艾叶总黄酮的提取及含量测定

天津市安宁医院（300300）率红莉

天津医科大学药学院（300070）张庆伟

艾叶具有散寒止痛，温经止血之功效，用于小腹冷痛、经寒不调、宫冷不孕、吐血、衄血、崩漏经多、妊娠下血等症，外治皮肤瘙痒[1]。现代研究证实：艾叶化学成分是其功效与毒性表达的物质基础，与功效、毒性之间存在一定的量效关系、量毒关系[2]。因而，对艾叶的化学成分，尤其是单体化合物的研究成为艾叶现代研究的基础和关键。

1 仪器与试药

1.1 仪器 紫外分光光度仪：Hitachi U-3310 UV-VIS Spectrophotometer。旋转蒸发器：SENCO R系列，上海申生科技有限公司。恒温干燥箱：天津泰斯特仪器有限公司。单相交流感应电动机：上海申生科技有限公司。恒温水浴锅：上海申生科技有限公司。HC-TP-II型架盘天平：天津市天平实业有限公司。电子分析天平：FA2004N型，上海恒平科学仪器有限公司。循环水式多用真空泵。KQ-100超声波清洗器。

1.2 试药

1.2.1 植物来源：艾叶干燥叶，购自天津市药材公司，由生药及药用植物学教研室侯丕勇博士鉴定。

1.2.2 标准品：芦丁，由天津医科大学药学院仪器分析室提供

1.2.3 药品和溶剂：乙醇（65%，75%，95%）：分析纯，天津市基准化学试剂有限公司。

2 方法与结果

2.1 试液的制备

2.1.1 供试品浸膏 将500g干燥的艾叶粉碎，以一定浓度的乙醇（65%，75%，95%）浸渍，每次4L，24h，共2次。合并滤液，抽滤。将药渣弃去，所得滤液经旋转蒸发减压蒸馏，回收乙醇，制成浸膏。精密称取预处理后的艾叶浸膏，即干浸膏100mg置于100ml容量瓶中，加95%乙醇适量，超声20分钟溶解后用95%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

附表1 回收率实验测定吸光度

附表2 精密度实验测定吸光度

2.1.2 对照品溶液 精密称取干燥芦丁对照品10mg，置于100ml量瓶中，加95%乙醇适量，超声20分钟溶解后用95%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 标准曲线的制备

2.2.1 对照品溶液 分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.50ml、1.00ml、2.00ml、3.00ml、4. 00ml、5.00ml于10ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml,摇匀，静置6min；再加10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加4%氢氧化钠溶液4.00ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12min，以试剂作空白参比液，于507 nm处测吸光度。

2.2.2 检测波长的选择 取样品液2.00ml，在0.30ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于可见光区507nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。

2.2.3 线性关系考察 在507nm处测定不同浓度对照品溶液吸光度，绘制标准曲线，回归方程为: A = 0.0118C+0.0133，r = 0.9991。

2.3 加样回收率试验 精密量取样品液2.00ml，制备6份。分别置于10ml量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加4%氢氧化钠溶液4.00ml，用60%乙醇定容至10ml，摇匀，静置12min。以溶剂的空白试剂作空白参比，于507nm处测吸光度。见附表1。

本实验测定的平均回收率为96.34%，RSD=0.4653%，小于2%。平均回收率在中药要求的95%到105%之间。因而本实验符合方法学要求，可用于艾叶中总黄酮含量的测定。

附表3 不同浓度乙醇提取后艾叶中总黄酮的含量

2.4 精密度试验 精密量取样品液2.00 ml，置于10ml量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加4%氢氧化钠溶液4.00ml，用60%乙醇定容至10ml，摇匀，静置12min。以溶剂的空白试剂作空白参比，于507nm处测吸光度，连续测定6次。见附表2。

实验结果：吸收度值(A)的RSD =0.0865%，小于2%。表明仪器精密度能够满足测定要求。

2.5 总黄酮含量的测定 利用不同浓度乙醇进行提取后，艾叶中总黄酮含量测定结果。见附表3。

从数据表中可知， 用95%乙醇提取获得的艾叶浸膏的总黄酮含量最多，因而，使用95%的乙醇对艾叶中总黄酮成分进行提取为宜。

3 讨论

选用芦丁作为对照品，绘制标准曲线，A= 0.0118C+0.0133， r=0.9991，在5.800～58.000μg/ml范围内吸收度和对照品的质量浓度呈良好的线性关系。从而计算出艾叶样品中总黄酮含量，95%乙醇提取的样品中含有的总黄酮含量为10.06mg/g。经方法学检验，本实验方法操作简单，结果准确，重现性好，稳定性强，适用于艾叶中总黄酮含量的测定。进而，利用此方法测定不同乙醇浓度(95%、75%、65%)对艾叶提取物中总黄酮含量的影响，以选择适当的乙醇提取浓度, 确定使用95%的乙醇对艾叶的总黄酮成分进行提取最为适宜，为艾叶化学成分的进一步深入研究奠定基础。