高效液相色谱法测定康肤霜中甲硝唑和氯霉素含量

2011-09-17秦文涛

中国药业 2011年1期

王浩，张霞，秦文涛

(山东省日照市药品检验所，山东日照 276826)

康肤霜具有抗菌消炎、抗寄生虫的作用，用于治疗皮肤炎症、痤疮及毛囊虫、螨虫引起的皮肤感染，是本地区医院常用的一种外用复方制剂。为控制制剂质量，确保临床疗效，笔者建立了高效液相色谱法测定康肤霜中甲硝唑与氯霉素的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

LC－20AT岛津高效液相色谱仪，SPD－20A紫外检测器，SIL－20自动进样器。康肤霜(日照市皮肤病防治所自制，批号为080503，080502);甲硝唑对照品(批号为100191－200305)、氯霉素对照品(批号为130555－200501，含量为99.5%)购自中国药品生物制品检定所;乙腈(色谱纯)，水为重蒸馏水，其他化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]与系统适用性试验

色谱柱:VP －ODS C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:0.1%庚烷磺酸钠溶液(取0.1%庚烷磺酸钠溶液500 mL与二甲基甲酰胺 5 mL、冰醋酸 0.5 mL，混匀)－乙腈(75∶25);流速为1.0 mL/min;检测波长:272 nm;柱温:室温;进样量:20 μL。在此条件下，甲硝唑峰、氯霉素峰与相邻杂质峰的分离度均大于2.0，理论板数按氯霉素峰计大于3 000。色谱图见图1及图2。

图1 甲硝唑与氯霉素二醇物、氯霉素的分离度高效液相色谱图

图2 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

称取氯霉素与甲硝唑对照品各约50 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加甲醇5 mL溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL含甲硝唑与氯霉素各50 μg的对照品溶液。称取本品约5 g(约相当于甲硝唑与氯霉素各100 mg)，精密称定，加甲醇10 mL使溶解，定量转移至200 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品的贮备液;精密量取续滤液5 mL置50 mL量瓶中，加流动相至刻度，即得每1 mL含甲硝唑与氯霉素各50 μg的供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密量取对照品贮备液 0.25，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50 mL，分别置 10 mL 量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，精密量取20 μL，注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程甲硝唑 A=7 249.06+7 833.55C，r=0.999 8(n=6);氯霉素 A=11 423.85+17 853.84C，r=0.999 9(n=6)。结果表明，甲硝唑与氯霉素进样量分别在50～500 μg和25～250 μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。

精密度试验:精密量取对照品溶液，连续进样5次。结果峰面积的 RSD=0.2%(n=5)，表明方法精密度好。

稳定性试验:精密量取同一供试品(批号为080503)溶液，分别于配制 0，2，4，6，8，12，24 h 时进样。结果甲硝唑与氯霉素峰面积的RSD分别为0.8%和0.5%(n=7)，表明供试品溶液24 h内稳定。

重复性试验:取同一批号的样品(批号为080503)6份，依法测定。结果甲硝唑与氯霉素的平均含量分别为99.58%和98.76%，RSD分别为0.7%和0.5%(n=6)，表明方法的重复性好。

加样回收试验:称取甲硝唑对照品52.26 mg与氯霉素对照品25.18 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加入甲醇5 mL溶解，加流动相至刻度，制成每1 mL含甲硝唑2 mg和氯霉素1 mg的贮备液;另精密量取已知含量的供试品溶液5 mL，置50 mL量瓶中，分别加入甲硝唑与氯霉素对照品混合的贮备液2.0，3.0，4.0 mL，用流动相分别稀释至刻度，制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。