高效液相色谱法测定刺玫果中橡槲皮素的含量

王晓林

(吉林化工学院化学与制药工程学院，吉林吉林132022)

高效液相色谱法测定刺玫果中橡槲皮素的含量

王晓林

(吉林化工学院化学与制药工程学院，吉林吉林132022)

目的:建立刺玫果中槲皮素含量测定的方法。方法:采用高效液相色谱法测定，色谱柱为Shim－pack VP－ODS C18(4.6mm×150mm，5μm，Shimadzu technology)，以0.2%磷酸水溶液(A)和甲醇(B)进行梯度洗脱，流速为1.0mL/min;进样量为20μL;检测波长为370nm;柱温40℃。结果:槲皮素在0.05166～0.82656μg范围内线性关系良好，r=0.9999。平均回收率为97.38%，RSD为1.79%。结论:采用高效液相色谱法测定刺玫果中槲皮素含量，方法简便、准确，可以用于刺玫果的质量控制。

刺玫果，槲皮素，高效液相色谱法

刺玫果系蔷薇科蔷薇属植物山刺玫(Rosa davurica Pall.)的成熟果实，又名野蔷薇果。刺玫果形如瓶状、色鲜红、味酸甜，是一种经济价值极高的野生果类。该果实性温，味酸，营养丰富，果实中含有大量的维生素、氨基酸、黄酮类和鞣质类化合物，民间大量采食或用于泡茶、泡酒等［1－2］，目前市场上已出现由该果汁为主研制的保健食品及保健饮料［3］。现代药理学研究表明:该果无毒副作用，具有健脾理气、养血调经、抗衰老、抗疲劳、耐缺氧、增强免疫力、保肝、防癌及促智等多种功效，尤其是其中的总黄酮类物质可加快血液流速，降低血液粘度，用于治疗脑血栓、脑动脉硬化及冠心病［4］。目前，已从刺玫果中分离出金丝桃苷、银椴苷、橙皮苷及槲皮素4种黄酮类物质［5］。槲皮素具有抗氧化、抗炎、抗过敏、抗菌、抗病毒、清除体内自由基、抑制恶性肿瘤生长和转移等多方面药理作用［6］，但目前有关刺玫果中槲皮素含量的测定尚未见报道。为此，本实验采用HPLC法测定刺玫果中槲皮素的含量，从而为刺玫果这一食药同源的果类新娇的进一步应用与开发提供科学的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

刺玫果 由延吉市林业局提供，经本院生药学教研室鉴定为蔷薇科蔷薇属植物山刺玫(Rosa davurica Pall.)的成熟果实;槲皮素对照品 购自中国药品生物制品检定所，批号081－9003，供含量测定用;甲醇 色谱纯，天津大茂化学试剂公司;水 为重蒸馏水;其余所用试剂 均为分析纯。

LC－20AB型液相色谱仪、SPD－M20A二极管阵列检测器 日本岛津仪器有限公司;BP211D型电子天平 Sartorius公司，RT－08手提式高速中药粉碎机

大德乐机械有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱为Shim－pack VP－ODS C18(4.6mm×150mm，5μm，Shimadzu technology);流动相:A为0.2%磷酸溶液，B为甲醇;0～10min，90%A;10～20min，90%～60%A;20～40min，60%～30%A;40～55min，30%～10%A;55～58min，10%～90%A;60～65min，90%A;流速:1.0mL/min;进样量:20μL;检测波长:370nm;柱温:40℃［7－8］。

1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的槲皮素对照品0.50mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每毫升约含槲皮素50μg的溶液，即得对照品溶液。

1.2.3 供试样品溶液的制备 取刺玫果适量，粉碎，精密称取10.0g，置100mL圆底烧瓶中，加70%乙醇40mL，水浴加热回流3h，过滤，取滤液，剩余残渣中再加入70%乙醇40mL，重复以上操作两次，将三次滤液合并，真空浓缩回收乙醇，残渣用40mL甲醇溶解，过滤，转移至50mL容量瓶中并用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液，作为供试品溶液。

1.2.4 系统适用性实验 分别取对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，结果见图1、图2。在此条件下槲皮素和其它成分可达到基线分离。

图1 槲皮素对照品溶液色谱图

图2 供试品溶液色谱图

2 结果与分析

2.1 标准曲线的制备

精密吸取槲皮素对照品溶液(51.66μg/mL)0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL，分别置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以槲皮素对照品进样浓度(C，μg/mL)为横坐标，峰面积积分值(A)为纵坐标，绘制标准曲线。求得回归方程为:A=672.3C－689.83，R=0.9999，结果表明槲皮素在0.05166～0.82656μg的范围内线性关系良好。

2.2 精密度实验

精密吸取配制好的对照品溶液20μL，重复进样5次，测定槲皮素峰面积积分值，RSD为2.68%(n=5)，实验数据见表1，结果表明精密度良好。

表1 精密度实验

2.3 稳定性实验

取供试样品溶液，按上述色谱条件，分别于0、1、3、5、7h各进样20μL，测定槲皮素峰面积积分值，RSD为2.31%，实验数据见表2，结果表明样品在7h内性质稳定。

表2 稳定性实验

2.4 重复性实验

精密称取刺玫果样品5份，按1.2.3项制备供试样品溶液，按1.2.1色谱条件进行分别测定，计算槲皮素含量，实验数据见表3，所测刺玫果样品中槲皮素平均含量16.02μg/g，RSD为2.82%。

表3 重现性实验

2.5 加样回收率实验

称取已知含量的刺玫果适量(含量为16.11μg/g)，精密称取10.0g，共5份，分别置于100mL圆底烧瓶中，加70%乙醇40mL，水浴加热回流3h，过滤，取滤液，剩余残渣中再加入70%乙醇40mL，重复以上操作两次，将三次滤液合并，真空浓缩回收乙醇，每份残渣中分别加入对照品溶液3mL，然后再加入40mL甲醇溶解，过滤，转移至50mL容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液，作为供试品溶液，按1.2.1色谱条件测定，结果表明，平均回收率为97.38%，RSD为1.79%(见表4)。

表4 回收率实验结果

2.6 样品测定

取三份刺玫果样品，按1.2.3方法操作，制成供试品溶液，再按1.2.1色谱条件进行测定。测得槲皮素的含量分别为16.11、15.96、16.01μg/g。

3 讨论

3.1 在流动相的选择上，根据参考文献主要选择0.2%磷酸水溶液－甲醇为流动相，分别采用等度洗脱和梯度洗脱两种方法，结果表明，梯度洗脱槲皮素出峰时间约为33min左右，峰型良好，与其它组分能够有效分离，故以0.2%磷酸水溶液(A)和甲醇(B)进行梯度洗脱，程序为0～10min，90%A;10～20min，90%～60%A;20～40min，60%～30%A;40～55min，30%～10%A;55～58min，10%～90%A;60～65min，90%A。3.2 在供试品溶液的制备中，对提取方法(乙醇回流、甲醇超声)和供试品溶液的浓度进行了考察，结果发现刺玫果实验量为10.0g，采用70%乙醇热回流法为佳。

3.3 本实验建立的方法操作合理简便，方法精密度高，重复性及线性关系良好，回收率令人满意，可为含刺玫果的功能性食品的含量测定提供依据。

［1］韩云，管正学.野玫瑰果的营养成分分析［J］.食品科学，1991，144(12):38－40.

［2］张国贞，李芳兰，张金梅.野生刺玫果营养成分分析及评价［J］.食品研究与开发，2001，22(6):38－40.

［3］郭向红，张鹏，匡海学，等.刺玫果口服液中没食子酸甲酯葡萄糖苷的含量测定［J］.中医药信息，1999，16(3):53－54.

［4］俞作仁，王文莉，吕娟涛.刺玫果化学成分及药理作用研究进展［J］.中草药，2002，33(2):188－190.

［5］Kuang Haixue.Chemical constituents of pericarps of Rosa davurica Pall［J］.Chem Pharm Bull，1989，37(8):2232－2234.

［6］许进军，何东初.槲皮素研究进展［J］.实用预防医学，2006，13(4):1095－1097.

［7］张萌萌，杜守颖.HPLC测定滇白珠药材中槲皮素的含量［J］.中国中药杂志，2007，32(1):64－65.

［8］林霄，刘布鸣，陈明生.高效液相色谱法测定岗松中槲皮素的含量［J］.时珍国医国药，2009，20(1):102－103.

Determination of quercetin in Rosa davurica.Pall by HPLC

WANG Xiao－lin
(School of Pharmaceutical Engineering and Chemistry，Jilin Institute of Chemical Technology，Jilin 132022，China)

Objective:To develop a method for the determination of quercetin in Rosa davurica.Pall.Method:HPLC analysis method was applied using CH3OH－0.2%H3PO4as gradient elution mobile phase with Shim－pack VP－ODS C18(4.6mm ×150mm，5μm)column.The flow rate，injection volume of the sample and the column temperature were 1.0mL/min，20μL，40℃respectively and the UV detection wave－length was set at 370nm.Results:

There was good linear relationship between integral value of peak area and quercetin in the range of 0.05166～0.82656μg(r=0.9999).The average recovery of quercetin was 97.38%with the RSD of 1.79%.Conclusion:The determination of quercetin in Rosa davurica.Pall with HPLC method was studied in detail.The method was convenient and accurate which can be used for the quality control of Rosa davurica.Pall.

Rosa davurica.Pall;quercetin;HPLC

TS207.3

A

1002－0306(2011)04－0370－03

2010－01－27

王晓林(1969－)，男，硕士，副教授，主要从事天然药物化学成分及其活性的研究。

吉林省教育厅重点计划项目(吉教科合字［2006］第122号)。