栀子金花丸中金银花的显微定量研究

陈聪慧，康廷国

（辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600）

栀子金花丸中金银花的显微定量研究

陈聪慧，康廷国*

（辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600）

目的：采用均匀设计方法优选金银花显微定量法的优化条件，对中成药栀子金花丸中的金银花进行含量测定。方法：以被测物自身代替参比物，采用容量分析法配合显微定量法测定金银花的含量。结果：金银花含量大多符合 《中国药典》规定的标准。结论：用此方法测定金银花的含量简单、快捷、可靠，可为栀子金花丸的质量控制提供依据。

栀子金花丸；金银花；均匀设计法；显微定量法

栀子金花丸为苦寒之药，用于肺胃热盛，口舌生疮，牙龈肿痛，目赤眩晕，咽喉肿痛。由栀子、金银花、黄芩、黄柏、大黄、黄连、知母、天花粉8味中药组成。其中金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花，主产于山东、河南，全国大部地区均产，自古被誉为清热解毒的良药。它性寒，味甘，具有清热解毒，疏散风热的功能。用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热[1]。金银花粉末中厚壁非腺毛，单细胞，直径14～37μm，表面有疣状突起。金银花粉末中的非腺毛的显微特征明显，不仅具有生物学稳定的特性，而且数量众多，易于观察计数[2]。本实验采用容量分析方法[3]测定了金银花中非腺毛的显微特征常数，由于金银花的非腺毛在栀子金花丸的显微特征中具有专属性，因此采用显微定量法对栀子金花丸中的金银花进行百分含量的测定，从而为栀子金花丸的质量控制提供了依据[4-6]。笔者采用显微定量法，将显微摄影、计算机图像处理和数据分析相结合，对栀子金花丸中的金银花含量进行测定，结果表明此法方便、快捷、耗资少。

1 仪器与材料

1.1 仪器

OLYMPUS BX-50生物显微镜；OLYMPUSDP-10显微镜数码相机；岛津 AY220电子分析天平；Agilent1100高效液相色谱仪；微量移液器（WKY型－球晶生化试剂仪器有限公司）；FW80高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2 试剂

栀子金花丸（北京同仁堂），金银花，经辽宁中医药大学药学院中药鉴定教研室翟延君教授鉴定为正品。水合氯醛，稀甘油。

2 方法与结果

2.1 金银花中非腺毛显微特征常数测定优化条件选择

影响样品混悬效果的因素主要有样品重量、样品的粉碎粒度、混悬剂的用量。考虑到各因素的考察水平有所不同，故本实验采用3因素6水平均匀设计法考察显微定量法的优化条件[7]，具体实验设计见表1。

表1 金银花中非腺毛显微特征常数测定均匀设计方案 U6（63）

取金银花样品粉碎，分别过80目和100目筛。精密稳定50，60，70，80，90，100 mg共6份，用水合氯醛试液多次水飞，移入25 mL量瓶中，按均匀设计表加入相应甘油量，最后用水合氯醛液定容。充分摇匀后，精密吸取0.02 mL进行显微装片，每份溶液平行装片50张，于显微镜下观察非腺毛并计数。将所得的结果随机化分为5组，分别计算5组平均值的RSD。以每份样品平均值的RSD为考察指标，结果见表2。

表2 金银花中非腺毛显微特征常数测定均匀设计实验结果

通过SPSS17.0统计软件得出均匀设计结果：Y＝10.411－0.091X1，r＝0.931，F＝53.562，Ymin＝1.311（即1.31%），Y为 RSD（%），X1为样品重量，X2为粉碎粒度，X3为加入甘油量。

X1项为负号，X1应取最大值；由于X2、X3没有进入方程，说明X2、X3对实验影响不大，可根据实际情况选择条件。

取优化条件为样品称样量100 mg，粉碎过100目筛，加入甘油10 mL。对优化结果的验证实验表明各份样品的变异系数均与优化条件给出的最小变异系数（1.73%）接近，说明由SPSS17.0统计软件给出的优化条件是科学、准确的，结果见表3。

表3 金银花中非腺毛显微特征常数测定均匀设计验证实验

2.2 对照样品金银花中非腺毛显微特征常数值测定

精密称定金银花药材粉末，按照均匀优化条件配制，水合氯醛多次水飞，分别定容于25 mL量瓶中，精密吸取20μL溶液，分别平行装片50张，观察非腺毛，计数，取平均值，按照公式1计算非腺毛显微特征常数值，结果见表4。

公式1：显微特征常数P＝（X×V）/（V′×W）

W－药材重量（mg，按干燥品计，V－定量药材混悬液总体积（mL），P－定量药材显微特征常数（个·mg－1），V′－盖玻片下药材混悬液体积（mL），X－每片盖玻片下药材显微特征数。

表4 各样品非腺毛显微特征常数测定结果

2.3 栀子金花丸中金银花的含量测定

将成药小心粉碎至完全过100目筛，在烘箱80℃干燥5 h。精密称定干燥后的栀子金花丸粉末600 mg，按实验方法定容至25 mL量瓶中，精密吸取0.02 mL装片，平行装50张片，记录非腺毛显微特征数，按照公式2计算金银花百分含量，结果见表5。

公式2：样品含量% ＝（X×V）/（V′×W×P）×100%

P－定量药材显微特征常数（个·mg－1），X－每片盖玻片下药材显微特征常数，V－定量药材混悬液总体积（mL），V′－盖玻片下药材混悬液体积（mL），W－药材重量（mg，按干燥品计）

表5 栀子金花丸中金银花的含量测定结果

3 讨论与结论

栀子金花丸中金银花的含量测定以金银花非腺毛为特征物计数，结果表明所选特征专属性强，该法简单可靠，对含有金银花的中成药质量控制有一定的推广使用价值。

本实验采用容量分析法测定金银花显微特征常数，定容和制片很关键，用微量移液器装片前枪头要润洗3次，吸取前要使混悬液均匀分布，以减少误差。盖盖玻片时要将载玻片上的溶液全部覆盖，避免外溢现象[8-9]。

金银花由于粉碎后过100目筛，有的非腺毛较完整，有的已破碎。观察时对完整的计为一个单位；对于破碎的非腺毛，按毛尖数计数。

本文采用均匀设计方法对金银花显微定量法的实验条件进行优化，首次对栀子金花丸中的金银花通过显微特征非腺毛做了定量分析，检测结果表明该产品中金银花含量符合 《中国药典》规定。建议《中国药典》在药材项下增加显微常数测定项目，丰富药材品质评价的内容；同时将含有这些药材（原粉入药）的中成药项下增加显微定量项目[10]。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：205-206.

[2]康廷国.中药鉴定学[M].北京：中国中医药出版社，2007：295.

[3]苑冬敏，栾晓静，康廷国，等.中药显微定量法的应用研究[J].辽宁中医杂志，2006，33（4）：459-460.

[4]姜清华，翟延君，王荣祥.羚羊清肺丸中羚羊角的显微定量研究[J].中药材，2004，27（2）：90-91.

[5]潘国良，柴清军.显微定量法鉴别人参与西洋参[J].中国药业，2002，11（7）：52.

[6]杨来秀，鞠爱华，陈桂卿.天麻丸中天麻的显微定量研究[J].内蒙古医学院学报，2000，22（1）：44-46.

[7]刘明芝，周仁郁.中医药统计学与软件应用[M].北京：中国中医药出版社，2006：312.

[8]栾晓静，苑冬敏，康廷国.五子衍宗丸中枸杞子的显微定量研究[J].辽宁中医杂志，2007，34（5）：646-647.

[9]苑冬敏，刘扬，栾晓静，等.黄柏的显微定量研究[J].中华中医药学刊，2007，25（5）：964-966.

[10]刘歆韵，刘丽，李斌，等.白芍显微特征常数与化学成分相关性研究[J].中药材，2010，33（4）：559-561.

Study on Honeysuckle Contents in Zhizi Jinhua Pills by the Microscopic Quantitative Method

CHEN Cong-hui，KANG Ting-guo

（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian116600，China）

Objective：Determine the content of honeysuckle in Chinesemedicine zhizi jinhua pills，using the optimal conditions of the microscopic quantitative method of honeysuckle by uniform design.Methods：Using the volumetric analysiswith themicroscopic quantitativemethod determinate the content of honeysuckle，measured object itself instead of the reference material.Results：The honeysuckle content reach the standard of Chinese Pharmacopoiea.Conclusion：Themethod determining the contentof honeysuckle is simple，quick，reliable for quality control of zhizi jinhua pills.

Zhizi jinhua pills；Honeysuckle；Microscopic quantitativemethod

*康廷国，E-mail：kangtg＠lnutcm.edu.cn

2011-05-03）