凝血酶激活的纤溶抑制物基因3’端+1583 A/T多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的关系

曾志良， 陈煜森， 林智君， 冼文川， 钟望涛， 赵 斌， 许志恩

动脉粥样硬化性脑梗死是威胁人类健康与生命的重要原因之一，其发病机制复杂，是多因素、多基因相互作用的结果。凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)在凝血和纤溶的平衡中起重要的分子调节作用［1，2］，参与血栓形成的调节。有研究表明 TAFI血浆水平升高增加脑梗死的风险［3，4］，而且 TAFI血浆水平与TAFI基因启动子区、编码区及3’端非编码区的多态性相关［5～7］。因此我们推测 TAFI基因3’端非编码区的多态性与脑梗死发病相关，为证实这种推测我们分析了中国汉族人群TAFI基因3’端+1583A/T多态性与动脉粥样硬化性脑梗死发病的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象

病例组:225例，男145例，女80例，年龄38～80岁，平均67.60±10.61岁，均为我院于2006年8月～2007年11月在神经内科住院的动脉粥样硬化性脑梗死患者，病程在1w内，均为汉族人，所有病例均经过临床及CT和(或)MRI确诊(依照第四届全国脑血管病学术会议诊断标准)。排除心脏源性栓塞、动脉炎、血液病等其他原因引起的脑梗死。

对照组:184例，男107例，女77例，年龄37～78岁，平均66.11±11.02岁，为我院健康体检者，均为汉族人，无脑卒中史，并经过临床检查和/或影像学检查排除脑卒中，排除感染、发热及炎症性疾病、肝肾功能不全、血液病、自身免疫性疾病等。详细记录入选者的脑血管病危险因素，包括高血压、糖尿病、吸烟、血脂等。所有标本的收集均经其本人或家属同意。

1.2 方法

1.2.1 基因组全血DNA提取 用QIAGEN酶法提取全血DNA。

1.2.2 检测TAFI+1583 A/T多态性 应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP)，引物设计参考 Henry［5］。

1.3 统计学方法

采用SPSS11.5统计分析软件和遗传学数理统计方法进行统计分析，采用基因计数计算各组基因型频率和等位基因频率，Hardy-Weinburg平衡吻合度和基因频率和基因型统计分析采用χ2检验。统计学显著性定为0.05。

2 结果

2.1 TAFI+1583 A/T位点的电泳图

TAFI+1583 A/T的BclI酶结果:BclI酶为双位点内切酶，AA基因型因:350bp和262bp 2个片段;TT基因型:336bp、262bp和14bp 3个片段;AG基因型:350bp、336bp、262bp和14bp 4个片段 (14bp片段由于过小未能显示)，见图1。

2.2 Hardy-Weinburg平衡检验

病例组与对照组TAFI+1583 A/T基因型分布(见表1)符合Hardy-Weinburg平衡，表明具有群体代表性。

2.3 TAFI+1583 A/T位点的基因型及等位

基因频率分析

TAFI+1583 A/T在病例组的A等位基因频率为24.7%，对照组为25.0%，两组比较经χ2检验差异无显著性(P=0.913)。病例组AA基因型为6.7%，对照组为3.8%，两组比较经χ2检验差异无显著性(P=0.202)(见表2)。经性别分层分析其基因型及等位基因频率在病例组和对照组之间的差别亦无显著性。

图1 TAFI+1583 A/T位点扩增片段BclI酶切产物电泳图

表1 两组人群两位点基因型分布的Hardy-Weinburg平衡吻合度检验

表2 TAFI+1583 A/T多态性基因型及等位基因频率与脑梗死的相关性分析

3 讨论

动脉粥样硬化性脑梗死的发病、病程的进展与动脉血栓形成的关系非常密切，在血栓形成过程中血液凝固和纤维蛋白溶解的平衡发挥重要作用。TAFI是由肝脏分泌的一种酶原，在血液凝固和纤维蛋白溶解的平衡中发挥纽带的作用。研究表明血浆高TAFI水平能显著增加急性脑梗死发生的危险性，并提示TAFI可以作为急性脑梗死发生的危险性预测因子［3，4］。健康人血浆TAFI抗原水平的个体差异比较大，很难仅以环境因素来解释，可能主要是受遗传控制的［5～9］。Henry等分析了 TAFI基因启动子区、编码区、3’端非编码区共13个单核酸多态性(SNP)位点与血浆TAFI抗原水平的相关性，结果全部SNP与血浆TAFI抗原水平的强相关，其中3’端非编码区+1583A/T位点可以解释TAFI 30%的遗传可能性［5］。本研究组曾研究TAFI基因编码区291C/T的多态性与脑梗死的相关性，结果提示TAFI基因编码区291C/T的多态性位点的T等位基因可能增加脑梗死的患病风险［10］。Ladenvall等分析了TAFI抗原血浆水平、TAFI基因11个不同位点的SNP与不同亚型缺血性脑卒的相关性，结果TAFI抗原血浆水平与所有缺血性脑卒类型相关，在单位点分析中没有发现SNP与缺血性脑卒中有关联，但单倍体型分析中显示单倍体型H2B与隐源性缺血性脑血管病相关，H2B携带者患病风险增加(P=0.03);H1B可降低小血管病变患病风险，而H2D和H2E可增加小血管病变的风险［11］。有研究表明TAFI基因3’端非编码区较长，该区域的 SNP对TAFI的转录与稳定性可能有重要影响［12，13］。因此有理由相信TAFI基因3’端非编码区的SNP可能与动脉粥样硬化性脑梗死的发病有关。本研究旨在探讨TAFI基因3’端+1583A/T多态性在动脉粥样硬化性脑梗死的关系。

本研究显示，TAFI+1583A/T各基因型及等位基因频率在病例组与对照组均无统计学意义，提示TAFI+1583A/T多态性与脑梗死的发生无关。由于本研究样本不属于大样本量的多中心研究，其结论有一定的局限性。到目前为此，有不少研究表明TAFI基因3’端非编码区的SNP参与TAFI表达的调节，可能通过影响mRNA的加工和稳定性来改变mRNA的生成［14］，携带+1583T等位基因的单倍体型能使转录物稳定性降低［15，16］。鉴于 TAFI+1583A/T在TAFI基因3’端所起的重要作用，有必要进一步研究TAFI+1583A/T多态性与脑梗死的关系。

本研究是国内外首次对中国人群中TAFI基因基因3’端+1583A/T多态性与脑梗死关系进行研究，需要多中心研究大样本量的研究进一步证实，如同时将测定活化的TAFI抗原水平、多个多态性位点与动脉粥样硬化性脑梗死结合起来一同研究分析，更能反映相互关系。

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