HPLC法测定瓦松栓中槲皮素和山柰素的含量

2011-10-25孙纪发王云玲李具伟

药学研究 2011年12期

孙纪发，王云玲，李具伟

(瑞阳制药有限公司，山东淄博256100)

瓦松的功能主治为凉血止血，解毒，敛疮［1］，用于血痢，便血，痔血，疮口久不愈合，在中国民间广泛应用于多种疾病.瓦松栓是由瓦松经提取制成的纯中药栓剂，具有较强的清热利湿、活血化瘀、去腐生肌、抗病毒等作用，用于治疗细菌或病毒所引起的宫颈糜烂，效果显著［2］.槲皮素和山柰素为瓦松栓的主要成分.为了更好地控制制剂质量，本文采用高效液相色谱法建立了瓦松栓的含量测定方法.该方法简单、重现性好、准确度高，可很好的控制本制剂的质量.

1 仪器与试药

1.1 仪器 SHIMADZU LC－20ATVP高效液相色谱仪，SHIMADZU SPD－20AVP检测器、METTLER AE240型电子天平.

1.2 试药对照品槲皮素(批号:100081－200406，含量97.3%，中国药品生物制品检定所).对照品山柰素(批号:110861－200304，含量100%，中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯.

1.3 供试品来源:瑞阳制药有限公司.

2 方法与结果［1］

2.1 色谱条件色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:乙腈－1.0%盐酸酸溶液(47∶53);检测波长:360 nm;流速:1.0 mL·min－1;进样量:20 μL.

2.2 对照品溶液的制备精密称取槲皮素、山柰素对照品适量，加甲醇制成每1mL含槲皮素约12 μg、山柰素约24 μg的混合溶液，即得，色谱图见图1.

2.3 供试品溶液的制备称取瓦松栓样品4～6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入乙腈－25%盐酸溶液(36∶14)混合溶液50 mL，密塞，称定重量，置水浴中回流1 h，立即冷却，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，色谱图见图2.

图2 样品色谱图

2.4 线性关系考察精密称取槲皮素与山柰素对照品适量制成含槲皮素 245 μg·mL－1与山柰素 468.6 μg·mL－1的溶液，精密量取以上溶液各 10 mL、7.5 mL、5 mL、3.75 mL、2.5 mL，分别置100 mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成溶液(1)、(2)、(3)、(4)、(5)，精密量取以上溶液按色谱条件分别测定.以峰面积对相应浓度进行回归处理，得回归方程为:Y槲皮素=83 691X+93 060，(r=0.990 8);Y山柰素=86 032X+170 741，(r=0.995 2).结果，槲皮素和山柰素分别在 0.006～0.024 mg·mL－1、0.012 ～0.047 mg·mL－1呈良好的线性关系.

2.5 精密度试验精密量取上述对照品溶液进行实验，重复进样5次，每次进样20 μL，按上述色谱条件测定，槲皮素和山柰素的平均峰面积分别为:644 356、1 336 897.RSD分别为:0.53%、0.94%，n=5，结果表明，本方法精密度良好.

2.6 重复性试验取同一批样品(08082304批)，按2.3项下的方法制备5份平行样品，分别测定，槲皮素的平均含量为0.009 505%，RSD为0.34%;山柰素的平均含量为0.016 48%，RSD为0.55%，表明重复性良好.

2.7 稳定性试验取同一批号的供试品溶液，分别于0、1、2、4、6 h测定，结果槲皮素和山柰素含量的 RSD分别为0.76% 和0.85%，n=5，表明供试品溶液在6 h内稳定性良好.

2.8 加样回收率试验取已知槲皮素含量(0.011 18%)与山柰素含量(0.022 51%)的样品6份，每份约4～6 g，分别精密加入槲皮素对照品溶液(50 μg·mL－1)与山奈素对照品溶液(110 μg·mL－1)各 2 mL，按 2.3 项下方法制备供试品溶液.摇匀，测定，槲皮素的平均回收率为99.91%，RSD为0.67%，山柰素的平均回收率为101.2%，RSD为1.00%.结果见表1.