一清软胶囊含量测定方法的改进

王群英，何选林

(湖南省永州市药品检验所，湖南 永州 425100)

一清软胶囊主要由黄连、大黄、黄芩3种中药组方，具有清热燥湿、泻火解毒、化瘀止血的作用，目前其质量标准是分别测定黄芩苷和盐酸小檗碱的含量[1]。笔者采用反相高效液相色谱(RPHPLC)法同时测定一清软胶囊中黄芩苷和盐酸小檗碱含量[2－3]，方法简单、快速、结果直观，同时节约检验成本，提高工作效率，有利于生产厂家生产质量控制。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱系统，包括1525泵，2996型紫外检测器(美国)，Empowers工作站。黄芩苷对照品(批号为 110715－200815)、盐酸小檗碱对照品(批号为110713－200911)均来自中国药品生物制品检定所;一清软胶囊(规格为0.5 g/粒，批号分别为20081101，20080801，20090203);乙腈为色谱纯，重蒸馏水、磷酸二氢钠为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Hypersil－ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:0.2%磷酸二氢钠(用磷酸调节pH至2.8)－乙腈(70∶30);检测波长:270 nm;柱温:25℃，进样量:10 μL。在此条件下，色谱图见图1。黄芩苷的保留时间为5.4 min，理论板数按黄芩苷计算为1.7×105;盐酸小檗碱的保留时间为12.8 min，理论板数按盐酸小檗碱计算为 2.0 ×105。

2.2 溶液制备

精密称取黄芩苷对照品25 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇适量，振摇使黄芩苷溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液。精密称取盐酸小檗碱对照品25 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇适量，振摇使盐酸小檗碱溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液。取本品0.25 g，置50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理10 min，加甲醇稀释至刻度，摇匀;取此溶液10 mL离心10 min(转速15 000 r/min)，分取上清液，作为供试品溶液。精密称取大黄0.25 g，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密量取对照品溶液贮备液各 1，2，3，5，10 mL，分别置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，注入液相色谱仪，记录色谱图，以质量浓度为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)，得黄芩苷的回归方程为 Y=3 219.2+1 713 254.7 X，r=0.999 95;得盐酸小檗碱的回归方程为 Y=872.3+1 951 650.6 X，r=0.999 96。结果表明，黄芩苷、盐酸小檗碱质量浓度均在10～100 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:取质量浓度均为50 μg/mL的黄芩苷、盐酸小檗碱对照品溶液，依法测定，记录连续5次的峰面积。结果黄芩苷的RSD=0.62%，盐酸小檗碱的 RSD=0.68%，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一份样品，依法测定。结果黄芩苷、盐酸小檗碱的含量分别为 13.35 mg/g和 12.89 mg/g，RSD 分别为 0.83%和0.72%(n=5)，表明方法重复性好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在 0，4，8，12，16 h 时测定黄芩苷和盐酸小檗碱含量。结果每克样品含黄芩苷分别为13.34，13.35，13.36，13.34，13.35 mg，RSD=0.75%;每克样品含盐酸小檗碱分别为 12.88，12.86，12.87，12.86，12.86 mg，RSD=0.80%。结果表明供试品溶液在16 h内稳定性良好。

阴性对照试验:取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，依法进样，色谱图见图1，表明阴性对照无干扰。

图1 高效液相色谱图

表1 加样回收试验结果(n=6)

加样回收试验:取已知含量的同一批样品6份，精密称定，分别精密加入对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取供试品溶液与黄芩苷、盐酸小檗碱质量浓度各为50 μg/mL的对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3，mg/g)

3 讨论

选用较常用的C18柱和以0.2%磷酸二氢钠(用磷酸调pH至2.8)－乙腈(70∶30)为流动相，检测波长270 nm，得到了良好分离效果，且配置简单。经紫外扫描，黄芩苷在 214.7，277.2，316.3 nm 波长处均有最大吸收，盐酸小檗碱在 228.8，264.1，347.3 nm 波长处均有最大吸收，且在270 nm波长处黄芩苷与盐酸小檗碱吸光度都较大，故选270 nm作为测定波长。

[1]YBZ00192005，国家食品药品监督管理局标准(试行)[S].

[2]李 妍，宋舒暖，李留法，等高效液相色谱法同时测定清新灵微丸中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量[J].时珍国医国药，2009，20(11):2 773－2 774.

[3]张 婷，周平兰，HPLC法测定复方芩柏颗粒中黄芩苷和盐酸小檗碱含量[J].中药新药与临床药理，2009，20(4):349 －351.