纳洛酮对大鼠肾脏缺血－再灌注损伤的保护作用

黄黎芳

(四川省自贡市第四人民医院药剂科，四川 自贡 643000)

纳洛酮是一种特异性阿片受体拮抗剂，对心肌缺血－再灌注损伤有一定的保护作用[1－2]，但对肾脏的缺血－再灌注损伤是否有保护作用目前尚未见报道。本研究利用大鼠肾脏缺血－再灌注损伤模型，观察纳洛酮对肾脏缺血－再灌注后血液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及肾组织中Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶变化的影响，观察组织病理学变化，探讨纳洛酮对肾脏缺血－再灌注损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

UV－2101PC型紫外分光光度计(日本岛津公司)。盐酸纳洛酮注射液(军事医学科学院毒物药物研究所研制，北京四环制药厂生产，批号为950525);丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及ATP酶试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，批号为960726。Wistar大鼠60只，雌雄不拘，体重为210～270 g，平均(239±19)g，购自山东医科大学实验动物中心。

1.2 分组与试验方法

将Wisfar大鼠随机分为5组，即正常对照组(假手术组，A组)、肾缺血60 min组(B组)、肾缺血60 min再灌注20 min组(C组)、纳洛酮低剂量组和高剂量组(D1组和D2组)，D1组和D2组分别于术前1 h腹腔注射纳洛酮2 mg/kg与4 mg/kg，每组12只。大鼠肌肉注射30%戊巴比妥钠(30 mg/kg)麻醉，腹部正中切开后，切除右侧肾脏，以无损伤动脉夹夹闭左肾动脉，制成肾缺血模型。手术结束后从下腔静脉取血，用以测定MDA及SOD。切取左肾，用冷生理盐水冲洗除去血液，滤纸拭干称重(称取0.5 g)，用玻璃匀浆器制成2%的组织匀浆，按试剂盒说明测定Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶活力，同时做蛋白定量测定[3]。留取部分肾组织，用甲醛溶液固定，制成石蜡切片，HE染色，光镜检查。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 对血中MDA含量和SOD活力的影响

B组与A组血浆MDA含量及全血SOD活力均无显著性差异(P＜0.05);C组MDA的含量明显升高，SOD活力显著降低，与A组和 B 组比较有显著性差异(P ＜0.01，P ＜0.05)。D1组和 D2组与C组比较，MDA含量明显下降，SOD活力明显升高，与B组及A组无显著差异。结果见表1。

表1 各组观察指标比较(±s，n=12)

表1 各组观察指标比较(±s，n=12)

注:与 A 组比较，＊P＜0.01;与 C 组比较，△P ＜0.05，▲P＜0.01。

组别A组B组C组D1组D2组MDA(μmol/L)4.8 ± 1.0 5.3 ± 2.0 12.5 ± 3.5＊8.9 ± 1.5＊△5.7 ± 1.0▲SOD(NU/mL)142±37 120±16 92±35＊136 ±24＊△143±16▲Na+－K+－ATP酶[μmolPi/(mg·pr·h)]3.6 ± 0.7 3.1 ± 1.2 2.1 ± 0.5＊2.8 ± 1.0 2.9 ± 0.6▲Ca+－ATP酶[μmolPi/(mg·pr·h)]3.9 ± 0.7 3.1 ± 1.3 2.1 ± 0.4＊2.6 ± 0.5＊△3.3 ± 0.6▲

2.2 对肾组织中Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶活力的影响

B组Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶活力与A组间无显著性差异(P＜0.05);C组酶活力明显下降，与上述两组相比有显著性差异(P＜0.01)。D1组中 Na+－K+－ATP酶活力有所升高，但与C组相比无显著性差异(P＜0.05);D2组与C组相比有显著性差异(P＜0.1)。各组 Ca2+－ATP酶的变化与 Na+－K+－ATP酶的变化基本相同。结果见表1。

2.3 肾脏组织病理学检查结果

缺血60 min后，大鼠肾脏变为暗红色，明显水肿;再灌注20 min后，肾脏外观与缺血组(B组)比较无明显变化，预先给予纳洛酮的大鼠肾脏缺血－再灌注后外观明显好转，颜色接近正常，仅有小范围的暗红色区域。光镜下见缺血组(B组)部分肾小管上皮水样变性，并见蛋白管型，肾间质局部出血伴水肿;再灌注组(C组)肾小管上皮细胞明显水样变性，肾间质局部出血伴水肿，并见蛋白管型;纳洛酮低剂量组(D1组)肾小管上皮轻度水样变性，肾间质轻度水肿，偶见管型;高剂量组(D2组)仅见部分肾小管上皮轻度水样变性。各组肾小球均无明显变化。

3 讨论

许多研究表明，肾脏缺血－再灌注造成肾组织损伤的主要机制是:缺血时血管内皮细胞的黄嘌呤脱氢酶转变为黄嘌呤氧化酶，再灌注时催化ATP降解产物次黄嘌呤氧化生成尿酸，这个过程可产生大量氧自由基，可导致脂肪损伤，产生脂质过氧化物，破坏生物膜的结构，使细胞变性、坏死[4]。本研究发现，单纯肾缺血60 min时MDA无明显改变，再灌往20 min后其值明显升高;而SOD在缺血时变化不明显，再灌注时显著下降，这与文献报道结果一致[5]。应用纳洛酮后MDA下降，SOD升高，表明纳洛酮能抑制脂质过氧化物升高，增强清除自由基的能力，高剂量比低剂量作用更明显。

肾小管细胞的基侧膜内有Na+－K+－ATP酶，在离子转运过程中起重要作用。该酶的主要功能是泵出细胞内Na+，泵入细胞外K+，维持机体内环境的稳定。Na+－K+－ATP酶减少，将导致细胞内Na+蓄积和K+丢失，同时Ca2+浓度升高，从而导致线粒体肿胀，氧化一磷酸化脱偶联，进而引起肾组织的一系列损伤[6]。本研究结果表明，纳洛酮能防止肾脏缺血－再灌注损伤时组织中Na+－K+－ATP酶活力的降低。

有研究表明，肾缺血后肾组织中Ca2+－ATP酶活力降低，细胞内Ca2+浓度升高。高度Ca2+可激活细胞内Ca2+依赖性蛋白酶和磷酸脂酶，引起蛋白、磷脂水解，游离脂肪酸释放，细胞膜结构和骨架破坏。本研究发现，肾缺血时Ca2+－ATP酶活力较对照组降低，但无统计学意义，再灌注时Ca2+－ATP酶活力明显降低，应用纳洛酮后可使此酶活力明显升高。

综上所述，纳洛酮对大鼠肾脏缺血－再灌注损伤有一定的保护作用。

[1]Caldwell RW，Nagarijan R，Chryssanthis A，et al.Action of the opioid antagonists，Nalosxne and congeners on reperfustion cardiac arrythmias and regional left coronary bolld flow[J].Pharmacology，1990，41(3):61－63.

[2]Huang XD，Lee AYS，Wong TM，et al.Naboxone and reperfustion in annestheized dogs[J].BR J Pharmac，1986，87:475 －477.

[3]郑军华，魏 武，闵志廉.器官保存领域的新进展[J].国外医学·泌尿系统分册，1995，15(65):216 －218.

[4]王 凤，邵国兴，秦荣良，等.氧自由基及其清除剂VitE、辅酶Q10在肾缺血中作用的实验研究[J].中华器官移植杂志，1994，15(1):28－30.

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