ELISA检测中全自动加样引起拖带假阳性现象的对策分析

潘志勇

随着全自动加样设备在血液筛查中的广泛应用，其加样过程导致的拖带现象已引起高度关注。笔者在进行血液标本加样检测过程中，发现抗体强阳性标本，引起拖带现象(以抗-HIV为例)进行统计分析，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 血清标本 均来自我站街头无偿献血者。

1.2 试剂 ELIST试剂为法国伯乐公司生产，在有效期内使用。

1.3 仪器 RSP 150＆BEP III全自动酶免系统深圳赛勒公司提供。

1.4 方法 根据检测项目和试剂说明书的要求，在RSP 150及BEP III控制微机上编制加样程序，加样方向从标本架1起、酶标板从1到12。吸取分配不同的液体试剂或血清标本后，RSP 150按编制程序自动冲洗加样针。

2 结果

2.1 第1例抗-HIV阳性拖带现象检测 出现在抗-HIV同一块酶标板的H2、H3、H4……H7位置上，标本检测OD值见表1。本次实验的Cut off值为0.134，故6份标本5份阳性1份为“灰区”，根据抗-HIV检测规程，6份标本重新双孔复试，结果H2标本检测OD值分别为2.759，2.543仍为强阳性，H3标本OD值分别为0.456，0.403为弱阳性，其余4份样本双孔复试为阴性，把H2、H3标本送市疾控中心HIV确认实验室经蛋白印迹法(WB)确认，H2为抗-HIV阳性，H3为抗-HIV阴性。后追踪相应血袋辩子标本并进行检测，H2样本WB和ELISA结果为阳性，H3样本WB和ELISA均为阴性。

2.2 第2例抗-HIV阳性拖带现象检测 出现在抗-HIV同一块酶标板的E9、E10、E11、E12位置上，标本检测 OD值见表2。本次实验的Cut off值为0.146，4份标本双孔复试，结果E9标本检测OD值分别为3.110，3.188仍为强阳性，其他3份样本双孔复试为阴性，把E9标本送市疾控中心HIV确认实验室经蛋白印迹法(WB)确认，仍为抗-HIV阳性。

表1 第1例拖带阳性检测结果

表2 第2例拖带阳性检测结果

2.3 阳性拖带现象位置的确认 以A、B、C……H表示96孔酶标板的纵列，1、2、3、……12表示96孔酶标板的横列，其标本在酶标板的位置可表示为A1……A12，B1……B12，H1……H12等(见图1)。

图1 拖带现象位置图解

3 讨论

目前，许多血站使用全自动加样器及全自动酶免分析系统进行血液检测。全自动加样器由微机控制，可以快速准确的处理大批量标本，并可保证加样的精密度和一致性，大大减少了劳动强度，避免了手工加样的人为误差［1］，提高了血液检测的质量和水平。加完血清或试剂后，加样针根据编好的程序冲洗加样针，不能做到手工加样，一份标本一个加样头，因为我站使用的永久性加样针，因此从理论上讲仪器在加样运行方向上从左到右之间拖带污染是不可避免的［2］，同样，同一根加样针，加完强阳性标本，冲洗不干净，接着加下一样本，造成样本污染，结果出现假阳性(第1例拖带阳性为此现象)。正因为如此仪器的生产厂家也考虑到了这个问题，加完一种试剂或标本后机器自动冲洗实践证明，一般情况下能避免左右孔之间的拖带污染，但若遇到高浓度Ag、Ab标本，这种拖带污染是存在的，通过多次实验寻求本实验室全自动加样针的最佳清洗程序，尽可能减少拖带污染。

综上所述实验证明，增加加样针的清洗和擦拭次数(最佳清洗和擦拭程序)，可以减少拖带污染。现在市场有专门针对加样污染使用的清洗剂，据报道可以使加样针污染降低。一次性加样针减少了洗涤环节，在保持血液加样的高精确度和自动化的前提下，又可以完全避免由于拖带污染带来的影响［3］。建议血站在血液检测中尽可能使用一次性加样针。但如果出现了这种拖带污染造成的现象时，在对可疑拖带污染阳性标本进行双孔复试和确认时，应使用相应的血袋标本并查看献血者原始资料，并随访原献血者加以证实。

［1］李慧，惠永庆，刘世荣.酶联免疫吸附试验全自动与手工操作方法比较. 中国输血杂志，2000，13(2)：98．

［2］徐树良，谈维，石斌，等.全自动加样仪引起抗-HIV拖带阳性分析. 中国输血杂志，2003，16(2)：106-107．

［3］申俊峰，陆蓉，王军，等.全自动加样仪一次性加样针在血液检测中的应用. 贵州医药，2009，33(3)：264-265．