反相高效液相色谱法测定布南色林原料的含量及有关物质

廖华卫，陈 云，白家和

(广东省雷州市人民医院，广东 湛江 524200)

布南色林是由日本住友制药株式会社开发的口服制剂，现已在日本上市，在美国和欧洲正进行Ⅲ期临床[1]。本品为高度选择性的5－羟色胺2受体和多巴胺2受体拮抗剂，对多巴胺1和肾上腺素α1、H1组胺受体和M1胆碱受体亲和力较小，临床主要用于治疗非典型性精神病[2]。本品属第2代抗精神病药物，锥体外系反应比市场上现有抗精神病药的要少。为考察布南色林原料的质量，笔者对其质量控制中的有关物质及含量测定方法进行了研究，报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC10Avp型高效液相色谱仪(日本岛津)。布南色林对照品(自制，含量不少于99.9%，批号为100101);布南色林原料(自制，批号为100201，100202，100203);甲醇、乙腈均为色谱纯，磷酸二氢钠、庚烷磺酸钠等其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Waters Xterra RP18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－甲醇－25 mmol/L的磷酸二氢钠溶液(内含25 mmol/L庚烷磺酸钠，用磷酸调 pH 至 3.0，35 ∶30 ∶35);流速:1 mL/min;检测波长:243 nm;柱温:30℃;进样量:10 μL。在此条件下，供试品溶液色谱中布南色林峰能达到基线分离，理论板数按布南色林峰计应不低于3 000。色谱图见图1。

2.2 溶液制备

精密称取布南色林对照品10.22 mg，加甲醇溶解，并定容至50 mL容量瓶中，得质量浓度为0.204 4 g/L的布南色林对照品贮备液。精密移取1 mL布南色林对照品贮备液，置10 mL容量瓶中，得到0.020 44 g/L的对照品溶液。取布南色林原料，研细，精密称取布南色林10.46 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇充分溶解并定容至刻度，摇匀，滤过，即得供试品贮备液，作为有关物质测定用供试品溶液。精密量取续滤液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得含量测定用供试品溶液。精密移取供试品溶液1 mL，加甲醇稀释并定容至100 mL的容量瓶中，即得对照溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取布南色林原料研细粉末，精密称取布南色林100 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，即得布南色林原溶液。分别精密量取5 mL布南色林原溶液至5个50 mL容量瓶中，取3份分别加入1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH溶液各5mL和10%过氧化氢溶液1mL，置水浴加热10 min;第4份置105℃烘箱中5 h;第5份置光照强度(4 500±500)lx条件下光照5 d;然后将酸、碱降解的溶液调pH至中性，用甲醇定容，摇匀，作为各破坏方法的有关物质供试品溶液。精密量取各有关物质的供试品溶液、对照溶液10 μL，分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。结果表明主峰和降解产物能达到基线分离，分离度符合要求，空白溶剂对主峰和降解产物测定无干扰，表明此方法专属性强。色谱图如图1 D－H。

线性关系考察:精密量取对照品贮备液 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置 10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10 μL注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件测定布南色林峰面积，以布南色林质量浓度(C)为横坐标、峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程 A=－15 334.9+14 793 787.2 C，r=0.999 4(n=6)。结果表明，布南色林进样浓度在 1.022～10.22 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:取对照品溶液6份，依法测定。结果布南色林峰面积的 RSD=1.2%(n=6)，表明此法精密度好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别放置 0，2，4，8，12，24 h后进样测定。结果布南色林峰面积的 RSD=0.7%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

重复性试验:取样品(批号为100202)6份，精密称定，依法制成供试品溶液，照2.1项下色谱条件进样测定。结果布南色林含量的平均值为 99.68%(g/g)，RSD=0.8%(n=6)。

定量限测定:取取布南色林对照品溶液，稀释测定至信噪比为10∶1时的相应质量浓度测定定量限。结果定量限是2 ng。

回收率试验:精密称取布南色林样品(含量99.84%)9份，每份约相当于布南色林20 mg，分别置100 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声溶解并定容至刻度，配制成3个不同质量浓度的溶液。摇匀，过滤。精密量取续滤液1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得供试品溶液。按2.1项下色谱条件进样测定布南色林的峰面积，并计算其回收率。结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

取布南色林样品，研细，精密称取约10 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，过滤精密量取续滤液1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定布南色林峰面积，并计算其含量。结果表明，3批样品的含量分别为 99.6%，99.6%，99.7%，平均含量为 99.6%，RSD=0.1%。

2.5 有关物质检查

取回收率试验项下样品作为供试品溶液;精密量取供试品溶液1 mL，加流动相稀释至100 mL量瓶中，作为布南色林对照溶液。取10 μL对照溶液进样，调节检测灵敏度，使主峰峰高为满量程的20%;再精密量取10 μL供试品溶液进样，记录色谱至主成分峰保留时间的3倍。结果3批样品中的有关物质的峰面积总和分别为0.22% ，0.24% ，0.15% ，单个杂质均小于 0.1% ，总杂质均小于1.0%，符合新药研发有关杂质研究的指导原则。

3 讨论

从结构可知，布南色林是一个呈碱性的有机化合物，难容于甲醇、乙醇、水。根据其特性，加入离子对试剂磷酸二氢钠与庚烷磺酸钠后，与布南色林形成中性的分子态物质，大大增强了布南色林的保留能力，所得峰形较好，可获得较高的理论板数，拖尾因子达到要求，经方法学验证结果满意。该方法简便准确、专属性强、精密度好、回收率高，为考察布南色林片的含量以及稳定性试验提供可靠的方法。

在建立布南色林有关物质含量测定的方法过程中，本试验添加相当于1%布南色林浓度的中间体4－(4－氟苯基)－5，6，7，8，9，10－六氢环辛烷并[b]吡啶 －2(1H)－酮以及2－氯－4－(4－氟苯基) －5，6，7，8，9，10 － 六氢环辛烷并[b]吡啶考察方法的专属性，模拟布南色林中可能存在的杂质状态，验证即有少量杂质存在时布南色林与杂质的分离情况，而不以相同浓度的布南色林与中间体混合进样(因为实际检测中不可能存在这样的状况)。强力破坏试验是为了揭示布南色林的内在稳定性，也是研发中不可缺少的一部分，这些试验是在比加速试验更猛烈的条件下进行，包含了药品在销售、运输过程中可能遇到的各种复杂情况，以证明在所选色谱条件下，能否检测出在此剧烈条件下所产生的杂质。结果显示，杂质与主峰、杂质与杂质间的分离度均符合要求，表明该法专属性强，适用于布南色林有关物质的含量测定。

[1]王俊芳，王小妹，王哲烽，等.布南色林的合成[J].中国医药工业杂志，2009，40(4):247 －254.

[2]王晓洁，朱忠华.抗精神分裂症药布南色林的合成[J].科教文汇，2007，12(4):219.