非小细胞肺癌组织中DNA-PKcs的表达变化及意义

蒋昌斌，甄俊杰，莫明聪，牛道立

(广州医学院第一附属医院，广州 510230)

DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)是细胞双链断裂(DSB)的主要修复蛋白之一，由两个小的调节亚基Ku70、Ku80和一个大的催化亚基——DNA依赖性蛋白激酶催化单位(DNA-PKcs)组成［1］。有关DNA-PKcs与非小细胞肺癌(NSCLC)辐射敏感性的关系已有文献报道［2，3］。因此，本研对73例 NSCLC患者癌组织及其癌旁组织中的DNA-PKcs进行了检测，观察其表达变化并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2005年5月～2009年4月在广州医学院第一附属医院确诊的NSCLC患者73例，男55例，女18例;年龄33～75岁。治疗前经手术或纤维支气管镜取标本，所取标本中可同时找到癌组织及与癌组织相应的癌旁组织，病理检查诊断为NSCLC。病理组织学类型:腺癌36例，鳞癌33例，腺鳞癌2例，大细胞癌及肉瘤样癌各1例。TNM分期:Ⅰ期6例，Ⅱ期7例，Ⅲ期44例，Ⅳ期16例。38例未行手术治疗而仅行放疗，35例接受手术治疗并于术后放疗。将未行手术治疗的38例根据放疗(采用Simens Oncor直线加速器进行三维适形放射治疗，用6 MV X 射线，2 Gy/次，5次/周，照射总剂量为60～70 Gy)的近期疗效，分为辐射敏感组(CR+PR)和辐射抗拒组(NC+PD)。近期疗效的评价依据《WHO实体瘤疗效评价标准》，根据患者放疗前及放疗结束后1～3个月时的胸部CT检查结果分为CR(肿瘤完全消失，且持续1个月以上，无复发或转移)、PR(肿瘤最大直径及垂直直径的乘积缩小50%以上，病灶无增大，持续1个月以上)、NC(肿瘤两径乘积缩小不足50%，增大不超过25%，持续超过1个月)、PD(病灶两径乘积增大25%以上或有新病灶出现)。

1.2 DNA-PKcs的检测 将73例患者治疗前经手术或纤维支气管镜所取癌组织及癌旁组织进行免疫组化染色，显微镜下观察。DNA-PKcs定位于细胞核，呈棕黄色或棕褐色颗粒。参考许良中的判断标准，根据染色强度评分，无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;对每例的病理切片随机扫描计数5个高倍视野(40×10)中的总细胞及阳性细胞数，阳性细胞率≤25%为0分、26% ～50%为1分、51% ～75%为2分、＞75%为3分;上述两种计分的乘积＞3分为高表达、≤3分为低表达(阴性表达归为低表达)。

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件。数据比较用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 DNA-PKcs在癌组织及癌旁组织中的表达在73例NSCLC的癌组织中，DNA-PKcs高表达66例、低表达7例，高表达率为90.4%;在相应的癌旁组织中，DNA-PKcs高表达7例、低表达66例，高表达率为9.6%;两种组织中DNA-PKcs的高表达率相比，P ＜0.01。

2.2 癌组织中DNA-PKcs的表达与NSCLC患者临床病理参数的关系 癌组织中DNA-PKcs的表达与患者性别、年龄、病理类型、TNM分期均无关(P均＞0.05)。详见表 1。

表1 DNA-PKcs的表达与NSCLC患者临床病理参数的关系

2.3 癌组织中DNA-PKcs的表达与NSCLC放疗近期疗效的关系 未手术治疗的38例NSCLC患者放疗后，放射敏感组13例，DNA-PKcs高表达12例、低表达1例;放射不敏感组25例，DNA-PKcs高表达22例、低表达3例;两组相比，P ＞0.05。

2.4 癌组织中DNA-PKcs的表达与NSCLC手术患者生存率的关系 35例手术治疗的NSCLC，随访满1 a者30例，存活19例、死亡11例，存活者DNAPKcs高表达17例、低表达2例，死亡者DNA-PKcs高表达10例、低表达1例，两者相比，P＞0.05;随访满2 a者26例，存活11例、死亡15例，存活者DNAPKcs高表达9例、低表达2例，死亡者DNA-PKcs高表达14例、低表达1例，两者相比，P＞0.05。

3 讨论

本研究结果显示，在73例NSCLC的癌组织及癌旁组织中DNA-PKcs均有表达，但在癌组织中的高表达率达90.4%，而在癌旁组织中仅为9.6%，推测DNA-PKcs可能与NSCLC的发生有关;NSCLC癌组织中DNA-PKcs的表达与患者性别、年龄和肿瘤临床分期无关，这与文献［2，4］报道相符。余少平［5］等检测了113例NSCLC组织，结果显示，DNA-PKcs的表达与NSCLC的淋巴结转移无关，在不同病理类型NSCLC中的DNA-PKcs高表达顺序依次为细支气管肺泡癌＞腺癌＞腺鳞癌＞鳞癌。而在本研究中，鳞癌、腺癌和其他类型NSCLC组织中DNA-PKcs的表达差异无统计学意义。

Shintani等［6］的研究显示，DNA-PKcs的表达上调与口腔鳞癌的放射抗拒有关，提示DNA-PKcs可能成为口腔鳞癌放射增敏的一个新靶点。Lee等［7］的研究发现，鼻咽癌组织DNA-PKcs表达越高，放射治疗的效果越差。Ortiz等［8］认为，DNA-PKcs表达增高是预示膀胱癌细胞辐射抗拒的表型。本研究结果显示，DNA-PKcs的表达与NSCLC的放疗近期疗效及术后患者的1、2年生存率无关。但之前我们的研究证实DNA-PKcs反义寡核苷酸可增强肺腺癌A549细胞的放射敏感性［9］，说明DNA-PKcs与肺腺癌细胞的放射敏感性密切相关。本研究中DNAPKcs的表达与NSCLC的放射敏感性之间无关，原因可能有以下几方面:①进入近期疗效分析和生存率分析的病例数太少。②免疫组化技术敏感性的局限以及实验中的各种误差。③肿瘤活体组织中DNA-PKcs的表达受到更多因素的影响，且肿瘤放疗敏感性的影响因素也很多。

［1］Bucci M，Bevan A，Roach M，et al.Advances in radiation therapy:conventional to 3D，to IMRT，to 4D，and beyond［J］.CA Cancer J Clin，2005，55(2):117-134.

［2］郝艳艳，胡雪君，刘云鹏，等.ERCC1、DNA-PKcs蛋白在非小细胞肺癌中的表达与预后的关系［J］.中国肺癌杂志，2008，11(2):226-230.

［3］Xing J，Wu X，Vaporciyan AA，et al.Prognostic significance of ataxia-telangiectasia mutated，DNA-dependent protein kinase catalytic subunit，and Ku heterodimeric regulatory complex 86-kD subunit expression in patients with non-small cell lung cancer［J］.Cancer，2008，112(12):2756-2764.

［4］黄梅芳，李文辉，杨振峰，等.DNA-PKcs在云南宣威富源肺腺癌组织中的表达与分期相关性研究［J］.云南医药，2007，30(4):407-410.

［5］余少平，熊永炎，田素芳，等.NSCLC中DNA-PKcs的表达及其凋亡相关蛋白关系的研究［J］.中国肺癌杂志，2003，6(5):356-359.

［6］Shintani S，Mihara M，Li C，et al.Up-regulation of DNA-dependent protein kinase correlates with radiation resistance in oral squamous cell carcinoma［J］.Cancer Sci，2003，94(10):894-900.

［7］Lee S，Cho K，Park H，et al.Expressions of Ku70 and DNA-PKcs as prognostic indicators of local control in nasopharyngeal carcinoma［J］.Int J Radiat Oncol Biol Phys，2005，62(5):1451-1457.

［8］Ortiz T，Lopez S，Burguillos MA，et al.Radiosensitizer effect of wortmannin in radioresistant bladder tumoral cell lines［J］.Int J Oncol，2004，24(1):169-175.

［9］牛道立，蒋昌斌，甄俊杰，等.DNA-PKCS反义寡核苷酸转染肺腺癌细胞系A549提高放射敏感性的实验研究［J］.中华放射肿瘤学杂志，2009，18(1):73-75.