丹参有效成分提取的研究

李向军，范文成，李奉勤，韩月芝，叶晓红

（石家庄以岭药业股份有限公司，河北 石家庄 050035）

工艺

丹参有效成分提取的研究

李向军，范文成*，李奉勤，韩月芝，叶晓红

（石家庄以岭药业股份有限公司，河北 石家庄 050035）

目的：确定丹参药材的最佳提取工艺。方法：以丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量转移率为综合考察指标，用正交设计试验对丹参提取工艺条件进行优选。结果：丹参中脂溶性成分的最佳提取工艺为将丹参饮片用10倍量95%乙醇提取2 h，提取液在40℃浓缩至规定量；丹参中水溶性成分的最佳提取工艺为用8倍量50%乙醇提取3次，第1次2 h，其余2次各1 h，将3次提取液在40℃浓缩至规定量；对两种工艺进行优化，结合实际生产得出最佳提取工艺为先用95%乙醇8倍量提取2 h，残渣加8倍量50%乙醇提取2次，第1次2 h，第2次1 h，提取液分别在40℃浓缩至规定密度。结论：此工艺不仅能够充分提取丹参中的有效成分，减少在提取过程中有效成分的破坏，而且可以更好地发挥药物疗效，保证质量。

丹参；提取工艺；正交设计；丹参酮ⅡA；丹酚酸B

丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根及根茎。具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈的功能。用于胸痹心痛，脘腹胁痛，癥瘕积聚，热痹疼痛，心烦不眠，月经不调，痛经经闭，疮疡肿痛［1］。丹参的化学成分主要含水溶性的酚酸类成分丹酚酸A、B、C、D、E，丹参素，原儿茶醛等，以及脂溶性的菲醌类成分丹参酮ⅡA、丹参酮B、丹参酮、隐丹参酮等，脂溶性成分具有抗菌、抗炎，改善血液循环，保护心脏以及抗肿瘤等作用；水溶性成分则具有抗氧化、抗凝抗血栓、抗心肌缺血及调血脂等作用［2］，所以丹参的有效成分是两类成分，而非一类成分起作用。然而，有文献报道［3］，大部分含丹参药材的制剂用单一提取方法，控制其中的一种成分，不能客观真实反映药品质量。本文通过优选丹参的提取工艺，充分地将丹参中水、脂两种成分提取出来，确保药品疗效。

1 仪器与药材

LC-10ATvp高效液相色谱仪（日本岛津公司），Rotavapor R-215旋转蒸发器（香港步骐有限公司），AG285电子天平（上海梅特勒－托利多仪器有限公司）；丹参酮ⅡA对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110766-200518），丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111562-200908），化学试剂：甲醇为色谱纯，其余为分析纯；丹参药材采购于安国中药材市场，经过本公司质控部王振江鉴定符合 《中国药典》2010版一部丹参规定。

2 方法与结果

2.1 正交试验设计

2.1.1 丹参提取的正交试验设计 根据影响丹参的提取因素，选取乙醇浓度（A）、提取次数（B）、乙醇用量（C）、浓缩温度（D）作为考察因素，每个因素设计3个水平，以丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量转移率为考察指标，设计 L9（34）正交试验，见表1。

表1 因素水平表

2.1.2 丹参的提取 取丹参药材18份，每份50 g，按试验设计进行提取，最后浓缩成相对密度为1.10的浓缩膏，每个试验平行2次，取平均值。

2.2 方法

2.2.1 丹参酮ⅡA含量测定方法［1］

2.2.1.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇 －水（75∶25）为流动相；检测波长为270 nm。理论塔板数按丹参酮IIA峰计算应不低于2 000。

2.2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮IIA对照品10 mg，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1 mL中含丹参酮IIA16μg）。

2.2.1.3 供试品溶液的制备 取本品适量（约相当于原药材0.3 g），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声15min，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.1.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算，即得（做平行样取平均值）。

2.2.2 丹酚酸B含量测定方法［1］

2.2.2.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－乙腈－甲酸－水（30∶10∶1∶59）为流动相；检测波长为286 nm。理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于2 000。

2.2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇制成每1 mL中含0.14 mg的溶液，即得。

2.2.2.3 供试品溶液的制备 取本品适量（约相当于原药材0.2 g），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，称定重量，超声15 min，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算即得（做平行样取平均值）。

2.2.3 结果 按 《中国药典》2010版一部丹参含量测定方法测定丹参原药材含量，以丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量转移率为评价指标，结果见表2，方差分析见表3、表4。

由表2直观分析可知，各因素对丹参酮ⅡA影响程度依次为A＞D＞C＞B，各因素对丹酚酸B影响程度依次为A＞D＞B＞C。通过表3可知，因素A对丹参酮ⅡA转移率影响极其显著，因素C、D影响不大，其最佳工艺为A1B3C3D3；由表4可知，因素A对丹酚酸B转移率影响也非常显著，因素B、D有一定影响，其最佳工艺为A2B1C2D3。

由此可见，丹参酮ⅡA用水提取，转移率非常低，用95%乙醇转移率可达90%以上；而丹酚酸B用95%乙醇几乎提不出来，在50%乙醇中转移率能达到30%；根据二者的性质，再结合大生产实际，最终将丹参提取工艺确定为：先用95%乙醇8倍量提取2 h，残渣加8倍量50%乙醇提取2次，第1次2 h，第2次1 h，提取液分别在40℃浓缩至规定密度。

表2 正交试验及结果

表3 丹参酮ⅡA方差分析表

表4 丹酚酸B方差分析表

2.3 验证试验

按上述已确定的工艺条件安排5批验证试验，结果见表5。

从验证结果可以看出：丹参酮ⅡA转移率均达到了90%以上，提取比较完全；丹酚酸B在50%乙醇溶液中转移率达到了30%。

表5 丹参有效成分转移率验证试验/%

3 讨论

通过正交试验对丹参药材提取工艺进行了研究，以脂溶性成分（丹参酮ⅡA）和水溶性成分（丹酚酸B）的含量为综合考察指标，确定了丹参最佳提取工艺为：先用95%乙醇8倍量提取2 h，残渣加8倍量50%乙醇提取2次，第1次2 h，第2次1 h，提取液分别在40℃浓缩至规定密度。

在提取丹参中丹参酮ⅡA和丹酚酸B时，溶剂浓度对结果影响非常显著，浓缩温度也有一定影响，大生产中一定要严格控制，否则，可能造成丹参酮IIA和丹酚酸B提取不完全或破坏。

丹参水溶性成分丹酚酸B含量较高，其药理作用与丹参素、原儿茶醛等相似，而活性更强［3］，但稳定性较差，故在制剂中控制丹酚酸的含量比控制原儿茶醛更有意义。

中药制剂成分复杂，其治疗作用是通过多种成分综合起作用，对于性质不同成分的提取，如果仅以一种成分作为控制指标，势必会影响药物的疗效。所以，只有选择合适的工艺，将药物有效成分全部提取，才能充分发挥治疗效果。

［1］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：70-71.

［2］杜冠华，张均田.丹参现代研究概况与进展（续一）［J］.医药导报，2004，23（6）：355.

［3］杜冠华，张均田.丹酚酸A对小鼠脑缺血再灌注致学习记忆功能障碍的改善作用及作用机制［J］.药学学报，1995，30（3）：184.

Study on Extraction Active Ingredients of Salvia Miltiorrhiza Bge.

LIXiang-jun，FANWen-cheng，LIFeng-qin，HAN Yue-zhi，YE Xiao-hong
（Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co．Ltd．，Shijiazhuang 050035，China）

Objective：To determine the best extraction process forSalvia miltiorrhizaBge..Methods：The content shift rates of tanshinone IIAand salvianolic acid B，as the evaluating indictors in orthogonal experimental design，were applied to value the process.Results：The optimum extraction process for the fat－soluble ingredientswas with 10 times 95%ethanol for 2 hours，and the extraction was enriched at40℃；the optimum extraction process for water-soluble ingredientswaswith 8 times50%ethanol for three times，2 hours for the first，and 1 hour for the second and third respectively，then the solution was concentrated to the requirement at40℃.According to the need ofmanufacture，the optimum extraction process was determined with 8 times 95%ethanol for 2 hours，and，the residue was with 8 times 50%ethanol for two times with 2 and 1 hour respectively.The extractions were concentrated at 40℃.Conclusion：The active ingredientswere extracted fully with this process and were not damaged，for assure quality.

Salvia miltiorrhizaBge.；Extraction process；Orthogonal design；TanshinoneⅡA；Salvianolic acid B

*范文成，Tel：（0311）85901723，E-mail：fwwc163＠yahoo.com.cn

2010-11-24）