养基中，制成不同浓度的含菌平板，以加入2 mL无菌水的处理为对照。

将制备好的灰葡萄孢菌MB1菌盘移植到上述平板中，每皿1块，4次重复，倒置，于25℃培养24 h，采用十字交叉法测量菌落直径，取平均值，计算抑菌率。

1.4 田间防治试验

①田间小区设计田间试验中将复合菌剂W稀释成800倍液、1 000倍液、2 000倍液使用，喷施2次，每次药液用量30L/667m2；对照药剂75%百菌清可湿性粉剂800倍液，用量170 g/667 m2，分2次喷施。以清水处理为空白对照。共5个处理，4次重复，每小区面积为12 m2。小区间及试验田间周围设保护行。

②施药时间于2010年4月15日第1次施药（发病初期），2010年5月10日第2次施药。

③病情调查方法分别在喷药前1 d和喷药后1周调查叶片上的病害严重程度，计算病情指数和防治效果。每小区在对角线上取5点，每点调查2株，调查各植株全部叶片。

分级方法，0级：无病斑；1级：病斑面积占整个叶面积5%以下；3级：病斑面积占整个叶面积6%～10%；5级：病斑面积占整个叶面积11%～20%；7级：病斑面积占整个叶面积21%～40%；9级：病斑面积占整个叶面积40%以上[7]。

计算病情指数，病情指数=100×∑（各级病叶数×相对级数值）/（调查总数×9），防治效果（%）=[1-（CK0×PT1/CK1×PT0）]×100%。

其中，CK0为空白对照小区施药前病情指数，CK1为空白对照小区施药后病情指数，PT0为药剂处理小区施药前病情指数，PT1为药剂处理小区施药后病情指数。

2 结果和分析

2.1 木霉10、枯草芽孢杆菌M6及复合菌剂W对番茄灰霉病的抑制作用结果

平板培养结果表明，木霉10和枯草芽孢杆菌M6对灰葡萄孢菌MB1的抑菌圈平均直径分别为15.04 mm 和 23.26 mm，抑菌率分别为18.3%和26.8%。而复合菌剂W对灰葡萄孢菌MB1的抑菌圈平均直径为 32.72 mm，抑菌率为 62.2%。

研究发现，木霉10和枯草芽孢杆菌M6单独使用时均对番茄灰霉病具有一定的防效，且枯草芽孢杆菌M6的抑制效果明显比木霉10好，即其防治效果更好。

另外，试验发现2种菌混合使用时，抑菌率较单一菌剂显著提高，对番茄灰霉病防治效果更好。这可能是因为2种菌协同作用，从不同的防治机理方面抑制了番茄灰霉病的发展。

2.2 复合菌剂W防治番茄灰霉病的最佳浓度

通过表1可以看出，不同浓度的复合菌剂W对灰霉病菌菌丝的生长均有抑制作用，当浓度大于105cfu/mL时，均对灰霉病菌具有很强的抑制作用，抑制率均达到了100%，但当浓度为104cfu/mL时，对灰霉病菌抑制作用明显下降，不能达到防治目的。因此，复合菌剂W的浓度应不低于105cfu/mL。

2.3 田间防治试验结果

通过表2可以看出，田间试验中，复合菌剂W对番茄灰霉病具有较好的防治作用，并且防效随浓度的增大而提高，以800倍液的防治效果最佳。以复合菌剂W 800倍液和1 000倍液每7 d喷1次，连续喷 2次，防效分别可达 80.75%和 68.30%，75%百菌清液800倍液防效为69.84%，复合菌剂W 800倍液防效显著优于75%百菌清800倍液的，而复合菌剂W 1 000倍液防效与75%百菌清800倍液差异不显著。当复合菌剂W的稀释倍数大于2 000时，对番茄灰霉病的防治效果明显较差。

3 结论与讨论

木霉10和枯草芽孢杆菌M6对灰葡萄孢菌MB1的抑菌率分别为18.3%和26.8%，而复合菌剂W对灰葡萄孢菌MB1的抑菌率为62.2%，2种菌剂混合使用效果更佳，这可能是因为2种菌在防治时产生协同作用。

复合菌剂W对番茄灰霉病具有良好的防治效果，复合菌剂W 800倍液防效达到80.75%，防效显著优于75%百菌清液800倍液；复合菌剂W 1 000倍液防效与75%百菌清液800倍液相当；复合菌剂W稀释倍数大于2 000时防效明显下降。因此，复合菌剂W 800倍液和1 000倍液完全可代替化学药剂，其中以800倍液的效果更好，可减小农残和环境污染。