牛蒡子水解后牛蒡苷元的含量测定△

侯蔷，窦德强，康廷国

（辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116000）

牛蒡子水解后牛蒡苷元的含量测定△

侯蔷，窦德强*，康廷国

（辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116000）

目的：建立牛蒡子药材水解后药材中牛蒡苷元的含量测定方法。方法：采用HPLC，以牛蒡苷元的含量测定为指标，测定牛蒡子药材水解后药材中牛蒡苷元的含量。Agilent1100液相色谱系统四元泵，色谱柱：Phenomsil PC-8025，（4.6mm×250 mm，5μm），流动相：甲醇－水（50∶55）；检测波长：280 nm。结果：牛蒡苷元的线性方程Y＝905.74 X－90.113，r＝0.999 3，线性范围0.81～4.86μg；平均回收率为100.09%，RSD＝2.244%。结论：采用HPLC含量测定的方法，精密度、重现性及稳定性皆良好，方法简便、易行，可作为牛蒡苷元含量的测定方法。

牛蒡苷元；HPLC；含量测定

牛蒡子含有多种生物活性成分，具有抗肿瘤、抗糖尿病、增强免疫系统活性等多种药理作用。其中以木脂素类化合物为主，主要成分是牛蒡苷（含量为5%左右）与牛蒡苷元（含量为0.5%左右）［1］。本文根据专利——一种牛蒡子苷元的制备方法［2］，将牛蒡子药材水解，将含量较多的牛蒡苷脱糖转化为牛蒡苷元，将牛蒡苷元的含量提高到3%左右，对转化后的药材进行牛蒡苷元的含量测定，该法简便，重现性好，可用作牛蒡子水解转化的定量分析，为其质量控制提供理论依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1100 series高效液相色谱仪；FA-1004电子天平（上海精科天平厂）；KQ-250DE型数控超声微波清洗器。

1.2 试药

牛蒡子药材分别购自沈阳、成都、本溪、吉林，经辽宁中医药大学康廷国教授鉴定为菊科植物牛蒡的成熟果实。

牛蒡苷元（自制，纯度为99.698%）。色谱甲醇（天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20091002），水为三级水。

2 方法与结果

2.1 牛蒡苷元对照品溶液制备

精密称取牛蒡苷元对照品适量，用甲醇制成每1 mL含0.324 mg的溶液，即得。

2.2 供试品溶液制备

2.2.1 供试品溶液提取时间确定 精密称取已水解干燥后的粗粉（过60目筛）各0.5 g，分别加入40 mL甲醇，分别超声20，30，40 min（40 MHz），将提取后溶液定容至50 mL量瓶，摇匀，滤过，取续滤液，即得，分别进HPLC以测定含量。得到牛蒡苷元含量分别为3.07%，3.10%，3.11%。30 min与40 min无明显差别，故将提取时间定为30 min。

2.2.2 供试品溶液制备 精密称取不同地区的牛蒡子，按照专利，将牛蒡子水解，取水解干燥后的粗粉（过60目筛），各0.5 g，分别加入40 mL甲醇，超声30 min（40 MHz），将提取后溶液定容至50 mL量瓶，摇匀，滤过，取续滤液，即得，待用。

2.3 色谱条件、色谱行为与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱：Phenomsil PC-8025（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相：甲醇－水（50∶55）；检测波长：280 nm；流速：1.0 mL·min－1，柱温：30℃。分别按照供试品及对照品溶液制备项下方法制备供试品及对照品溶液，按上述色谱条件，各进样10μL，根据色谱行为确定牛蒡苷元的峰。按牛蒡苷元峰计算，柱理论塔板数大于1 500。

2.4 线性关系考察

精密吸取牛蒡苷元对照品溶液（0.324 mg·mL－1）各2.5，5，7.5，10，12.5，15μL，分别注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件进样，测定峰面积。以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制牛蒡苷元的标准曲线。牛蒡苷元的回归方程为：Y＝905.74X－90.113，r＝0.999 3，线性范围 0.81～4.86μg。

2.5 精密度试验

精密吸取同一份供试品溶液，连续进样5次，每次10μL，牛蒡苷元的平均含量为3.22%，RSD＝1.15%，说明精密度试验符合有关规定。

2.6 重复性试验

精密称取本溪牛蒡子水解粗粉各0.5 g，按样品测定方法，进行6次平行试验，结果牛蒡苷元平均含量为3.18%，RSD＝1.24%，说明重复性试验符合有关规定。

2.7 稳定性试验

在室温条件下，精密吸取同一样品溶液，按样品测定方法在0，1，2，4，6 h进样，测定峰面积，牛蒡苷元的RSD＝2.67%，说明样品溶液在6 h内稳定。

2.8 回收率试验

精密称取已知含量的样品（牛蒡苷元含量为3.053%）各6份，分别精密加入牛蒡苷元对照品，按样品测定方法进行测定，计算回收率，结果见表1。

表1 牛蒡苷元回收率试验

2.9 样品测定

吸取制备好的供试品溶液，进样，按上述色谱条件测定，以标准曲线外标法计算水解后牛蒡苷元的含量，结果沈阳、本溪、成都、吉林4个产地的牛蒡苷元含量分别为3.36%，3.12%，2.57%，3.11%。色谱图见图1～3。

图1 牛蒡子药材HPLC图

图2 牛蒡子药材水解后HPLC图

图3 牛蒡苷元对照品HPLC图

3 讨论

以甲醇为溶剂，分别超声处理20，30，40 min，然后分别测定各供试溶液中牛蒡苷元的含量，结果40 min的提取量较30 min无差别，故将提取时间定为30 min。

本文采用专利转化牛蒡苷元，将牛蒡苷元的含量在生药材中提高到3%左右，通过HPLC对水解后牛蒡苷元含量进行测定，方法重现性好，回收率高，准确度高。

［1］米靖宇，汪志超，宋纯清.高效液相色谱法测定不同采购地牛蒡子中牛蒡子苷和苷元的含量［J］.时珍国医国药，2004，15（11）：737-739.

［2］辽宁中医药大学.一种牛蒡子苷元的制备方法：中国，200910220557.3（申请号）［P］.审核中.

Determ ination of Arctigenin Hydrolyzed from Arctii Fructus

HOU Qiang，DOU De-qiang，KANG Ting-guo
（College of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116000，China）

Objective：To establish a HPLC method for determination of the content of arctigenin hydrolyzed from Arctii Fructus.Methods：The contentof arctigenin was determined by HPLC.The conditions for HPLC：Phenomsil PC－8025 column，eluting with methano1－water，detection wavelength at280 nm.Results：The linear equation wasY＝905.74X－90.113，r＝0.999 3.The average recovery was 100.09%，RSD ＝2.24%.Conclusion：The HPLC method is rapid and accurate and can be used for the quality control of the hydrolysis of Arctii Fructus.

Arctigenin；HPLC；Content determination

国家重大新药创制计划（2009ZX09103-423），辽宁省教育厅优秀人才支持计划——中药及天然药物活性成分及新药开发研究（2008RC34）

*窦德强，E-mail：doudeqiang2003＠yahoo.com.cn

2010-04-01）