薤白平喘作用有效部位的筛选研究

谭中英，张锦红，刘瑀曦，潘丽洪，张予阳，刘晓秋

（沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016）

药理

薤白平喘作用有效部位的筛选研究

谭中英，张锦红，刘瑀曦，潘丽洪，张予阳，刘晓秋*

（沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016）

目的：对薤白平喘作用的有效部位进行筛选。方法：采用醇沉法及大孔树脂分离法进行初步分离得到水提醇沉淀、含氮化合物、皂苷及皂苷元部位，采用组胺致离体豚鼠气管片收缩模型进行药效学筛选。结果：薤白皂苷部位具有显著的平喘作用，其舒张率达到 （178.76±11.07）%。结论：皂苷类成分是薤白平喘作用的有效部位。

薤白；平喘；有效部位

薤白为百合科植物小根蒜AlliummacrostemonBge.或薤Allium chinenseG.Don的干燥鳞茎。具有通阳散结，行气导滞之功效，用于胸痹心痛，脘腹痞满胀痛，泻痢后重[1]。化学成分主要为挥发油、含氮化合物、多糖及皂苷类[2]。药理研究表明薤白具有平喘、抑制血小板聚集、抑菌、耐缺氧等作用[3-5]，临床多用于治疗冠心病[6]、心绞痛、肺炎、肺气肿、支气管哮喘等病。作者在研究复方薤白制剂平喘作用时发现薤白起主要的作用，而目前尚无关于薤白平喘作用的有效部位研究的报道。因此，本文采用组胺导致离体豚鼠气管片收缩模型对薤白中的水提醇沉淀、含氮化合物、皂苷及皂苷元各部位进行了平喘试验的研究，为薤白进一步开发利用提供实验依据。

1 材料

1.1 药材

薤白药材经沈阳药科大学中药分析教研室袁久志副教授鉴定为百合科植物小根蒜AlliummacrostemonBge.的干燥鳞茎，存放于沈阳药科大学中药分析室。

1.2 试剂与仪器

无水乙醇、丙酮、乙醚（天津博迪化工有限公司）；磷酸组胺溶液（Sigma公司试剂，批号：A6014）；D101大孔树脂（河北沧州宝恩公司）。GCZN-08粉碎机 [西化仪（北京）科技有限公司]，RE52CS型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），SHZ-D（Ⅲ）型循环水式真空泵（巩义市英峪予华水泵厂），DK-98-Ⅰ电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司），RM-6240多道生理信号采集系统（成都仪器有限公司），S-501-A型超级恒温水浴（辽阳博大科学仪器有限公司），肌肉张力换能器（成都仪器厂），FA1004电子分析天平（上海精科天平厂），微量移液器（上海求精玻璃仪器厂）。

1.3 动物

Hartley豚鼠，雌雄各半，300～500 g，由沈阳药科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（辽）-2009-0002。

2 方法

2.1 样品的制备

2.1.1 总提物的制备 取样品适量，粉碎，加70%乙醇8倍量，加热回流提取1.5 h，滤过，如上重复提取2次，合并滤液，滤液减压浓缩，60℃干燥，备用（收率为42%）。

2.1.2 水提醇沉淀部位的制备 取样品适量，粉碎，加水10倍量，加热回流提取1 h，滤过，如上重复提取1次，合并滤液，滤液减压浓缩至浓度为0.5 g生药·mL－1，缓缓加入乙醇使醇浓度达到70%，静置12 h，滤过，滤渣依次用无水乙醇、乙醚进行洗涤，干燥，得固体粉末，备用（采用苯酚-硫酸法，以无水葡萄糖为对照，水提醇沉淀中多糖含量为86%）。

2.1.3 含氮化合物的制备 取样品适量，粉碎，加70%乙醇8倍量，加热回流提取1.5 h，滤过，如上重复提取2次，合并滤液，滤液减压浓缩至无醇味，上样于D101大孔树脂，吸附5 h，分别用30%、70%、90%乙醇溶液进行洗脱，将30%乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，得固体粉末，备用（采用HPLC，测定含氮化合物中腺苷含量为0.1%）。

2.1.4 皂苷部位的制备 将2.1.3项下的70%乙醇洗脱液进行减压浓缩，干燥，得固体粉末，备用（采用香草醛-高氯酸比色法，以菝葜皂苷元为对照，皂苷相对含量为61%）。

2.1.5 皂苷元部位的制备 将2.1.3项下的90%乙醇洗脱液进行浓缩，干燥，得固体粉末，备用（采用香草醛-高氯酸比色法，以菝葜皂苷元为对照，皂苷元含量为50%）。

2.2 各部位舒张离体豚鼠气管平滑肌作用

2.2.1 克-亨氏（Krebs-Henseleit）营养液的配制 KCl 0.417 5，NaH2PO40.458 4，NaCl 6.866 6，MgSO40.290 8，CaCl20.367 6，NaHCO32.100 2，Glucose 1.090 g·L－1。使用蒸馏水配制，先加入 KCl、NaH2PO4、NaCl、MgSO4、CaCl2，溶解均匀后加入单独溶解的NaHCO3，混匀后加入Glucose。

2.2.2 受试药物的配制 将2.1项下得到的苷元部位以0.5%DMSO为溶剂，其他部位以水为溶剂进行溶解，浓度均相当于生药量1 g·mL－1。

2.2.3 离体气管片的制备 将豚鼠击晕后，立即剪开颈部皮肤和皮下组织，自甲状软骨至气管分叉处剪下全部气管，放入盛有克-亨氏（Krebs-Henseleit）营养液的表面皿中（表面皿中同时充氧），剪除气管周围的结缔组织。在气管的软骨环面纵行切开，以3～5个软骨环的间隔横切，即成气管片标本，供实验用。将标本放入盛有20 mL K-H氏营养液的麦氏浴槽中，下端固定于通气钩上，上端以线连至张力换能器上。浴槽温度控制在（37.5±0.5）℃，并持续供氧，标本基础张力调为2 g。标本平衡2 h，每15～20 min换液1次。

2.2.4 对豚鼠离体气管平滑肌作用 标本张力稳定后，向浴槽中加入磷酸组胺使气管片收缩到最大效应的50%，然后加入受试药物，对照组为同体积0.9%氯化钠溶液，阳性药组为异丙肾上腺素。浴槽内药物终浓度见表1。观察各个部位对组胺所致离体气管收缩的拮抗作用，每组设置4组平行试验，并按下式计算舒张百分率。

舒张百分率 （%）＝（组胺收缩克数－加药后舒张克数）/组胺收缩克数×100%

2.3 数据处理

各个部位的药效学试验数据采用SPSS16.0软件进行处理。

3 结果

表1结果显示，当给药浓度为低剂量时，皂苷部位有明显舒张组胺致痉的离体豚鼠气管平滑肌的作用，舒张率达（115.38±6.57）%；其他部位无明显作用。给药浓度为高剂量时，皂苷部位有非常显著的舒张组胺致痉的离体豚鼠气管平滑肌的作用，舒张率达到（178.76±11.07）%，与阳性药比较无显著性差异，皂苷元部位及总样有一定的舒张作用，其他部位无明显作用。表明作用强度随着给药剂量的加大而增强，具有一定的剂量依赖性。因此，确定皂苷部位为薤白平喘作用的有效部位。

表1 各个部位对豚鼠离体气管平滑肌的舒张百分率

4 讨论

本文首次以薤白各提取部位为受试药物对离体豚鼠气管平滑肌的舒张作用进行研究，确定薤白皂苷为其平喘作用的有效部位，不仅明确了薤白皂苷类成分具有的新药效作用，而且为薤白用于平喘制剂的质量控制指标的选择提供依据。

本文采用了组胺所致离体豚鼠气管片收缩作为筛选模型，考虑到组胺主要作用于Hl受体，与Hl受体的结合速度非常快，表现为气道平滑肌收缩，参与急性哮喘的发作[7]，该模型适于快速筛选有效部位研究。但其具体的作用机制还有待进一步的研究。

[1]国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：353.

[2]陈海峰.中药小根蒜活性成分的深入研究[D].沈阳：沈阳药科大学，2005.

[3]覃丽蓉，吴珊，韦锦斌.薤白提取物平喘作用的实验研究[J].广西医学，2008，30（12）：1844-1845.

[4]张香美，刘焕云，王春霞，等.小根蒜抑菌作用的初步研究[J].安徽农业科学，2005，33（9）：1676-1677.

[5]吴波，陈思维，曹虹，等.薤白提取物对心肌缺氧缺血及缺血再灌注心肌损伤的保护作用[J].时珍国医国药，2010，21（9）：2209-2210.

[6]朱士高，张校芝，张向花.瓜蒌薤白寄生汤治疗痰瘀闭阻型冠心病心绞痛效果观察[J].齐鲁医学杂志，2006，21（5）：446.

[7]徐乃玉.加味止嗽散平喘作用及其机制实验研究[D].兰州：兰州大学，2003.

A Screening of the Effective Fraction on Antiasthmatic Activity of Alliimacrostemonis Bulbus

TAN Zhong-ying，ZHUANG Jin-hong，LIU Yu-xi，PAN LI-hong，ZHUANG Yu-yang，LIU Xiao-qiu
（DepartmentofTraditionalChineseMedicines，ShenyangPharmaceuticalUniversity，Shenyang110016，China）

Objective：To screen the effective fraction of antiasthmatic activity ofAlliummacrostemonBge..Methods：The fractions of alcohol precipitation，nitrogenous compounds，saponins and aglyconeswere collected by the separation of the alcohol precipitation method and macroporous adsorption resins.Themodel of bronchus slice contraction caused by histamine was used to evaluate the antiasthmatic effect.Results：The fraction of saponins showed the remarkably antiasthmatic activity，the ratio of relaxation was（178.76±11.07）%.Conclusion：The effective fraction of antiasthmatic activity was the saponins.

AlliimacrostemonisBulbus；Antiasthmatic activity；Effective fraction

*刘晓秋，E-mail：liuxiaoqiu3388＠tom.com

2011-04-12）