金铃子水煎液对AST和ALT活性影响的研究

张东升 聂建军

1.河南省南阳市骨科医院，河南南阳 473000；2.南阳医学高等专科学校第一附属医院，河南南阳 473058

金铃子是楝科植物川楝的干燥成熟果实，性寒、味苦，有小毒，归肝，具有舒肝行气、止痛驱虫作用，用于胸胁、脘腹胀痛、疝痛、虫积腹痛。临床应用仍比较广泛，对肝脏的毒性作用较强，可引起急性中毒性肝炎。对金铃子毒性文献报道不多，金铃子主要毒性成分川楝素小鼠灌胃的LD50为277～1146 mg/kg，大鼠灌胃的LD50为120.76 mg/kg，金铃子水煎液剂量达30.6 g生药/kg以上时，口服1 h后就能出现明显的急性肝损伤[1]。而剂量在30.6 g生药/kg以下的安全肝毒性研究未报道，本研究以AST和ALT活性为指标来评价金铃子水煎液对肝脏的毒性。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验仪器 FSH-2型可调匀浆器（常州普天仪器制造有限公司）、H1650台式高速离心机（H1650台式高速离心机）、AUX220电子天平[岛津国际贸易（上海）有限公司]、HWT-20B恒温水浴箱（天津市恒奥科技发展有限公司）、Thermo酶标仪（赛默飞世尔科技有限公司）。

1.1.2 药品试剂 金铃子，由国药集团河南省南阳分公司提供。ALT和AST试剂盒（上海希美生物科技有限公司，20101024，20101028）。

1.1.3 实验动物 昆明小鼠30只，雄性，体重（26±2）g，购自郑州大学实验动物中心，动物合格证号：20100712。

1.2 实验方法

1.2.1 金铃子水煎液的制备 加适量纯化水于50 g金铃子中，浸泡1 h后，先用武火煮沸，后用文火煎30 min，滤取药液。药渣再同法煎煮20 min，合并2次药液，混匀，浓缩至浓度为1 g生药/mL。

1.2.2 动物处理 将30只小鼠按体重随机分为3组，每组10只，即大剂量（1.4 mL）、小剂量（0.14 mL）和正常对照组。两个给药组按照大、小剂量灌胃金铃子水煎液，正常对照组灌胃等容量的生理盐水，每天1次，连续10 d，小鼠正常饮食。在第10天灌胃以后，禁食不禁水24 h。断头取血，在36～37℃恒温水浴箱中保温30 min后，取出离心10 min（3500 r/min），血清在超低温下（-80℃）保存。取肝脏加磷酸缓冲液，用可调匀浆机制成1%匀浆液。

1.2.3 检测指标 采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清和肝组织AST和ALT活性。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 血清和肝组织AST活性比较

与正常对照组比较，金铃子大、小剂量组血清中AST均明显降低（P＜0.05）。金铃子大剂量组肝组织AST活性降低（P＜0.05），小剂量组肝组织AST活性均无明显变化。见表1。

表1 血清和肝组织AST活性的比较（± s，U/L）

表1 血清和肝组织AST活性的比较（± s，U/L）

注：与正常对照组比较，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.05；#P ＜ 0.05，##P ＜0.05

组别 血清AST活性 肝组织AST活性正常对照组 12.33±0.57 12.70±1.09大剂量组 10.20±0.88** 10.80±2.01#小剂量组 10.18±1.65* 11.32±1.84##

2.2 血清和肝组织ALT活性比较

与正常对照组比较，金铃子大、小剂量组血清和肝组织中ALT活性有微小变化，但变化均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 血清和肝组织ALT活性的比较（± s，U/L）

表2 血清和肝组织ALT活性的比较（± s，U/L）

注：与正常对照组相比，P均＞0.05

组别 血清ALT活性 肝组织ALT活性正常对照组 1.41±0.16 3.36±2.02大剂量组 1.36±0.91 3.02±1.31小剂量组 1.21±0.37 2.95±0.67

3 讨论

3.1 转氨酶对机体代谢的影响

转氨酶是人体代谢过程中必不可少的酶，主要存在于肝组织、心肌、骨骼肌内。其中AST主要存在于肝脏，主要参与机体糖异生。糖异生是乳酸、甘油和氨基酸等在酶的作用下转变为草酰乙酸，然后生成糖的过程。其中乳酸在乳酸脱氢酶作用下转变为丙酮酸，丙酮酸进入线粒体内经过丙酮酸羧化酶催化转变为草酰乙酸，天门冬酸氨基转换酶将细胞内的草酰乙酸转变为天门冬氨酸后再逸出线粒体，进入胞液中的天门冬氨酸再经胞液中天门冬酸氨基转换酶催化而恢复生成草酰乙酰，胞液中的由草酰乙酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化下生成磷酸烯醇式丙酮酸，磷酸烯醇式丙酮酸再在酶的催化下生成葡萄糖[2]。通过有效的糖异生消耗了体内的乳酸，降低了乳酸的水平。若天门冬酸氨基转换酶水平降低，乳酸的利用率就减少，造成乳酸体内蓄积。乳酸在体内蓄积过多可引起乳酸中毒，尤其是在无氧酵解多的时候，中毒症状会更严重些。

3.2 金铃子对转氨酶活性的影响

据资料显示，金铃子提取液剂量达30.6 g生药/kg以上，口服1 h后就能出现明显的急性肝损伤。肝脏受损的机制可能是通过氧化应激反应引起TNF-α，NF-κB，ICAM-1等炎症因子又加重肝脏的损伤[3]。在肝受损的情况下肝细胞内的AST和ALT转移到血液而使血清中AST、ALT活性明显升高[4]，酶水平的高低能够客观反映肝脏受损情况，而血清中AST、ALT水平降低则对诊断肝损伤无实际意义。本研究表明，较低剂量的金铃子水煎液可明显降低血清和肝组织中AST活性，而对血清和肝组织中ALT活性无明显影响，10倍临床剂量金铃子水煎液未能引起肝损伤。较低剂量金铃子水煎液可能是ALT的抑制剂，通过减少糖异生，使乳酸在体内异常蓄积，进而引起乳酸中毒的潜在危害。

[1]熊彦红，齐双岩，金若敏，等.川楝子对大鼠肝毒性的时效和量效关系研究[J].江苏中医药，2008，40（7）：83-85.

[2]董晓燕.生物化学[M].北京：高等教育出版社，2010：120-121.

[3]齐双岩，金若敏，刘红杰，等.川楝子致大鼠肝毒性机制研究[J].中国中药杂志，2008，33（16）：2045-2047.

[4]孙建，周洪雷.中药川楝子临床应用研究[J].辽宁中医药大学学报，2008，10（1）：27-28.