纳豆提取物的保湿性、抗过敏性和亚硝酸盐清除率的初步研究*

聂凤环 徐秋红 崔明勋 姜成哲▲

1.延边大学草仙药业公司，吉林龙井133400；2.延边大学农学院，吉林延吉 133000

纳豆提取物的保湿性、抗过敏性和亚硝酸盐清除率的初步研究*

聂凤环1徐秋红2崔明勋2姜成哲2▲

1.延边大学草仙药业公司，吉林龙井133400；2.延边大学农学院，吉林延吉 133000

近年来在外用美容药物和化妆品的透皮吸收研究中，高度生物靶向性和严格选择的生物导向制剂的研究开发十分引人注目。以γ-聚谷氨酸作为研究对象，验证它是否具有保湿、抗过敏以及对于亚硝酸盐的清除作用，对于开发透皮制剂具有重要意义。本实验通过3方面研究纳豆提取物的性质。在实验条件下，低浓度的纳豆提取物溶液保湿率均较低，具有明显的抗过敏性和对NaNO2的清除的作用。

纳豆提取物；保湿；抗过敏；亚硝酸盐清除率

随着生活水平的提高，人们对化妆品的需求日益增加，新技术、新产品也不断涌现[1]。目前，化妆品对产品的保湿性、抗过敏性也提出了更高要求。一些科学家在纳豆提取物中发现了一种称为“γ-聚谷氨酸”的高度锁水物质[2-3]。

本实验的目的就是检验纳豆经过洗涤、提取后，主要通过保湿性、抗过敏性和NaNO2的清除作用试验，初步确定其性质。可将其作为化妆品的原料，生产天然化妆品。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 纳豆由延边大学草仙药业提供，由生物技术实验室按常规方法分离提取[4]。甘油、透明质酸酶溶液、0.5 mg/mL透明质酸钠溶液、埃尔利希试剂、乙酰丙酮溶液（现配现用）、0.25 molCaCl2溶液、0.4 mol/L NaOH溶液、无水乙醇、醋酸缓冲液、碳酸钠溶液；0.5 mol柠檬酸盐、0.01% NaNO2溶液、蒸馏水、0.4%对氨基苯硫酸溶液、0.2%盐酸α奈胺溶液。

1.1.2 实验仪器 电热恒温培养箱（广州市医疗设备厂），电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司），722S可见分光光度计（天津市普瑞斯仪器有限公司），-4℃冰箱（青岛海尔股份有限公司），YP402N电子天平（上海精密科学仪器有限公司），移液器 (50 μL、200 μL、1000 μL)，烧杯 (150 mL)，试管 (5 mL)，滤纸，量筒（100 mL），玻璃板 (7.5 cm×7.5 cm)，玻璃棒等。

1.2 实验方法

1.2.1 保湿实验 根据参考文献的方法进行[4]。将纳豆提取物和甘油分别配制成浓度为5%的溶液。取3块7.5 cm×7.5 cm的玻璃板，分别标记为A、B、C。A为样品，B为蒸馏水，C为甘油。将与玻璃板同样大小的滤纸平铺在玻璃板上，并固定，称取滤纸与玻璃板的重量M，记录。用移液器吸取浓度为5%的样品溶液、蒸馏水和5%的甘油一定量，分别滴在A、B、C 3块固定有滤纸的玻璃板上，并抹匀，称取此时的重量并记为M0（涂抹样品时要均匀）。将玻璃板放入电热恒温培养箱中(温度为37℃)，一定时间间隔后后取出玻璃板，称其重量，分别记为M1、M2、M3、M4、M5（在称量的过程中要尽量避免样品暴露于空气中）。计算其加样后与从电热恒温培养箱中取出后的质量差，以判断其失水的多少，根据失水率判断保湿性。

1.2.2 透明质酸酶体外抑制实验 根据参考文献的方法进行[5]。透明质酸酶抑制实验-采用Elson-Morgan法[5-7]透明质酸酶抑制率（%）=［（A-B）-（C-D）］/（A-B）×100%。式中：A为对照溶液的OD值；B为对照空白溶液的OD值；C为试样溶液的OD值；D为试样空白的OD值。样品：浓度为0.005%、0.01%、0.05%的纳豆提取物溶液；透明质酸酶溶液：0.01 g透明质酸酶与4 mL醋酸缓冲溶液混合配制而成；0.5 mg/mL透明质酸钠溶液：取透明质酸钠0.005 g置于烧杯中，加入10 mL醋酸缓冲溶液；埃尔利希试剂：称取0.8 g对二甲氨基苯甲醛溶于15 mL浓盐酸和15 mL无水乙醇中，可保存2个月；乙酰丙酮溶液：取乙酰丙酮3.5 mL溶于50 mL 1.0 mol/L的碳酸钠溶液中（临用前配制）。透明质酸抑制率=[(A-B)-(C-D) /（A-B）]×100%。A为对照溶液组（用醋酸缓冲溶液代替样品）；B为对照空白溶液组（用醋酸缓冲溶液代替样品及酶液）；C为试样溶液组；D为试样空白组（用醋酸缓冲溶液代替酶液）在547 nm，下，测定4个试管内液体的ABS值。

1.2.3 NaNO2消除率实验 根据参考文献的方法进行[6]。将纳豆提取物溶于水制成浓度为1%、5%的溶液。取5个5 mL的试管，并分别标记为 A0、A1、A2、B1、B2，A0为对照，实验过程中样品被蒸馏水所取代，A1中样品为5%的纳豆提取物，A2中的0.01% NaNO2溶液用蒸馏水代替，B1中样品为1%的纳豆提取物，B2中的0.01% NaNO2溶液用蒸馏水代替，其他条件相同。测定A1、A2、B1、B2的OD值。

2 结果

2.1 保湿实验

随着时间变化，样品的失水率最低，可见5%的纳豆提取物溶液具有一定的保水性。见图1。

图1 失水率随时间变化曲线

2.2 透明质酸酶体外抑制实验

透明质酸抑制率 =[(A-B)-(C-D)/（A-B）]×100%，可将A、B、C、D的OD值代入公式得出，浓度为0.005%的样品液的抑制率为16.13%，0.01%的纳豆提取物的抑制率为27.27%，0.05%的纳豆提取物的抑制率为45.45%。

2.3 NaNO2消除率实验

NaNO2消 除 率 =[(A0-Ax)/A0]×100%，此 处 的 Ax=A1-A2=B1-B2。可以得出，浓度为5%的样品液的消除率为53.1%，浓度为1%的样品液的消除率为31.4%。见表1。

表1 比色法测得的OD值

3 讨论

由以上保湿实验结果可知，纳豆提取物确实具有一定保湿效果，但是保湿率较低。目前，已经确定在纳豆提取物中含有一种具有高度保湿性的物质，此物质被称为γ-聚谷氨酸。150 g纳豆中分离提纯出0.5925 gγ-聚谷氨酸，提取率达0.39%[2]。由此可知，经过简单处理得到的纳豆提取物中含有微量的γ-聚谷氨酸，它在此次实验中可能发挥了作用。甘油为较好的保湿剂，由保湿实验的图表可以看出，在实验条件下，纳豆提取物的保湿效果与同浓度的甘油大致相同。

在做透明质酸酶体外抑制实验的过程中，由于透明质酸酶体外抑制的抗过敏性评价实验要求待测物质要溶于水或可以较好地分散在水中[7]，但由于纳豆提取物中并不只是单一的一种物质，使得出的抑制率结果受到影响。但是，实验结果仍然显示随着纳豆提取物溶液浓度的升高，透明质酸酶的抑制率在逐渐上升。所以实验结果测试出纳豆提取物具有较好的抗过敏性。

NaNO2消除率实验用来检测纳豆提取物是否能够消除亚硝酸盐的毒性。实验数据表明，在浓度逐渐升高的过程中，NaNO2的消除率提高，在浓度为1%时就有极显著的消除率，5%时更高。

目前，纳豆已被确定含有很多对人类有益的物质，γ-聚谷氨酸就是其中一种，现在从纳豆中提取的物质已被用于各个方面，如环保、医疗、美容等[8-9]。透皮吸收历来都是护肤养颜产品的技术难点，透皮吸收的研究对美容外用药物作用机制的阐明和新药开发具有重要意义。在给药系统中，剂型的影响日益引起关注，近年来高度生物靶向性和严格选择的生物导向制剂-脂质体的研究开发十分引人注目[10]。本研究室把γ-聚谷氨酸作为微胶囊进行了试验研究，验证它是否具有保湿、抗过敏以及对于亚硝酸盐的清除作用，对于开发透皮制剂具有重要意义。

由此可以得出结论：①在实验条件下，纳豆提取物具有与同浓度甘油相近的保湿性。②本次实验的纳豆提取物具有抗过敏性，并且随样品液的浓度增加而增加。③低浓度的纳豆提取物就能够有效消除亚硝酸盐的毒性。

[1]宋永波.化妆品研发中的新进展[J].日用化学品科学，2007，30（10）：5-8.

[2]吕莹，郝紫徽，李虹，等.γ-聚谷氨酸的分离提纯[J].食品与发酵工业，2005，31（2）：133-134.

[3]Shih I,Van Y.The production of poly-(γ-glutamic acid)from microorganisms and Its various applications[J].Bioresour Technol,2001,79:207-225.

[4]秦允荣，王昌涛，何聪芬，等.单一保湿剂体外保湿功能的评价[J].日用化学化工，2006，36（3）：199-201.

[5]黄丽，韦保耀，腾建文.紫苏叶抗过敏有效成分的研究[J].食品科技，2005，21（5）：90.

[6]任清，魏征，游思远，等.燕麦油的精制及其抗过敏性与抗氧化性功效检测[J].食品科技，2008，（3）：137-141

[7]钟读波，孟庆雄 .透明质酸酶 [J].食品与药品，2007，9，（4）：74-76.

[8]段智变，江晓，江汉湖，等，纳豆粗提物抗高脂血症及抗氧化作用的研究[J].营养学报，2004，26（4）：296-298.

[9]秦国宏，熊小超，张菊花，等，枯草芽孢杆菌联产纳豆激酶和γ-聚谷氨[J].过程工程学报，2008，1（8）：120-123.

[10]杨桂明、谷键梅，宋丽艳，脂质体技术在化妆品制剂中的应用[J].中国美容医学，2009，18（3）：396-398.

Effects of natto extract on moisture, hyaluronidase experient, scavenge nitrite in vitro

NIE Fenghuan1XU Qiuhong2CUI Mingxun2JIANG Chengzhe2
1.Yanbian University Caoxian Pharmaceuticial Company,Longjing133400,China; 2.Agriculture College of Yanbian University,Yanji133000,China

In medicine and cosmetics for external use only beauty was skin absorbed for the high living and strict targeting,γ-polyglutamic acid(γ-PGA) was very attractive.In this study, moisture experiments, hyaluronidase experient, scavenge nitrite by the natto extract. The three experiments were conducted in vitro environment:moisture test were repeated to calculate the difference between the results of weighing,and hyaluronidase inhibition,NaNO2experiment to eliminate rate were dropping gradually through a variety of reagents,mixed,heated、color and scavenging rate was determined by spectrophotometric method.According to the obtaineddata data to determine whether natto extract moisture,anti-allergic and the scavenging of nitrite.In experimental conditions,low levels of moisture natto extract solution were detected,with a clear anti-allergy and the role of the removal of nitrite.

Natto Extract;Moisturizing;Hyaluronidase experiment;Clearence rate of nitrite

R392.8

B

2095-0616（2011）19-23-02

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延边大学科技发展计划项目（延大科合字[2009]第015号）▲

2011-08-01）