应用QF-PCR产前诊断1例48，XXYY综合征

刘娜 李东至

（广州市妇女儿童医疗中心 产前诊断中心，广东 广州 510623）

48，XXYY综合征是一种罕见的性染色体异常，其发生率在新生儿中约为1／50 000，但在需要治疗的智障者中为1／300［1］。患者常见的体征包括身材高大、乳腺发育、向心性肥胖、皮肤溃疡、智力障碍和“拳击手”面容（pugilistic face）。目前文献报道的48，XXYY综合征已超过70例，其中只有1例在产前通过母血甲胎蛋白（AFP）筛查而诊断，妊娠随即终止［2］。本文报道应用荧光定量PCR（QF-PCR）技术产前诊断1例48，XXYY综合征。

1 染色体微卫星分析

1.1 样本DNA制备 胎儿DNA从羊水细胞提取，父母DNA分别从外周血提取，使用德国QIAGEN公司DNA提取试剂盒。

1.2 QF-PCR扩增的微卫星（STR）位点 2对X染色体的特异性引物，扩增 HPRT（Xq26.1）和DXS6809（Xq）；2对13号染色体特异性引物，扩增D13S305（13q12.1-q14.1）和 D13S258（13q21.2-q31）；2对18号染色体特异性引物，扩增D18S535（18染色体）和 D18S386（18q22.1-q22.2）；2对21号染色体特异性引物，扩增D21S1435（染色体21）和D21S1446（染色体21）；2对在X和Y染色体上均表达的位点引物，扩增AMXY和X22。所有STR位点的引物序列来自Pubmed数据库，片段分析的仪器为ABI3100遗传分析仪，内在分子量标准35～500bp（单链），GENESCAN基因分型软件扫描分析凝胶上扩增产物及内标的位置，确定产物片段的大小。

1.3 QF-PCR结果判断 在QF-PCR图谱中，一个正常的双等位基因的样本显示出2个STR峰，其比值非常接近1∶1；染色体三体样本显示出比值为1∶1∶1的3个STR峰或为比值为2∶1的2个峰。AMXY扩增后，正常男性显示为1∶1的2个峰，正常女性显示为单个峰。X22扩增后，若为杂合子，46，XY的男性和46，XX的女性显示比值为1∶1的2个峰，47，XXY的男性显示为比值1∶1∶1的3个峰或2∶1的2个峰；若为纯合子，男性（46，XY）和女性（46，XX）显示为1个峰。

2 病例报道

孕妇，28岁，妊娠18周，G2P1。一子3岁，为前次婚姻所生。现丈夫56岁。双方体健，孕前及孕期无不良接触史，妊娠12周时超声检查正常，妊娠16周时血清学筛查阴性。孕18周时由于担心丈夫高龄而焦虑，坚持要求产前诊断，行羊膜腔穿刺术，抽吸羊水20ml。

15ml羊水常规送检细胞培养，5ml羊水行QFPCR快速核型分析。QF-PCR结果发现（图1）：胎儿的AMXY显示2个峰，提示为男性胎儿。DXS6809显示为1∶1双等位基因峰，一个位于256bp，对应于父源性的X染色体，一个位于260bp，对应于母源性的X染色体，提示有2个X染色体的存在。因此，AMXY和X22显示X和Y的峰值比为1∶1，类似46，XY核型，但DXS6809又提示胎儿存在2条X染色体。据此预测，胎儿同时存在2条Y染色体，核型为48，XXYY。因为，如果胎儿核型为47，XXY，那么X和Y的比值是2∶1而不是1∶1。染色体13，18和21上的标记物显示为双亲二体型。羊水培养后的细胞遗传学分析证实了QF-PCR结果。48，XXYY源自于含1条X染色体的卵子和XXY核型的精子受精，后者是由于在精子发生中，性染色体的第1次和第2次减数分裂连续不分离所致。

孕妇选择终止妊娠。引产胎儿生殖器为男性，外观无异常发现，家属拒绝胎儿尸解。取胎盘组织行QF-PCR检查，同样显示核型48，XXYY。夫妇双方外周血核型分析正常。

图1 QF-PCR图谱：胎儿AMXY为1∶1双峰，X22为1∶1双峰，DXS6809为为1∶1双峰。

3 讨论

在产前诊断临床，高龄孕妇通常定义为年龄≥35岁。但在生育问题上，父亲的年龄很少受到关注。目前尚无高龄父亲的明确定义，一般指在生育时父亲的年龄至少超过40岁。母亲年龄是非整倍体妊娠的一个高风险因素，相对来说，父亲年龄的相关性并不显著。源自于父亲的21三体只占唐氏综合征病例的5%～10%，已有的研究也未证实21三体存在父亲的年龄效应［3，4］。同样，其他几种常染色体非整倍体（如13、15、16和18三体）的发生率也未发现与父亲年龄相关［5］。但是和常染色体不同，性染色体非整倍体（如 47，XXY、47，XYY、47，XXX、45，X）有更多的父源性［6］。本文病例中，胎儿性染色体异常源自于高龄父亲也支持了这一观点。

应用QF-PCR快速产前诊断性染色体数目异常的文 献 不 多，Chen等［7］产 前 诊断 1 例 49，XXXXY。近年来，许多细胞遗传中心已将QF-PCR作为检测常见染色体三体的有效手段［8，9］。我们相信，通过X／Y染色体上的STR标记物，如X 2 2，AMXY和HPRT，QF-PCR同样可用于产前快速诊断性染色体的非整倍体。本文结果也证实了QFPCR用于诊断性染色体数目异常的精确性。

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